Papel de la vitamina D en la respuesta de macrófagos cultivados en presencia de partículas inactivadas de SARS-CoV-2 (2023)
RESUMEN: Los hallazgos clínicos e histopatológicos demuestran la importancia de mecanismos de inmunopatogénesis en casos severos de la infección por SARSCoV-2. Los macrófagos son una de las poblaciones celulares claves en estos mecanismos. Su activación es consecuencia de la injuria de células infectadas, en particular los neumocitos tipo 2; aunque también puede ser debida a la interacción de los macrófagos con partículas virales y/o la proteína viral S (Spike) y subsecuente reconocimiento por los receptores tipo Toll, aun en ausencia de infección productiva. Adicionalmente, estos procesos de activación y función de macrófagos pueden ser exacerbados en condiciones de deficiencia de vitamina D. El objetivo del presente trabajo es evaluar el efecto in vitro de partículas inactivadas de SARS-CoV-2 en la regulación funcional de macrófagos en presencia de la vitamina D. Se determinará la producción de citoquinas proinflamatorias mediante citometría de flujo (CBA kit) y el estado de activación de vías de señalización mediante la expresión del gen NF-kB por PCR en tiempo real y la expresión de ERK 1/2 total y fosforilado por Western Blot en cultivos de la línea celular U937,previa diferenciación, en presencia de partículas inactivadas de SARS-CoV-2, variantes Wuhan y Omicron, y de vitamina D. El aislamiento viral se realizó en la línea celular Vero-E6 en platos con una confluencia del 80% inoculados con 80 μl del aspirado nasofaríngeo obtenido de pacientes con diagnóstico de COVID-19 mediante el protocolo Berlín de RT-PCR para SARS-CoV-2. Los virus aislados se titularon mediante ensayo en placa de monocapas de células Vero-E6 y posteriormente fueron inactivados mediante exposición a luz ultravioleta por 30 min. La caracterización genómica de los aislados se realizó por secuenciación de nueva generación. Los ensayos en la línea celular U937, previa diferenciación en presencia de phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA), y las partículas virales inactivadas en presencia de vitamina D están en desarrollo. Los resultados del estudio permitirán aportar evidencia in vitro del papel de la vitamina D en la regulación de la respuesta de los macrófagos cultivados en presencia de partículas inactivadas de SARS-CoV-2 y comparar la respuesta según la variante.