Mantenimiento de la inactivación del cromosoma X : exploración con RNA-interferente contra el gen de susceptibilidad a cáncer de mama (BRCA1) (2015)
RESUMEN: La inactivación del cromosoma X (XCI) es un evento epigenético que suprime muchos genes en uno de los dosX en los mamíferos hembras. El mantenimiento de ese estado excepcional de herencia somática depende en partedel remodelamiento de la cromatina. Hace tres décadas publicamos la primera evidencia de la existencia de dosXaen células de cáncer de mama. Y evidencias recientes involucran a la proteína BRCA1 con remodelacióncromatínica. Partiendo de estas observaciones, una citogenética y otra molecular, planteamos la posible relaciónentre BRCA1 y XCI. Para investigarlo, se abrogó la expresión de BRCA1 en células XiXa, utilizando shRNAscontra el mRNA de la proteína BRCA1. De los clones recombinantes en DH5alpha, se extrajeron los plásmidospsiSTRIKE-Neo-shRNAs, y con ellos se lipo-transfectaron células XiXa. Mediante Western-blot se confi rmó elsilenciamiento de la proteína BRCA1. Con la secuencia Sh2-RNA de mayor grado de silenciamiento anti BRCA1,se encontró expresión QRT-PCR aumentada en las transfectadas, y para los genes POLA1, PGK1 y OCRL ligadosa regiones que no escapan a la inactivación, y para el gen control ZFX que normalmente si escapa a la inactivación(control interno).En conclusión, aunque el RNAi anti-BRCA1 no afecta la metilación de promotores de los genes examinadossinténicos al X, si perturba sus niveles de expresión, sugiriendo que BRCA1 si puede afectar el estado de mante-nimiento de inactivación de esos loci, lo cual no es incompatible con la postulada acción epigenética de BRCA1sobre la remodelación de la cromatina