Determinación de la unión a reticulocitos humanos de los fragmentos conservado y variable de la proteína TRAMP de Plasmodium Vivax.
Plasmodium sp. es el causante de malaria una de las enfermedades más antiguas, el cual contiene todo un sistema de invasión mediada por proteínas secretadas por diferentes organelos presentes en su estructura, estas proteínas aunque bien caracterizadas y estudiadas, en gran proporción las de especie...
- Autores:
-
Bareño Niño, Daniela Catalina
Aparicio Rodríguez, Giselle
- Tipo de recurso:
- Trabajo de grado de pregrado
- Fecha de publicación:
- 2020
- Institución:
- Colegio Mayor de Cundinamarca
- Repositorio:
- Repositorio Colegio Mayor de Cundinamarca
- Idioma:
- spa
- OAI Identifier:
- oai:repositorio.unicolmayor.edu.co:unicolmayor/91
- Acceso en línea:
- https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/91
- Palabra clave:
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Plasmodium vivax
Proteína
Reticulocitos
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- closedAccess
- License
- Derechos Reservados - Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2020
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Plasmodium sp. es el causante de malaria una de las enfermedades más antiguas, el cual contiene todo un sistema de invasión mediada por proteínas secretadas por diferentes organelos presentes en su estructura, estas proteínas aunque bien caracterizadas y estudiadas, en gran proporción las de especies que concurren en un cuadro clínico en humanos no están cubiertas por procesos de investigación en un 100% por lo que es necesario y la obtención de esas proteínas faltantes de manera in vitro bajo sistemas de expresión y ese es el propósito de este trabajo, pues es un aporte continuo de gran amplitud investigativa que otorga resultados significativos para la comprensión de la misma y a su vez propone un adelanto en procesos de mitigación en la especie Plasmodium vivax En este estudio se obtuvo de manera recombinante la proteína PvTRAMP fragmentada en una porción conservada y una variable de Plasmodium vivax empleando un sistema de expresión procariota Escherichia coli, con un posterior enriquecimiento de reticulocitos humanos a los cuales tiene tropismo y con estos por primera vez fueron realizados ensayos de unión que esclarecen la actividad de dicha proteína y favorecen comprensión de su papel en la invasión, ya que es una proteína que se encuentra en el merozoito lo cual nos indica que puede tener un papel revelador en la invasión a células diana. Se determinó que en efecto los fragmentos variable y conservado de la proteína PvTRAMP poseen capacidad de unión tanto a reticulocitos humanos como a glóbulos rojos maduros, dejando abierta una línea de investigación útil en la propuesta de dicha proteína como componente candidato a la vacuna contra el cuadro malárico causado por Plasmodium vivax |
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https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/91/4/license.txt https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/91/9/Giselle%20Aparicio%20R-%20TRAMP.pdf.txt https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/91/13/ESCRITO%20FINAL%20FRAGMENTOS%20DE%20PROTEINA%20TRAMP-%20Giselle%20Aparicio%20R.pdf.txt https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/91/15/Cartas%20derechos%20de%20autor.pdf.txt https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/91/10/Giselle%20Aparicio%20R-%20TRAMP.pdf.jpg https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/91/14/ESCRITO%20FINAL%20FRAGMENTOS%20DE%20PROTEINA%20TRAMP-%20Giselle%20Aparicio%20R.pdf.jpg https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/91/16/Cartas%20derechos%20de%20autor.pdf.jpg https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/91/17/ESCRITO%20FINAL%20FRAGMENTOS%20DE%20PROTEINA%20TRAMP-%20Giselle%20Aparicio%20R.pdf https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/91/18/Giselle%20Aparicio%20R-%20TRAMP.pdf https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/91/19/Cartas%20derechos%20de%20autor.pdf |
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Hernández Rojas, Edith del Carmen691add7415cca2135c3de6050313997bRicaurte Contreras, Laura Alejandra38dd5a28348a3202752f6ae1ae82862eBareño Niño, Daniela Catalina6bede0c1ba079f91abff2cae3c6d3fe7Aparicio Rodríguez, Gisellec567bcc9be9d19218ccb70d3b871ab982021-05-25T17:52:06Z2021-05-25T17:52:06Z2020https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/91Plasmodium sp. es el causante de malaria una de las enfermedades más antiguas, el cual contiene todo un sistema de invasión mediada por proteínas secretadas por diferentes organelos presentes en su estructura, estas proteínas aunque bien caracterizadas y estudiadas, en gran proporción las de especies que concurren en un cuadro clínico en humanos no están cubiertas por procesos de investigación en un 100% por lo que es necesario y la obtención de esas proteínas faltantes de manera in vitro bajo sistemas de expresión y ese es el propósito de este trabajo, pues es un aporte continuo de gran amplitud investigativa que otorga resultados significativos para la comprensión de la misma y a su vez propone un adelanto en procesos de mitigación en la especie Plasmodium vivax En este estudio se obtuvo de manera recombinante la proteína PvTRAMP fragmentada en una porción conservada y una variable de Plasmodium vivax empleando un sistema de expresión procariota Escherichia coli, con un posterior enriquecimiento de reticulocitos humanos a los cuales tiene tropismo y con estos por primera vez fueron realizados ensayos de unión que esclarecen la actividad de dicha proteína y favorecen comprensión de su papel en la invasión, ya que es una proteína que se encuentra en el merozoito lo cual nos indica que puede tener un papel revelador en la invasión a células diana. Se determinó que en efecto los fragmentos variable y conservado de la proteína PvTRAMP poseen capacidad de unión tanto a reticulocitos humanos como a glóbulos rojos maduros, dejando abierta una línea de investigación útil en la propuesta de dicha proteína como componente candidato a la vacuna contra el cuadro malárico causado por Plasmodium vivaxPlasmodium sp. It is the cause of malaria one of the oldest diseases, which contains a whole system of invasion mediated by proteins secreted by different organisms present in its structure, these proteins although well characterized and studied, in large proportion the species of species that concur in a clinical picture in humans they are not covered by research processes 100% for what is necessary and the obtaining of those missing proteins in vitro under expression systems and that is the purpose of this work, as it is a contribution continuum of great investigative breadth that provides significant results for its understanding and in turn proposes an advance in mitigation processes in the Plasmodium vivax species. In this study, the TRAMP protein fragmented into a conserved portion and a Plasmodium vivax variable are obtained recombinantly using a prokaryotic expression system Escherichia coli, with a subsequent enrichment of human reticulocytes to which it has tropism and with these for the first time they were They carried out binding assays that clarify the activity of this protein and promote understanding of its role in invasion, since it is a protein found in the merozoite, which indicates that it may have a revealing role in invading target cells. Indeed, it was determined that the variable and conserved fragments of the PvTRAMP protein possess non-specific binding capacity for both human reticulocytes and mature red blood cells, leaving open a useful line of research in the proposal of said protein as a candidate component of the vaccine against the malaria picture caused by Plasmodium vivax.1. INTRODUCCIÓN 2. OBJETIVOS 2.1. GENERAL 2.2. ESPECIFICO 3. ANTECEDENTES 4. MARCO TEÓRICO 4.1 MALARIA 4.2 CARACTERÍSTICAS DEL AGENTE CAUSAL DE MALARIA 4.3 Plasmodium spp 4.3.1 MECANISMO DE INVASIÒN 4.3.2 CICLO DE VIDA 4.4 GENERALIDADES DE Plasmodium vivax 4.5 CONFORMACIÓN ESTRUCTURAL Y PROTEÍNAS DE Plasmodium spp 4.6 PROTEÍNA TRAMP 5. METODOLOGÍA 5.1 AMPLIFICACIÓN DEL FRAGMENTO CONSERVADA Y VARIABLE DEL GEN pvtramp 5.1.1 MUESTRAS 5.1.2 DISEÑO DE CEBADORES 5.1.3 PCR CONVENCIONAL 5.2 CLONACIÓN DEL FRAGMENTO CONSERVADO Y FRAGMENTO VARIABLE DE pvtramp AL VECTOR pET32b+ 5.3 TRANSFORMACIÓN EN CÉLULAS JM109 Y SECUENCIACIÓN 5.4 EXPRESIÓN DE PROTEÍNAS RECOMBINANTES EN CÉLULAS BL21-DE3 5.5 VERIFICACIÓN DE LA EXPRESIÓN DE LOS FRAGMENTOS DE PvTRAMP POR MEDIO DE WESTERN BLOT. 5.6 PURIFICACIÓN DE LA PROTEÍNA POR CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD USANDO RESINA DE NÍQUEL. 5.7 OBTENCIÓN DE RETICULOCITOS HUMANOS 5.8 DETERMINACIÓN DE UNIÓN DE LA PROTEÍNA RECOMBINANTE PvTRAMP A RETICULOCITOS HUMANOS 6. RESULTADOS 6.1 AMPLIFICACIÓN DE LA FRAGMENTO CONSERVADO Y FRAGMENTO VARIABLE DEL GEN pvtramp 6.2 VERIFICACIÓN DE LA TRANSFORMACIÓN POR MEDIO DE PCR DE COLONIA. 6.3. ANALISIS DE LA SECUENCIACIÓN ENVIADA POR MACROGEN 6.4. WESTERN BLOT PARA LA CONFIRMACIÓN DE LA OBTENCIÓN DE LA PROTEINA EXPRESADA 6.4.1 EXPRESION PILOTO 6.4.2 EXPRESION POR HORAS 6.4.3 EXPRESION A GRAN ESCALA 6.5 PURIFICACIÓN DE PvTRAMP-RC Y PvTRAMP-RV POR CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD USANDO RESINA DE NÍQUEL 6.6 ANALISIS DE UNION DE LA PROTEÍNA PvTRAMP A RETICULOCITOS HUMANOS 7. DISCUSIÓN 8. CONCLUSIONES 9. RECOMENDACIONES 10. BIBLIOGRAFIA 11. ANEXOSPregradoBacteriólogo(a) y Laboratorista Clínico105p.application/pdfspaUniversidad Colegio Mayor de CundinamarcaFacultad de Ciencias de la SaludBogotá D.CBacteriología y Laboratorio ClínicoDerechos Reservados - Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2020https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/info:eu-repo/semantics/closedAccessAtribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0)http://purl.org/coar/access_right/c_14cbDeterminación de la unión a reticulocitos humanos de los fragmentos conservado y variable de la proteína TRAMP de Plasmodium Vivax.Trabajo de grado - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fhttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85Textinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesishttps://purl.org/redcol/resource_type/TPinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionTizifa T, Kabague A, McCan R, Van de Berg H, Van vugt M, Phiri K. Prevention Efforts for Malaria. 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