Validación analítica de un kit de extracción in house para la amplificación de ácido ribonucleico de sars-cov-2
La emergencia sanitaria más grave de los últimos tiempos, producida por el virus SARS-CoV-2 generó un colapso en la salud y la economía de casi todos los países del mundo y ocasionó un déficit de recursos para su detección. La repentina aparición de la enfermedad trajo consigo un arduo proceso inves...
- Autores:
-
Dueñas Argumedo, Yemima
- Tipo de recurso:
- Trabajo de grado de pregrado
- Fecha de publicación:
- 2023
- Institución:
- Universidad de Córdoba
- Repositorio:
- Repositorio Institucional Unicórdoba
- Idioma:
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- OAI Identifier:
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- Acceso en línea:
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- Palabra clave:
- Extracción
Ácido ribonucleico
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La emergencia sanitaria más grave de los últimos tiempos, producida por el virus SARS-CoV-2 generó un colapso en la salud y la economía de casi todos los países del mundo y ocasionó un déficit de recursos para su detección. La repentina aparición de la enfermedad trajo consigo un arduo proceso investigativo para la invención y mejora de técnicas moleculares indispensables para la detección de este virus. En este sentido, investigadores del Instituto de Investigaciones Biológicas del Trópico IIBT de la Universidad de Córdoba desarrollaron un kit in house para la extracción de ARN de SARS-CoV-2 y otros agentes biológicos de alto riesgo. En el siguiente trabajo, se tuvo como objetivo validar un kit de extracción in house para la amplificación de ácido ribonucleico de SARS-CoV-2, en el cual se determinó la estabilidad del kit, se realizó extracción de ARN a 50 muestras de hisopados nasofaríngeos de pacientes con síntomas de COVID-19 procesando la misma muestra con un kit comercial por perlas magnéticas y el kit de extracción in house. Se cuantificó y determinó la pureza del ARN extraído con los distintos protocolos mediante un espectrofotómetro, se realizó una RT-qPCR para detectar Gen E (gen de la proteína E de SARS-CoV-2) y RNasa P (Gen utilizado como control interno) y los resultados de Cq obtenidos para cada kit fueron comparados. Se determinó un porcentaje de positividad para estos datos. |
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En el siguiente trabajo, se tuvo como objetivo validar un kit de extracción in house para la amplificación de ácido ribonucleico de SARS-CoV-2, en el cual se determinó la estabilidad del kit, se realizó extracción de ARN a 50 muestras de hisopados nasofaríngeos de pacientes con síntomas de COVID-19 procesando la misma muestra con un kit comercial por perlas magnéticas y el kit de extracción in house. Se cuantificó y determinó la pureza del ARN extraído con los distintos protocolos mediante un espectrofotómetro, se realizó una RT-qPCR para detectar Gen E (gen de la proteína E de SARS-CoV-2) y RNasa P (Gen utilizado como control interno) y los resultados de Cq obtenidos para cada kit fueron comparados. Se determinó un porcentaje de positividad para estos datos. 1. INTRODUCCIÓN ...................................................................................................... 12. OBJETIVOS ............................................................................................................. 3Objetivo General ........................................................................................................ 3Objetivos Específicos ................................................................................................ 33. MARCO REFERENCIAL .......................................................................................... 4Antecedentes ............................................................................................................. 4Generalidades de SARS-CoV-2 ................................................................................. 5Métodos de extracción o aislamiento de ácido ribonucleico (ARN) ..................... 8Validación de pruebas diagnósticas ......................................................................... 134. METODOLOGÍA ..................................................................................................... 15Tipo de estudio ........................................................................................................ 15Obtención y almacenamiento de muestras ........................................................... 15Metodología desarrollada en el objetivo específico 1: ......................................... 15Metodología desarrollada en el objetivo específico 2: ......................................... 19Metodología desarrollada en el objetivo específico 3: ......................................... 265. RESULTADOS ....................................................................................................... 27Estabilidad de la formulación del buffer de lisis del kit de extracción in house 27Comparación de parámetros de pureza y concentración del ácido ribonucleico de SARS-CoV-2 extraído mediante el kit in house y un kit comercial de extracción por perlas magnéticas .......................................................................... 31Precisión diagnóstica del kit in house en la detección de material genético de SARS-CoV-2. ................................................................................................................ 336. DISCUSIÓN ............................................................................................................ 367. RECOMENDACIONES .......................................................................................... 398. CONCLUSIONES ................................................................................................... 409. BIBLIOGRAFIA ...................................................................................................... 4110. ANEXOS ............................................................................................................. 44PregradoBiólogo(a)Pasantíasapplication/pdfspaCopyright Universidad de Córdoba, 2023https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/info:eu-repo/semantics/openAccessAtribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional (CC BY-NC-ND 4.0)http://purl.org/coar/access_right/c_abf2Validación analítica de un kit de extracción in house para la amplificación de ácido ribonucleico de sars-cov-2Trabajo de grado - Pregradoinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesishttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fTexthttp://purl.org/coar/version/c_71e4c1898caa6e32ExtracciónÁcido ribonucleicoSARS-CoV-2ValidaciónAmplificaciónGenKit in houseExtractionRibonucleic acidSARS-CoV-2ValidationAmplificationGenKit in houseFacultad de Ciencias BásicasMontería, Córdoba, ColombiaBiología1. ORGANIZACIÓN MUNDIAL DE LA SALUD. 2020.2. Orus A. SATISTA. 2023. Número acumulado de casos de coronavirus en el mundo desde el 22 de enero de 2020 hasta el 17 de mayo de 2023.3. Santamaria P. Repositorio Universidad de los Andes. 2021. Comparación de técnicas moleculares para el diagnóstico de la infección por SARS-CoV-2 o COVID 19.4. Ríos Sánchez E, Calleros E, González Zamora A, Rubio J, Martínez OC, Martínez A, et al. Comparative analysis of different DNA extraction methods and their genotyping efficiency in Mexican population. Acta Univ. 2016 Sep;26(4):56–65.5. Ravi N, Cortade DL, Ng E, Wang SX. Diagnostics for SARS-CoV-2 detection: A comprehensive review of the FDA-EUA COVID-19 testing landscape. Biosens Bioelectron. 2020 Oct;165:112454.6. Ali N, Rampazzo R de CP, Costa ADT, Krieger MA. Current Nucleic Acid Extraction Methods and Their Implications to Point-of-Care Diagnostics. Biomed Res Int. 2017;2017:1–13.7. MinSalud. Coronavirus (Covid 19). 2020.8. Comité Internacional de Taxonomía de Virus (ICTV). Taxonomía de Virus . 2022.9. 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