Estandarización de la técnica de electroforesis en gel con gradiente desnaturalizante (DGGE) para el análisis de poblaciones microbianas en bioreactores de cultivo mixto (2017)
En este trabajo se realizó la estandarización de DGGE a partir de diferentes biorreactores con cultivos mixtos de microorganismos, para los cuales se normalizó un método de extracción de ADN para la amplificación adicional del gen 16S rRNA de los cebadores 338F y 518R que generan un Amplicón de la región V3 del gen Por PCR, un método que también fue estandarizado en el laboratorio para el posterior análisis por la técnica DGGE. Se encontró que la temperatura de recocido es una parte fundamental para el desarrollo de la PCR ya que es el momento en el que se genera la hibridación entre los cebadores y la cadena de ADN, el protocolo TDown es una técnica importante, pero reduce significativamente la selectividad De los cebadores en el momento de la amplificación del gen de interés, para las muestras de cultivos mixtos que se obtuvieron el DMSO resultó ser el mejor reactivo para la optimización de la PCR, al realizar electroforesis en gel de poliacrilamida, el bromuro de etidio es un Pero no se puede añadir previamente en el gel, si no es que la tinción posterior es necesaria con la solución, la PCR es una técnica sensible a varios factores, pero es muy útil para la caracterización de microorganismos debido a su alta selectividad. En cuanto a la DGGE, para la estandarización completa del método, es necesario hacer un mayor número de repeticiones con diferentes muestras para validarlo completamente.