Caracterización del crioprecipitado obtenido como subproducto del proceso de fraccionamiento de plasma humano para su potencial uso como materia prima en la obtención de proteínas de interés terapéutico. Un enfoque para la obtención de Factor VIII de coagulación.

RESUMEN : El crioprecipitado obtenido como subproducto del proceso de fraccionamiento de plasma humano en la compañía farmaceutica LifeFactors es una materia prima potencial para la obtención de proteínas de interés terapéutico. Entre otros, el crioprecipitado puede contener: FVIII de coagulación, f...

Full description

Autores:
Gómez Manquillo, Frank Alexis
Tipo de recurso:
Trabajo de grado de pregrado
Fecha de publicación:
2022
Institución:
Universidad de Antioquia
Repositorio:
Repositorio UdeA
Idioma:
spa
OAI Identifier:
oai:bibliotecadigital.udea.edu.co:10495/29035
Acceso en línea:
http://hdl.handle.net/10495/29035
Palabra clave:
Plasma sanguíneo
Blood plasma
Purification
Purificación
Ingeniería bioquímica
Biochemical engineering
Plasma sanguíneo
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Hemoderivados
Actividad biológica
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description RESUMEN : El crioprecipitado obtenido como subproducto del proceso de fraccionamiento de plasma humano en la compañía farmaceutica LifeFactors es una materia prima potencial para la obtención de proteínas de interés terapéutico. Entre otros, el crioprecipitado puede contener: FVIII de coagulación, factor de Von Willebrand, fibrinógeno, proteasas e inhibidores de proteasas. En el presente trabajo inicialmente se determinaron los valores de rendimiento de crioprecipitado, concentración de proteína total y análisis de composición proteica por electroforesis, bajo las condiciones estandarizadas de proceso en las primeras etapas de fraccionamiento de plasma humano. Los valores hallados fueron 1.12±0.25 % p/v para el rendimiento de crioprecipitado, y 13.64±2.55 g/dL para la concentración de proteína total en el crioprecipitado. Adicionalmente, y con base en un análisis densitométrico del gel de electroforesis, se determinó que el crioprecipitado contiene niveles significativamente altos de FVIII, en comparación con el criosobrenadante. A partir de los datos obtenidos de rendimiento de crioprecipitado y concentración de proteína total, se realizó un análisis estadístico para determinar si existe alguna correlación entre el volumen de plasma, la concentración de proteína y el rendimiento de crioprecipitado. Se encontró que hay correlación entre las variables concentración de proteína vs rendimiento de crioprecipitado; las variables rendimiento de crioprecipitado vs volumen de plasma no mostraron correlación. Finalmente, se analizó la actividad biológica del FVIII como valor determinante de la calidad del crioprecipitado como materia prima y se encontró un valor máximo de 4.92 UI/mL. Los niveles de actividad dejan ver la necesidad de mejorar las condiciones de obtención del crioprecipitado para que sea viable la obtención de FVIII con fines terapéuticos y a nivel comercial. Asi, a partir de la literatura y del trabajo experimental desarrollado, se determinaron las variables críticas a tener en cuenta en el proceso de purificación del FVIII con miras a su comercialización.
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Adicionalmente, y con base en un análisis densitométrico del gel de electroforesis, se determinó que el crioprecipitado contiene niveles significativamente altos de FVIII, en comparación con el criosobrenadante. A partir de los datos obtenidos de rendimiento de crioprecipitado y concentración de proteína total, se realizó un análisis estadístico para determinar si existe alguna correlación entre el volumen de plasma, la concentración de proteína y el rendimiento de crioprecipitado. Se encontró que hay correlación entre las variables concentración de proteína vs rendimiento de crioprecipitado; las variables rendimiento de crioprecipitado vs volumen de plasma no mostraron correlación. Finalmente, se analizó la actividad biológica del FVIII como valor determinante de la calidad del crioprecipitado como materia prima y se encontró un valor máximo de 4.92 UI/mL. Los niveles de actividad dejan ver la necesidad de mejorar las condiciones de obtención del crioprecipitado para que sea viable la obtención de FVIII con fines terapéuticos y a nivel comercial. Asi, a partir de la literatura y del trabajo experimental desarrollado, se determinaron las variables críticas a tener en cuenta en el proceso de purificación del FVIII con miras a su comercialización.ABSTRACT : Cryoprecipitate obtained as a by-product of the human plasma fractionation process at the pharmaceutical company LifeFactors is a potential raw material for obtaining proteins of therapeutic interest. Among others, the cryoprecipitate may contain: coagulation FVIII, Von Willebrand factor, fibrinogen, proteases and protease inhibitors. In the present work, the cryoprecipitate yield values, total protein concentration and analysis of protected composition by electrophoresis were determined, under standardized process conditions in the first stages of fractionation of human plasma. The values found were 1.12 ± 0.25% w / v for the cryoprecipitate yield, and 13.64 ± 2.55 g / dL for the total protein concentration in the cryoprecipitate. Furthermore, and based on a densitometric analysis of the electrophoresis gel, it was determined that the cryoprecipitate contains significantly higher levels of FVIII, compared to the cryosupernatant. From the data obtained on cryoprecipitate yield and total protein concentration, a statistical analysis was performed to determine if there is any correlation between plasma volume, protein concentration, and cryoprecipitate yield. It was found that there is a correlation between the variables protein concentration vs cryoprecipitate yield; the variables cryoprecipitate yield vs plasma volume did not correlate. Finally, the biological activity of FVIII was analyzed as a determining value of the quality of the cryoprecipitate as raw material and a maximum value of 4.92 IU / mL was found. The levels of activity reveal the need to improve the conditions for obtaining the cryoprecipitate so that it is viable to obtain FVIII for therapeutic purposes and at a commercial level. Thus, from the literature and the experimental work developed, the critical variables to be taken into account in the FVIII purification process were determined with a view to its commercialization.29application/pdfspainfo:eu-repo/semantics/draftinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesishttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fhttps://purl.org/redcol/resource_type/TPTesis/Trabajo de grado - Monografía - Pregradohttp://purl.org/coar/version/c_b1a7d7d4d402bcceinfo:eu-repo/semantics/openAccesshttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/co/http://purl.org/coar/access_right/c_abf2https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/Plasma sanguíneoBlood plasmaPurificationPurificaciónIngeniería bioquímicaBiochemical engineeringPlasma sanguíneoBlood plasmaHemoderivadosActividad biológicahttp://aims.fao.org/aos/agrovoc/c_27461http://aims.fao.org/aos/agrovoc/c_9320http://id.loc.gov/authorities/subjects/sh85015001Caracterización del crioprecipitado obtenido como subproducto del proceso de fraccionamiento de plasma humano para su potencial uso como materia prima en la obtención de proteínas de interés terapéutico. Un enfoque para la obtención de Factor VIII de coagulación.El Carmen de Viboral - ColombiaIngeniero BioquímicoPregradoFacultad de Ingeniería. 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