Determinación de la interacción del rotavirus WTEW con las proteínas de choque térmico en la membrana citoplasmática de las células KATO III

En el laboratorio de Biología Molecular de Virus de la Universidad Nacional de Colombia se está investigando si rotavirus WWM, TRUY, Wt1-5, O-ECwt y WTEW (generados en el laboratorio), pueden utilizarse como virus oncolítico. Trabajos previos sugieren que los aislamientos rotavirales infectan las lí...

Full description

Autores:
Tipo de recurso:
Trabajo de grado de pregrado
Fecha de publicación:
2015
Institución:
Universidad Distrital Francisco José de Caldas
Repositorio:
RIUD: repositorio U. Distrital
Idioma:
spa
OAI Identifier:
oai:repository.udistrital.edu.co:11349/15155
Acceso en línea:
http://hdl.handle.net/11349/15155
Palabra clave:
Rotavirus WTEW
Proteínas de choque térmico
Interacción
Adhesión
Penetración
Anticuerpos
Infección
Licenciatura en Química - Tesis y disertaciones académicas
Rotavirus
Virus oncogénico
Neoplasias
Replicación viral
Fenómenos fisiológicos celulares
Rotavirus WTEW
Heat shock proteins
Interaction
antibodys
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Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional
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description En el laboratorio de Biología Molecular de Virus de la Universidad Nacional de Colombia se está investigando si rotavirus WWM, TRUY, Wt1-5, O-ECwt y WTEW (generados en el laboratorio), pueden utilizarse como virus oncolítico. Trabajos previos sugieren que los aislamientos rotavirales infectan las líneas celulares tumorales Sp2/0- Ag14 (mieloma murino), U937 (linfoma histiocitico), REH (leucemia linfocítica aguda), PC3 (adenocarcinoma grado IV de próstata). MDA y MCF-7 (adenocarcinoma de mama) Este trabajo tuvo por objetivo determinar si hay o no interacción del rotavirus WTEW con las proteínas de choque térmico Hsp90, Hsp70, Hsp60, Hsp40 durante la entrada a la línea tumoral KATO III (carcinoma de estómago). Para esto se aislaron fracciones enriquecidas de membranas citoplasmáticas, se incubaron con rotavirus o se bloquearon con anticuerpos específicos anti-Hsp (completos o la porción F(ab’)2) y se adicionó rotavirus MOI 8. La interacción se observó mediante técnicas de ELISA de captura, coinmunoprecipitación y Western Blot. Para determinar el papel funcional de las HSPs, las células se incubaron con anticuerpos F(ab’)2 y luego con rotavirus por 12h a 37°C. El rotavirus se incubó con proteínas HSPs completas solubles durante 1h a 37°C y luego el complejo HSPs-rotavirus se adicionó a las células por 12h a 37°C. La infección en ambos casos se evaluó mediante inmunocitoquímica. Finalmente se incubaron las células con el rotavirus WTEW por 1 h a 4°C y luego se le adicionaron los péptidos sintéticos de cada Hsp por 1h a 4°C dejando por 12 h a 37°C en cámara de CO2. La infección se evaluó por ELISA de captura. Se determinó que existe interacción entre rotavirus WTEW con las HSPs de manera directa y funcional ya que al bloquear o alterar dicha unión se disminuye la infección, lo que sugiere que el rotavirus WTEW interacciona con las HSPs de la línea KATO III facilitando el ingreso del rotavirus a la célula.
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Para esto se aislaron fracciones enriquecidas de membranas citoplasmáticas, se incubaron con rotavirus o se bloquearon con anticuerpos específicos anti-Hsp (completos o la porción F(ab’)2) y se adicionó rotavirus MOI 8. La interacción se observó mediante técnicas de ELISA de captura, coinmunoprecipitación y Western Blot. Para determinar el papel funcional de las HSPs, las células se incubaron con anticuerpos F(ab’)2 y luego con rotavirus por 12h a 37°C. El rotavirus se incubó con proteínas HSPs completas solubles durante 1h a 37°C y luego el complejo HSPs-rotavirus se adicionó a las células por 12h a 37°C. La infección en ambos casos se evaluó mediante inmunocitoquímica. Finalmente se incubaron las células con el rotavirus WTEW por 1 h a 4°C y luego se le adicionaron los péptidos sintéticos de cada Hsp por 1h a 4°C dejando por 12 h a 37°C en cámara de CO2. La infección se evaluó por ELISA de captura. Se determinó que existe interacción entre rotavirus WTEW con las HSPs de manera directa y funcional ya que al bloquear o alterar dicha unión se disminuye la infección, lo que sugiere que el rotavirus WTEW interacciona con las HSPs de la línea KATO III facilitando el ingreso del rotavirus a la célula.In the Molecular Biology of Virus located at Universidad Nacional de Colombia, the research to determine whether rotavirus WWM, Wt1-5, O-ECwt and WTEW (generated in the laboratory) can be used as oncolytic virus. Preliminary research suggests that rotaviral isolates infected tumor cell lines Sp2/0-Ag14 (murine myeloma), U937 (histiocytic lymphoma), REH (Acute Lymphocytic Leukemia), PC3 (prostate adenocarcinoma grade IV). MDA and MCF-7 (breast adenocarcinoma). This study was aimed to determine whether there was or not WTEW rotavirus interaction with heat shock protein Hsp90, Hsp70, Hsp60, Hsp40 during the entry to the tumor cell line KATO III (gastric carcinoma). For this, fractions enriched with cytoplasmic membranes were isolated, incubated with rotavirus or blocked with specific anti-Hsp (complete or portion F(ab')2) and was added rotavirus MOI 8. The interaction was observed by capture ELISA, co-immunoprecipitation and western blotting. To determine the functional role of HSPs, the cells were incubated with antibody F(ab')2 and then with rotavirus for 12 h at 37 °C. Rotavirus was incubated with soluble proteins HSPs complete for 1 h at 37 °C and then the HSPs rotavirus complex was added to the cells for 12 h at 37 °C. In both cases the infection was assessed by immunocytochemistry. Finally cells rotavirus WTEW incubated for 1 h at 4 °C and then were added the synthetic peptides each Hsp for 1 h at 4 °C leaving 12 h at 37 °C in CO2 chamber. Infection was evaluated capture ELISA. It was determined that there is interaction between the rotavirus WTEW and HSPs was direct and functional manner as to block or alter binding said infection is decreased, suggesting that interacts rotavirus WTEW and HSPs of facilitating the entry of rotavirus to the cell KATO III line.pdfspaAtribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacionalhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/Abierto (Texto Completo)http://purl.org/coar/access_right/c_abf2Rotavirus WTEWProteínas de choque térmicoInteracciónAdhesiónPenetraciónAnticuerposInfecciónLicenciatura en Química - Tesis y disertaciones académicasRotavirusVirus oncogénicoNeoplasiasReplicación viralFenómenos fisiológicos celularesRotavirus WTEWHeat shock proteinsInteractionantibodysDeterminación de la interacción del rotavirus WTEW con las proteínas de choque térmico en la membrana citoplasmática de las células KATO IIIDetermination of interaction with rotavirus WTEW heat shock protein in cytoplasmic membrane cells KATO IIICreación o Interpretacióninfo:eu-repo/semantics/bachelorThesishttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fTHUMBNAILVelandiaBautistaErikaLiseth2015.pdf.jpgVelandiaBautistaErikaLiseth2015.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg5579http://repository.udistrital.edu.co/bitstream/11349/15155/6/VelandiaBautistaErikaLiseth2015.pdf.jpg56610737c722521fba661a8aa9199aa7MD56open accessORIGINALVelandiaBautistaErikaLiseth2015.pdfVelandiaBautistaErikaLiseth2015.pdfTrabajo de Gradoapplication/pdf1959411http://repository.udistrital.edu.co/bitstream/11349/15155/1/VelandiaBautistaErikaLiseth2015.pdf40ad85b7eef63d6e20061fb0eb78783dMD51open accessCC-LICENSElicense_urllicense_urltext/plain; charset=utf-843http://repository.udistrital.edu.co/bitstream/11349/15155/2/license_url321f3992dd3875151d8801b773ab32edMD52open accesslicense_textlicense_texttext/html; charset=utf-821082http://repository.udistrital.edu.co/bitstream/11349/15155/3/license_text0c4c90d15030798a831b448203448a1aMD53open accesslicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; 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