Desarrollo de inmunógenos recombinantes tipo fosfolipasa A2 y toxina de tres dedos para la producción de antiofídicos de interés clínico en Colombia (2023)
RESUMEN: En Colombia, los envenenamientos producidos por los géneros Micrurus y Crotalus representan un problema de salud pública debido a los efectos neurotóxicos de sus venenos, y a la escasez de antivenenos. La producción y distribución de dichos biológicos para estas especies es limitada debido a la difícil obtención y disponibilidad de los venenos, y a la baja neutralización de los antivenenos polivalentes. En este sentido, el objetivo de esta investigación fue desarrollar inmunógenos recombinantes tipo fosfolipasa A2 (PLA2) y toxinas de tres dedos (3FTxs) para producir antivenenos en Colombia. La estrategia metodológica se basó en el diseño y síntesis de tres construcciones genéticas a partir de las secuencias de aminoácidos de α y β-neurotoxinas más abundantes de los venenos de Micrurus dumerilii, Micrurus mipartitus y Crotalus durissus terrificus, las cuales, fueron clonadas y expresadas en la cepa BL21 (DE3) de Escherichia coli, purificadas mediante distintos métodos cromatográficos, y caracterizadas biológicamente in vitro (actividad fosfolipasa A2, anticoagulante) e in vivo (letal, edematizante y miotóxica). Estas toxinas recombinantes fueron usadas en un esquema de inmunización animal para la producción de sueros hiperinmunes. Para evaluar los anticuerpos específicos generados, se monitoreó la respuesta inmune y el reconocimiento inmunológico mediante inmunoensayos de ELISA y Western blot. Además, se evaluó la capacidad neutralizante de los anticuerpos anti-toxina recombinante. Como resultados, se obtuvieron las toxinas recombinantes His-rMdumPLA2, HisrMipartoxin-1 y HisrCTX-CBb. Estas toxinas fueron detectadas por SDS-PAGE como cuerpos de inclusión y sus masas moleculares fueron ~17 kDa, ~11 kDa y ~17 kDa, respectivamente. His-rMdumPLA2, HisrMipartoxin-1 y HisrCTX-CBb se purificaron mediante RP-HPLC en tiempos de elución de 18.2, 16.0 y 17.3 minutos, respectivamente. Estas toxinas no evidenciaron efecto letal en ratón, pero presentaron reconocimiento inmunológico cruzado inter-especie. His-rMdumPLA2 y HisrCTX-CBb presentaron actividad biológica, mientras que His-rMdumPLA2 y HisrMipartoxin-1 fueron capaces de generar anticuerpos con capacidad neutralizante. Estos hallazgos sugieren su potencial como inmunógenos para la producción de antivenenos anti-coral y anti-crotálico.