El compuesto 18- (ftalimida-2-il)-ferruginol afecta la traducción de proteínas virales y la remodelación de actina durante la infección in vitro por el virus dengue (2020)
RESUMEN: La infección por el virus dengue es la arbovirosis más importante del mundo. Sin embargo, no se han aprobado medicamentos antivirales para su tratamiento. Como un nuevo enfoque de investigación antiviral, los denominados antivirales dirigidos al hospedero (HTA, por sus siglas en inglés) aparecen como una estrategia prometedora, principalmente por su alta barrera genética y su baja probabilidad de seleccionar cepas virales resistentes a los medicamentos. Utilizando ensayos de unidades formadoras de placa, acoplamiento molecular, microscopía de fluorescencia cuantitativa y análisis de imágenes, encontramos que el compuesto18-(ftalimida-2-il)-ferruginol, un análogo semi-sintético del ferruginol, se acopla con alta afinidad a la GTPasa RhoA (-9.8 kcal/mol) y a la proteína NS5 de DENV-2 (-9.6 kcal/mol). Además, esta molécula reduce drásticamente la formación de filamentos de actina e induce cambios en la morfología celular cuando se agrega a los cultivos celulares antes o después de la infección por DENV-2, pero no tiene efecto sobre los microtúbulos o filamentos intermedios. La activación de RhoA en células infectadas se vio afectada cuando el compuesto se adicionó después de 6 h.p.i. Asimismo, esta molécula disminuye la intensidad de fluorescencia de la proteína de la envoltura viral, la proteína NS3 y el dsRNA, generando alteraciones en el patrón de distribución de estos componentes virales, así como la reducción del rendimiento del virus, especialmente cuando se adicionó después de 6 y 12 h.p.i. Los ensayos de Western blot y RT-qPCR revelan que este análogo disminuye la traducción de la poliproteína viral cuando se utilizó una línea celular que expresa establemente un replicón de DENV-2 y el virus recombinante, RLuc-tagged DENV-2. El tratamiento antes y en las primeras etapas de la infección no afecta la adhesión y/o entrada viral. Por otra parte, los experimentos de citometría de flujo y wound-healing sugieren que los efectos celulares provocados por este compuesto no se relacionan con eventos apoptóticos tempranos y que podrían ser reversibles. En general, estos hallazgos sugieren que el compuesto 18-(ftalimida-2-il)-ferruginol tiene un mecanismo de acción relacionado con HTA, posiblemente interrumpiendo la traducción de la poliproteína de DENV-2 a través de la alteración de la remodelación de actina y alterando otros procesos celulares y virales relacionados con la formación de los complejos replicativos.