Normalización de un método de referencia para medir transferrina deficiente en carbohidratos CDT, por HPLC en pacientes alcohólicos

Esta investigación hace parte de la iniciativa mundial interesada en validar el método de Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC) para la identificación y cuantificación de las isoformas de CDT (Helander, Husa, & Jeppsson, 2003) y su aplicación para evaluar éste biomarcador en la población consumidora de bebidas alcohólicas en la ciudad de Bogotá. Para validar el método se utilizaron patrones certificados de suero sanguíneo obtenidos de la firma RECIPE Clinchek® Serum Control. Se empleó un cromatógrafo marca ELITE LACHROME – HITACHI equipado con bomba cuaternaria modelo L-2130; detector UV-VIS modelo L2420 (λ 470 nm) inyector manual, software EZChrom Elite. Una columna de intercambio aniónico SOURCE 15Q ® PE 4.6/100. La separación de las glicoformas CDT se realizó por gradientes usando como solventes de elución: (A) Bis-Tris 10 Mm pH 7; (B) Bis-Tris 10 mm + Cloruro de Sodio (NaCl) 0,5 M, pH 6,2; (C) Bis-Tris 10 mm pH 6,2 y Buffer D NaCl 0,5 M. Se encontró para el método una buena selectividad con valores de resolución entre las bandas cromatográficas, mayores de 1,5 (Snyder, Kirkland, & Glajch, 2012). La curva de calibración a 470 nm resultó ser lineal en el intervalo de concentraciones comprendidas entre 0.25 % P/P y 5,09 % P/P, con coeficientes de correlación para todas las isoformas mayores a 0,9994. El porcentaje de recuperación fue de 99,4% y la curva de recuperación mostro un comportamiento lineal con un coeficiente de 0,9975. Los porcentajes de los coeficientes de variación (% CV) fueron menores a 10% (valores aceptados para muestras biológicas) (Duffau, Guerrero, Roa, & Rodríguez, 2010) lo cual demostró la repetibilidad del método. No se observaron diferencias significativas cuando las medidas fueron realizadas por diferentes analistas y en días diferentes, encontrándose % CV <10%, lo que demuestra que el método presenta buena reproducibilidad. Los límites de detección y cuantificación fueron de 0,24% P/P y 0,25 % P/P. El método se aplicó al análisis de 315 muestras de suero sanguíneo de personas entre 18 y 65 años, asociadas con el consumo de alcohol y a 50 muestras control. Se comprobó mediante el análisis del biomarcador CDT que a temprana edad (18-24 años) se presenta consumo de riesgo y a edades más avanzadas (35-65 años) el consumo de alcohol es crónico y perjudicial con serios problemas de dependencia.

• Tipo de recurso: Trabajo de grado de pregrado
• Fecha de publicación: 2015
• Institución: Universidad Distrital Francisco José de Caldas
• Repositorio: RIUD: repositorio U. Distrital
• Idioma: spa
• OAI Identifier: oai:repository.udistrital.edu.co:11349/25410
• Acceso en línea: http://hdl.handle.net/11349/25410
• Palabra clave: Método de referencia; Transferrina; Carbohidratos CDT; HPLC; Alcoholismo; Licenciatura en Química - Tesis y Disertaciones Académicas; Transferrina - Investigaciones; Transferrina - Mediciones; Alcoholismo - Investigaciones; Reference method; Transferrin; Carbohydrates CDT; HPLC; Alcoholism
• License: Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional