Presencia de factores de virulencia y detección de los genes Eno y Bap en aislamientos de Staphylococcus Coagulasa negativos (Scn) procedentes de Mastitis bovina
La mastitis bovina es considerada como la principal enfermedad que afecta la producción lechera, esta se define como la inflamación de la glándula mamaria consecuencia de diversos factores,siendo asociada principalmente a microorganismos. LosStaphylococcus coagulasa negativa, SCN, han sido considera...
- Autores:
-
Diaz Castro, Mayerli Catherine
Ortiz Vasco, Cristian Camilo
- Tipo de recurso:
- Trabajo de grado de pregrado
- Fecha de publicación:
- 2015
- Institución:
- Colegio Mayor de Cundinamarca
- Repositorio:
- Repositorio Colegio Mayor de Cundinamarca
- Idioma:
- spa
- OAI Identifier:
- oai:repositorio.unicolmayor.edu.co:unicolmayor/3720
- Acceso en línea:
- https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/3720
- Palabra clave:
- Mastitis bovina
Enfermedad
Producción lechera
Microorganismos
Mastitis
Factores de virulencia
Staphylococcus coagulasa negativa
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Biopelícula
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- closedAccess
- License
- Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2015
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La mastitis bovina es considerada como la principal enfermedad que afecta la producción lechera, esta se define como la inflamación de la glándula mamaria consecuencia de diversos factores,siendo asociada principalmente a microorganismos. LosStaphylococcus coagulasa negativa, SCN, han sido considerados en las últimas décadas,como agentes emergentes de la mastitis bovinadadala poca significancia que se les ha atribuido enlos programas implementados para el control; es así, que se ha evidenciado el detrimento de la calidad láctea y/o derivados lácteos, la producción, la salud y el bienestar del animal afectado. Es por ello, que el presente estudio identificó fenotípicamente la presencia de algunos factores de virulencia que les confieren a estos microorganismos la capacidad de colonizar y persistir en la glándula mamaria bovina; para ello, se emplearon 119 aislamientos caracterizados como SCN en el marco del proyecto: “Caracterización microbiológica y desarrollo de un protocolo de tratamiento y control de mastitis bovina en la sabana de Bogotá”; encontrándose que, un 42% de los aislamientos presentaban actividad hemolítica, 6% fueron positivos a Lecitinasas en agar yema de huevo, un 19.3% de ellas presentaron lipolisis en agar Tween 80, el 53% actividad proteolítica en agar leche y 16.8% del total de aislamientos fue positivo a la prueba de DNAsas en agar DNAsa con azul de toluidina. Además de ello, se evaluó la expresión de factores asociados a la formación de biopelícula; como la producción de slimela cual fue evaluada mediante el Agar Rojo Congo (ARC), cuyos resultados mostraron que el 6%fueron fuertes mientras que el 67% fueron intermedios productores de slime; así mismo, se evaluó la adherencia a microplacas, encontrándose que el 88.2% de los aislamientos fueron adherentes en diferentes grados: débil (60.5%), moderado (6.7%) y fuerte (21%). Lapresencia de los genes eno y bap, cuyos productos proteicos se han visto asociados a la formación de biopelícula, fueron evaluados mediante PCR convencional, encontrándose la presencia de eno en el 82.4% de las muestras analizadas y bap en el 1.7% de las mismas |
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Recabarren SE. Fisiología de la lactancia. Revista de Fisiología y Endocrinología Animal. 2008. Figueroa Max. Enfermedades Infecciosas de los animales domésticos en Centroamérica. San José, Costa Rica: EUNED; 1984. Mansilla M., Pedraza G., Fajardo R., y Aguero E. Métodos de estimación del nivel de mastitis en vacas lecheras a partir de la determinación del test de california para mastitis (CMT) de sus cuartos individuales. Agric. Téc. [online]. [citado 2015-01-08]; 61(2) aprox. 8p. Disponible en: http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0365- 28072001000200006&lng=es&nrm=iso. Verhoeff J, Geer Dvd, Hagens FM. Effects of a mastitis control programme on the incidence of clinical mastitis. Veterinary Quarterly. 1981;3:7. Pyorala S, Taponen. Coagulase negative staphylococci emerging mastitis pathogens. Veterinary Microbiology. 2008; 134:26. Jacques M, Aragon V, Tremblay Y. Biofilm formation in bacterial pathogens of veterinary importance. Animal Health Research Reviews. 2010. Vol 11: 97-121 Lemon KP, Earl AM, Vlamakis HC, Aguilar C y Kolter R. Biofilm development with an emphasis on Bacillus subtilis. Current Topics in Microbiology and Immunology. 2008; 322: 116 Cucarella C., Solano C., Valle J., Amorena B., Lasa I., Penade´s J. Bap, a Staphylococcus aureus Surface Protein Involved in Biofilm Formation. Journal of bacteriology. 2001. p. 2888–2896 Fargo NDSU. Bovine Mastitis and Milking Management. 2012. p. 16. .Huijps K, Vliegher SD, Lam T, Hogeveen H. Cost estimation of heifer mastitis in early lactation by stochastic modelling. Veterinary Microbiology. 2009;134:23. Federacion Colombiana de ganaderos (página web). Colombia. (consultado 12 marzo 2014) Disponible en: http://www.fedegan.org.co/estadisticas/produccion-0 Desarrollo MdAy. Resolución Número 000017 de 2012. Bogotá, Colombia2012. p. 17. Myllys V, Asplund K, Brofeldt E, Hirvelä-Koski V, Honkanen-Buzalski T, et al.Bovine mastitis in Finland in 1998 and 1995 – changes in prevalence and antimicrobial resistance. Acta Vet. Scand. 1998; 39: 119- 126. Pitkälä A, Haveri M, Pyörälä S, Myllys V, Honkanen-Buzalski T. Bovine mastitis in Finland 2001--prevalence, distribution of bacteria, and antimicrobial resistance. J Dairy Sci. 2004; 87(8):2433-41. S. Piepers, L. de Meulemeester, A. de Kruif, G. Opsomer, H. W. Barkema, y S. de Vliegher, “Prevalence and distribution of mastitis pathogens in subclinically infected dairy cows in Flanders, Belgium,” J Dairy Res. 2007; 74 (4): 478–483 Simojoki. H, Hyvonen. P, CPF, S. Taponen, S. Pyorala. Is the biofilm formation and slime producing ability of coagulasenegative staphylococci associated with the persistence and severity of intramammary infection? Veterinary Microbiology. 2012; 158:8 B.-A. Tenhagen, Koster G, Wallmann J, Heuwieser W. Prevalence of Mastitis Pathogens and Their Resistance Against Antimicrobial Agents in Dairy Cows in Brandenburg, Germany. Journal of Dairy Science. 2006; Vol. 89 No. 7:9. V. L. M. Rall, E. S. Miranda, I. G. Castilho, C. H. Camargo, H. Langoni, F. F. Guimarães, et al. Diversity of Staphylococcus species and prevalence of enterotoxin genes isolated from milk of healthy cows and cows with subclinical mastitis. Journal of Dairy Science. 2014; 97:9 Calderón A, Rodríguez VC. Prevalencia de mastitis bovina y su etiología infecciosa en sistemas especializados en producción de leche en el altiplano cundiboyacense (Colombia). Revista Colombiana de Ciencias Pecuarias. 2008; 21:7 Trujillo C, Nicolás Ramírez, Luis Palacio, Gallego A. Prevalence of mastitis in dairy herds in Eastern Antioquia. Revista Colombiana de Ciencias Pecuarias. 2010; 24:7. Nicolás Ramírez Vásquez, Ofelia Arroyave Henao, Mario Cerón-Muñoz, Manuel Jaramillo, Juan Cerón, Palacio LG. Factores asociados a mastitis en vacas de la microcuenca lechera del altiplano norte de Antioquia, Colombia. Revista de Medicina Veterinaria. 2011;N° 22:9 Kot B, Binek T, Piechota M, Wolska KM, Zdunek E, Płatkowska K. Virulence factors and ability of staphylococci from bovine milk and the cowshed environment to biofilm formation. Polish Journal of Veterinary Sciences. 2013; 16:6. Norma Fariña, Letizia Carpinelli, Margarita Samudio, Rosa Guillén, Florentina Laspina, Ramona Sanabria, et al. Staphylococcus coagulasanegativa clínicamente significativos. Especies más frecuentes y factores de virulencia. Revista Chilena de Infectologia. 2013; 30 (5):8 Bochniarz M, Wawron W. Haemolytic and proteolytic activity of coagulase-negative staphylococci isolated from mastitis cows. Polish Journal of Veterinary Sciences. 2012; 15:5. Darwis S, Asfour H. Investigation of Biofilm Forming Ability in Staphylococci Causing Bovine Mastitis Using Phenotypic and Genotypic Assays. The ScientificWorld Journal. 2013; Volume 2013:9 Yannick D. N. Tremblay , Daphnée Lamarche , Pauline Chever , Denis Haine , Messier S, Jacques M. Characterization of the ability of coagulase-negative staphylococci isolated from the milk of Canadian farms to form biofilms. Journal of Dairy Science. 2013; 96:12 G D Christensen, W A Simpson, A L Bisno y E H Beachey. Adherence of slime-producing strains of Staphylococcus epidermidis to smooth surfaces.Infect. Immun. 1982, 37(1):318. Tormo MA, Knecht E, Gootz F, Lasa I, s JRP. Bap-dependent biofilm formation by pathogenic species of Staphylococcus: evidence of horizontal gene transfer? SGM JOURNALS. 2005; 151:11. Carme C., M. Ángeles T., Carles Ú, M. Pilar T., Marta M. et al. Role of Biofilm-Associated Protein Bap in the Pathogenesis of Bovine Staphylococcus aureus. Infect Immun. Apr 2004; 72(4): 2177–2185. Yeon-Soo Seo, Deog Yong Lee, Nabin Rayamahji, Mi Lan Kang, Yoo HS. Biofilm-forming associated genotypic and phenotypic characteristics of Staphylococcus spp. isolated from animals and air. Research in Veterinary Science. 2008; 85:6. Mostafa Nemati , Katleen Hermans , Luc A. Devriese , Maes D, Haesebrouck F. Screening of genes encoding adhesion factors and biofilm formation in Staphylococcus aureus isolates from poultry. Taylor & Francis. 2009;38:4. .Agriculture and consumer protection. Milking milk production hygiene and udder health. Unite States of America: FAO; 2001. Luciano C. [Tesis doctoral en Internet]. Nuevos enfoques en el diagnóstico, prevención y tratamiento de la mastitis bovina a través del uso de moléculas con acción antimicrobiana. Buenos Aires: biblioteca digital FCEN-UBA. 2010 [fecha de acceso 20 de octubre 2014] Disponible en: http://digital.bl.fcen.uba.ar/Download/Tesis/Tesis_4760_Chaneton.pdf Hernando Morales Lopez. Mastitis bovina: enfoque biotecnológico (en línea). Cali, Colombia: ReCiTeIA; 2011. (fecha de acceso 13 de octubre de 2014). URL disponible en: http://books.google.com.co/books?id=CEHjQKafbNIC&pg=PA216&dq=m astitis+un+nuevo&hl=es&sa=X&ei=k9kWVNXGHqTisATFzIKABg&ved=0 CBoQ6AEwAA#v=onepage&q=mastitis%20un%20nuevo&f=false Arancibia Berrios Richard. Manual para el control de la mastitis (en línea). (consultado el 25 de agosto del 2014). Disponible en: http://www.greensouth.com/agro/archivos/manual_control_mastitis_dleche_chile.pdf Ariznabarreta, A., Gonzalo, C., San Primitivo, F. Microbiological Quality and Somatic Cell Count of Ewe Milk with Special Reference to Staphylococci. J. Dairy Sci. 2002. 85:1370-1375 Andres Gallegos Sorias, Jose Noe Moncada Cortez. Uso de extractos de semillas de cítricos para el control de la mastitis bovina (tesis). Universidad de Michoacana, México. 2011. Ramón Gazque Gómez. Enciclopedia Bovina. 1ª ed. FMVZ Mexico; 2008. Walter W, Castañeda V, Kloppert B, Zschoeck. La mastitis bovina. Instituto estatal de investigaciones de Hesse. Guadalajara. Klastrup, O., Madsen, P.S., 1974. Scandinavian recommendations concerning examination of udder samples for mastitis. Nord. Vet. Med. 26; 157-204. Davidson, J.F., Dohoo, I.R., Donald, A.W., Hariharan, H., Collins, K. A cohort study of coagulasenegative staphylococcal mastitis in selected dairy herds in Prince Edward Island. Can. J. Vet. Res. 1992. 56:275-280 Haltia, L., Honkanen-Buzalski, T., Spiridonova, I., Olkonen, A, Myllys, V. A study of bovine mastitis, milking procedures and management practices on 25 Estonian dairy herds. Acta vet. Scand. 2006 48:22-27. Østerås, O., Sølverød, L., Reksen, O. Milk culture results in a large Norwegian survey – Effects of season, parity, days in milk, resistance, and clustering. J. Dairy Sci. 2006 89:1010-1023 Makovec, J.A., Ruegg, P.L. Results of milk samples submitted for microbiological examination in Wisconsin from 1994 to 2001. J. Dairy Sci. 2003. 86:3466-3472. Corporación Colombiana de Investigación Agropecuaria, CORPOICA [Página principal en Internet], Colombia, 2012 [acceso 18 agosto 2014]. Disponible en : http://www.corpoica.org.co/sitioweb/Archivos/Publicaciones/CARTILLAbovinosnario.pdf Nickerson, S. C. y J. W. Pankey. Neutrophil migration through teat end tissues of bovine mammary quarters experimentally challenged with Staphylococcus aureus.J Dairy Sci. 1984 Apr;67(4):826-34 Hagnestam-Nielsen C, Emanuelson U, Berglund BE. Strandberg. Relationship between somatic cell count and milk yield in different stages of lactation. J. Dairy Sci.2009; 92: 3124-3133 W. Nelson Philpot, Stephen C. Nickerson. Mastitis: contra ataque, una estrategia para combatir la mastitis. Babson Bros., 1992. Paape M, Duenas M, Wettemann R, Douglass L. Effects of intramammary infection and parity on calf weaning weight and milk quality in beef cows. Journal of animal science. 2000;78(10):2508. Cano, C. 2006. Nuevas alternativas en el diagnóstico clínico de campo y en el tratamiento de mastitis. Boletín Técnico Virtual. (en línea). México. Consultado 18 Agosto 2014. Disponible en: http://www.fmvz.unam.mx/fmvz/departamentos/rumiantes/bovinotecnia/B tRgCliC004.htm Roberto Novoa Quiñones. (tesis). Evaluación epizootiológica y económica de la mastitis bovina en rebaños lecheros especializados de la provincia de Cienfuegos. Universidad Agraria de la Habana, Cuba. 2003. Poutrel B, Rainard P. Predicting the probability of quarter infection (by major pathogens) from somatic cell concentration. Am J Vet Res. 1982 Global Milk Quality. Contagious and Environmental Mastitis Pathogens: What is the Difference and Why Does it Matter?. United States of America: National Mastitis Council. Diego B., Juan F. y Martha S. Recomendaciones para mejorar la calidad higienica, sanitaria y composiciona de la leche. Universidad Nacional de Colombia 2° seminario mastitis bovina y la calidad de la leche. 2014. Hogan JS, Laboratory handbook on bovine mastitis 1999: National Mastitis Council. editor. National Mastitis Council. Calvinho L, Tirante L. Prevalencia de microorganismos patógenos de mastitis bovina y evolución del estado de salud de la glándula mamaria en Argentina en los últimos 25 años. Revista FAVE. 2005;Vol. 4 Nº1:11 Phuektes, P., P.D. Mansell and G.F. Browning. Multiplex polymerase chain reaction assay for simultaneous detection ofStaphylococcus aureus and streptococcal causes of bovine mastitis. J. Dairy Sci.,2001 84: 1140-1148. Ogston A. Micrococcus poisoning. J Anat Physiol, 1882; 16:526-- 6; 1883; 17:24-58 Götz F., Bannerman T. y Schleifer K. The Genera Staphylococcus and Macrococcus. In: Martin D., Stanley F. editors. The Prokaryotes. Springer Science & Business Media. 2006. P. 6-75. Rosenbach, AJ. Mikro-Qrganismen beiden Wund-Infections-Krankheiten des Menschen. Wiesbaden, J.F. Bergmann, 1884. p. 18 Dufour S., Roy J., Barkema H., Descoteaux L., DeVries T., Reyher K., Scholl D. Epidemiology of coagulase-negative staphylococci intramammary infection in dairy cattle and the effect of bacteriological culture misclassification. Journal of Dairy Science. 2012: Vol. 95 No. 6 Vanderhaeghen W., Piepers S., Leroy F., Coilie V., Haesebrouck F. y Vliegher S. Invited review: Effect, persistence, and virulence of coagulase-negative Staphylococcus species associated with rumiant udder health. J. Dairy Sci. 2014; 97:5275-5293. Seija V. Genero Staphylococcus. En: Temas de Bacteriología y Virología médica. Sección III: Etiopatogenia Microbiológica p. 257-271. Koneman E.W. Allen, S.D., Dowell, V.R., Sommer, H.M.: Diagnostico microbiologico. 6a edición. Buenos Aires: Medica Panamericana. 2008. Barret A, Raulings N., Woessner. J.F.Ed.Handbook of proteolytic enzymes. San Diego. Academic Press, 1998. Berta Elizabeth Llorente. Aislamiento, purificación, caracterización y producción in vitro de peptidasas de alcaucil coagulantes de la leche (tesis doctoral). Universidad Nacional de la Plata, Argentina. 2000. Navarro I, Periago M. Enzimas lipolíticas bacterianas: propiedades, clasificación, estructura, aplicaciones tecnológicas y aspectos legales. Revista Veterinaria de Murcia. 2012. Vol 28: 45-65. .C. Rueda.Microbial lipases with interest in biotechnology and infectious diseases: isolation, characterization and inhibition by natural substances. Disponible en: http://hdl.handle.net/2445/42397. Cristian Ruiz Rueda. Microbial lipases with interest in biotechnology and infectious diseases: isolation, characterization and inhibition by natural substances (tesis doctoral). Universidad de Barcelona, España. 2005. .L. Arpigny, E. Jaeger. Bacterial lipolytic enzymes: classification and properties. 1999. Biochemistry J. 343: 177-183 R. V. F. Lachica, Genigeorgis y Hoeprich. Metachromatic Agar-Diffusion Methods for Detecting Staphylococcal Nuclease Activity. American Society for Microbiology. Apr. 1971, Vol. 21(4) p. 585-587. Nazar J. Biofilms bacterianos. Revista de otorrinolaringología. 2007. Vol 67: 61-72 Donlan R. Biofilms: Microbial Life on Surfaces. Emerging Infectious Diseases. 2002. Vol. 8, No. 9. Lassa I, L. del Pozo J, Penadés J, Leiva J. Biofilms bacterianos e infección. Revista animal y sanitaria de Navarra. 2005. Vol 28: 163-175 D Davies, M. Parsek, J Pearson, B. Iglewski, J. Costerton, E. Greenberg. The involvement of cell-to-cell signals in the development of a bacterial biofilm. Science. 1998. 280(5361):295-8. Otto M. Staphylococcal Biofilms. Curr Top Microbiol Immunol. 2008. 322: 207–228. Perez-Ordoyo Garcia Luis Ignacio. Exopolisacáridos y otros factores de virulencia en cepas de Staphylococcus aisladas de leche ovina (tesis doctoral). Universidad de Leon. España. 2010. C. Whitfield. Bacterial extracellular polysaccharides. Can. J. Microbiology. 1988. 34: 415-420 F. Gotz. Staphylococcus and biofilms. Molecular Microbiology. 2002. 43, 1367–1378 C. Ubeda, M. Tormo, C. Cucarella, P. Trotonda, T. Foster, I. Lasa, J. Penadés. Sip, an integrase protein with excision, circularization and integration activities, defines a new family of mobile Staphylococcus aureus pathogenicity islands. Molecular Microbiology. 2003. 49, 193– 210. Tormo M., Knecht E., Götz F., Lasa I., Penade´ s J. Bap-dependent biofilm formation by pathogenic species of Staphylococcus: evidence of horizontal gene transfer?. Microbiology. 2005. Vol: 151, 2465–2475. N. Harraghy, M. Hussain, A. Haggar, T. Chavakis, B. Sinha, M. Herrmann, J. Flock. The adhesive and immunomodulating properties of the multifunctional Staphylococcus aureus protein Eap. Microbiology. 2003. 149: 2701-2707. Tristan A., Ying L., Bes M., Etienne J., Vandenesch F., Gerard L. Use of Multiplex PCR To Identify Staphylococcus aureus Adhesins Involved in Human Hematogenous Infections. Journal of clinical microbiology. 2003. p. 4465–4467 S. Clarke, S. Foster. Surface adhesins of Staphylococcus aureus. Adv. Microb.Physiol. 2006. 51: 187-225 G. Sierra. A simple method for the detection of lipolytic activity of microorganisms and some observations on the influence of the contact between cells and fatty substrates. Antonie van Leeuwenhoek International Journal of General and Molecular Microbiology. 1957. 23, 15-22. Freeman DJ, Falkiner, Keane CT. New method for detecting slime production by coagulase negative staphylococci. J Clin Pathol 1989;42:872-874. Stepanovic S, Dragana V, Veronika H, Giovanni Di B.,Slobodanka D, Ivana C, Irkovic y Filip R. Quantification of biofilm in microtiter plates: overview of testing conditions and practical recommendations for assessment of biofilm production by staphylococci. APMIS 2007 115: 891–9. U. Reischl, M. Pulz, W. Ehret, H. Wolf. PCR-based detection of mycobacteria in sputum samples using a simple and reliable DNA extraction protocol. BioTechniques. 1994. Vol. 17,no. 5, pp. 844–845. Wesley Kloos, Karl Schleifer. Descriptions of Four New Species: Staphylococcus warneri, Staphylococcus capitis, Staphylococcus hominis, and Staphylococcus simulans. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology. 1975. Vol 25: 62-79. .H. Matsumoto; E. Baba; T. Fukata; M. Naka, Sanenori. The distribution and characters of coagulase-negative staphylococci of the bovine udder. Osaka Prefecture University Education and Research Archives. (OPERA). 1984. Vol 26: 27-32. .S. Citak, O. Varlik, N. Gundogan. Slime production and DNAse activity of staphylococci isolated from raw milk. Journal of Food Safety. 2003. Vol. 23: 281-288. B. Langlois, R. Harmon, K. Akers, D. Aaron. Comparison of Methods for Determining DNase and Phosphatase Activities of Staphylococci. Journal of Clinical Microbiology. 1989. Vol 27: 1127-1129. Cesar B. Mastitis bovina causada por Staphylococcus coagulasa negativos (tesis doctoral). Universidad Nacional de la Plata, Argentina. 2014. E. Hjelm, I. Lundell-Etherden. Slime Production by Staphylococcus saprophyticus. American Society for Microbiology: infection and immunity. 1991. Vol 59: 445-448. N. Bedidi-Madani, T. Greenland, Y. Richard. Exoprotein and slime production by coagulase-negative staphylococci isolated from goats’ milk. Veterinary Microbiology. 1998. Vol 59: 139-145. M. Souza da Cunha, L. Suppo de Souza Rugolo, C. Magalhães Lopes.Study of virulence factors in coagulase-negative staphylococci isolated from newborns. Mem Inst Oswaldo Cruz. 2006. Vol 101: 661- 668. N. Sierra. Detección de biofilm en cepas de Staphylococcus aureus y Staphylococcus coagulasa negativa aisladas de bovinos con mastitis subclínica (Tesis). Universidad de Zulia, Venezuela. 2012. B. Kenar, Y. Kuyucuoğlu, E. Şeker. Antibiotic Susceptibility of Coagulase-Negative Staphylococci Isolated from Bovine Subclinical Mastitis in Turkey. Pakistan Veterinary Journal. 2011. Vol 32: 390-393. V. Piessens, S. De Vliegher, B. Verbist, G. Braem, A. Van Nuffel, L. De Vuyst, M. Heyndrickx, E. Van Coillie. Characterization of coagulasenegative staphylococcus species from cow´s milk and environment based on bap, icaA, and mecA genes and phenotypic susceptibility to antimicrobials and teat dips. J. Dairy Sci. 2012. 95:7027–7038. L. Chaneton, L. Tirante, J. Maito, J. Chaves, L. Bussmann. Relationship Between Milk Lactoferrin and Etiological Agent in the Mastitic Bovine Mammary Gland. Journal of Dairy Science. 2008. Vol 91: 1865-1873. Jean F. MacFaddin. Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de importancia clínica. Montevideo, Uruguay: Medica Panamericana; 2000. Melchior M., Vaarkamp H., Fink-Gremmels J. Biofilms: A role in recurrent mastitis infections?. The Veterinary Journal. 2006. Vol 171: 398–407 |
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Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2015 https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/ Atribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0) http://purl.org/coar/access_right/c_14cb |
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Suarez Alfonso, Martha Cecilia1e3f517fda7b0ea9e7ad960c6514a6b7600Diaz Castro, Mayerli Catherine8f5de222ff90da63d7df018597b2527dOrtiz Vasco, Cristian Camilo0ec0402c0388b27e4b24a9f8fc1c6c062021-11-24T18:48:35Z2021-11-24T18:48:35Z2015-05-20https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/372052552La mastitis bovina es considerada como la principal enfermedad que afecta la producción lechera, esta se define como la inflamación de la glándula mamaria consecuencia de diversos factores,siendo asociada principalmente a microorganismos. LosStaphylococcus coagulasa negativa, SCN, han sido considerados en las últimas décadas,como agentes emergentes de la mastitis bovinadadala poca significancia que se les ha atribuido enlos programas implementados para el control; es así, que se ha evidenciado el detrimento de la calidad láctea y/o derivados lácteos, la producción, la salud y el bienestar del animal afectado. Es por ello, que el presente estudio identificó fenotípicamente la presencia de algunos factores de virulencia que les confieren a estos microorganismos la capacidad de colonizar y persistir en la glándula mamaria bovina; para ello, se emplearon 119 aislamientos caracterizados como SCN en el marco del proyecto: “Caracterización microbiológica y desarrollo de un protocolo de tratamiento y control de mastitis bovina en la sabana de Bogotá”; encontrándose que, un 42% de los aislamientos presentaban actividad hemolítica, 6% fueron positivos a Lecitinasas en agar yema de huevo, un 19.3% de ellas presentaron lipolisis en agar Tween 80, el 53% actividad proteolítica en agar leche y 16.8% del total de aislamientos fue positivo a la prueba de DNAsas en agar DNAsa con azul de toluidina. Además de ello, se evaluó la expresión de factores asociados a la formación de biopelícula; como la producción de slimela cual fue evaluada mediante el Agar Rojo Congo (ARC), cuyos resultados mostraron que el 6%fueron fuertes mientras que el 67% fueron intermedios productores de slime; así mismo, se evaluó la adherencia a microplacas, encontrándose que el 88.2% de los aislamientos fueron adherentes en diferentes grados: débil (60.5%), moderado (6.7%) y fuerte (21%). Lapresencia de los genes eno y bap, cuyos productos proteicos se han visto asociados a la formación de biopelícula, fueron evaluados mediante PCR convencional, encontrándose la presencia de eno en el 82.4% de las muestras analizadas y bap en el 1.7% de las mismasRESUMEN 13 1. INTRODUCCION 15 2. OBJETIVOS 19 2.1. Objetivo general 19 2.2. Objetivos especificos 19 3. ANTECEDENTES 20 4. MARCO REFERENCIAL 27 4.1. Mastitis 27 4.2. Tipos de mastitis 27 4.2.1. Mastitis subclínica 28 4.2.2. Mastitis clínica 28 4.2.2.1. Mastitis aguda 29 4.2.2.2. Mastitis aguda gangrenosa 29 4.2.2.3. Mastitis crónica 29 4.3. Impacto mundial y prevalencia 30 4.4. Impacto de la mastitis sobre la calidad de la leche. 33 4.4.1. Agentes etiológicos y mecanismos de transmisión. 35 4.4.1.1.Patógenos contagiosos 36 4.4.1.2.Patógenos ambientales 37 4.5. Staphylococcus COAGULASA NEGATIVA COMO AGENTES CAUSALES DE MASTITIS 38 4.6. FACTORES DE VIRULENCIA DE Staphylococcus COAGULASA NEGATIVA 4.6.1. Hemolisinas 41 4.6.2. Proteasas 43 4.6.3. Lipasas 44 3.6.4. Lecitinasas 46 3.6.5. DNAsas 47 4.7. BIOPELICULAS 47 4.7.1. Composición y formación 48 4.7.2. Quorum sensing: mecanismo de regulación 52 4.7.3. Biopelícula de Staphylococcus coagulasa negativa (SCN) 53 4.7.4. Genes eno Y bap asociadas a la formación de biopelícula 55 4.7.4.1.Gen bap 56 4.7.4.2.Familia MSCRAMMs y gen eno 57 5. METODOLOGÍA 60 5.1. Tipo de estudio 60 5.2. Universo 60 5.3. Población 60 5.4. Muestra 60 5.5. Técnicas y procedimientos 60 5.6. Cepas bacterianas 61 5.6.1. Cepas de referencia 62 5.7.CONFIRMACIÓN DE GÉNERO Y ESPECIE DE LAS CEPAS ESTUDIADAS 62 5.7.1. Caracterización microscópica 62 5.7.2. Caracterización bioquímica. 62 5.7.2.1.Prueba de la catalasa 63 5.7.2.2.Prueba de la coagulasa 63 5.7.2.3. Identificación de especie por método automatizado 63 5.7.3. Identificación de enzimas implicadas en la virulencia de los SCN. 64 5.7.3.1. Identificación de hemolisinas 64 5.7.3.2. Identificación de lecitinasas 64 5.7.3.3. Identificación de lipasas 65 5.7.3.4. Identificación de proteasas 65 5.7.3.5. Identificación de DNAsas 65 5.8.DETECCIÓN DE LA FORMACIÓN DE BIOPELICULA 66 5.8.1. Análisis fenotípico 66 5.8.1.1.Detección de la producción de exopolisacáridos mediante el Agar Rojo Congo (ARC) 66 5.8.1.2.Detección de adherencia por el método de microplaca 66 5.8.2. Análisis genotípico 68 5.8.2.1.Extracción de ADN 68 5.8.2.2.Amplificación de los genes eno y bap 68 6.RESULTADOS 70 6.1. CONFIRMACIÓN DE GÉNERO Y ESPECIE DE LAS CEPAS ESTUDIADAS_ 70 6.1.1. Caracterización microscópica 70 6.1.2. Caracterización bioquímica 71 6.1.2.1.Prueba de la catalasa 71 6.1.2.2.Prueba de la coagulasa 71 6.1.2.3. Identificación de especie por Sistema automatizado 72 6.2. IDENTIFICACIÓN DE ENZIMAS IMPLICADAS EN LA VIRULENCIA DE LOS SCN. 73 6.2.1. Identificación de hemolisinas 76 6.2.2. Identificación de Lecitinasas 77 6.2.3. Identificación de lipasas 78 6.2.4. Identificación de proteasas 79 6.2.5. Identificación de DNAsas 81 6.2.6. Presencia de factores de virulencia en los aislamientos de SCN por especie 83 6.3. DETECCIÓN DE LA FORMACIÓN DE BIOPELICULA 85 6.3.1. Análisis fenotípico 85 6.3.1.1.Producción de exopolisacáridos mediante el Agar Rojo Congo (ARC) 85 6.3.1.2.Detección de la adherencia por el método de microplaca 88 6.3.2. Resultados Agar Rojo Congo vs Microplaca 89 6.3.3. Análisis genotípico 92 6.3.3.1.Amplificación gen eno 92 6.3.3.2.Amplificación gen bap 94 6.3.4. Correlación entre los resultados obtenidos en microplaca y la expresión de los genes eno y bap. 95 7. DISCUSIÓN 99 9. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS 115PregradoBacteriólogo(a) y Laboratorista Clínico125p.application/pdfspaUniversidad Colegio Mayor de CundinamarcaFacultad de Ciencias de la SaludBogotá D.CBacteriología y Laboratorio ClínicoUniversidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2015https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/info:eu-repo/semantics/closedAccessAtribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0)http://purl.org/coar/access_right/c_14cbPresencia de factores de virulencia y detección de los genes Eno y Bap en aislamientos de Staphylococcus Coagulasa negativos (Scn) procedentes de Mastitis bovinaTrabajo de grado - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fhttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85Textinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesishttps://purl.org/redcol/resource_type/TPinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionRecabarren SE. Fisiología de la lactancia. Revista de Fisiología y Endocrinología Animal. 2008.Figueroa Max. Enfermedades Infecciosas de los animales domésticos en Centroamérica. San José, Costa Rica: EUNED; 1984.Mansilla M., Pedraza G., Fajardo R., y Aguero E. Métodos de estimación del nivel de mastitis en vacas lecheras a partir de la determinación del test de california para mastitis (CMT) de sus cuartos individuales. Agric. Téc. [online]. [citado 2015-01-08]; 61(2) aprox. 8p. Disponible en: http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0365- 28072001000200006&lng=es&nrm=iso.Verhoeff J, Geer Dvd, Hagens FM. Effects of a mastitis control programme on the incidence of clinical mastitis. Veterinary Quarterly. 1981;3:7.Pyorala S, Taponen. Coagulase negative staphylococci emerging mastitis pathogens. Veterinary Microbiology. 2008; 134:26.Jacques M, Aragon V, Tremblay Y. Biofilm formation in bacterial pathogens of veterinary importance. Animal Health Research Reviews. 2010. Vol 11: 97-121Lemon KP, Earl AM, Vlamakis HC, Aguilar C y Kolter R. Biofilm development with an emphasis on Bacillus subtilis. Current Topics in Microbiology and Immunology. 2008; 322: 116Cucarella C., Solano C., Valle J., Amorena B., Lasa I., Penade´s J. Bap, a Staphylococcus aureus Surface Protein Involved in Biofilm Formation. Journal of bacteriology. 2001. p. 2888–2896Fargo NDSU. Bovine Mastitis and Milking Management. 2012. p. 16..Huijps K, Vliegher SD, Lam T, Hogeveen H. Cost estimation of heifer mastitis in early lactation by stochastic modelling. Veterinary Microbiology. 2009;134:23.Federacion Colombiana de ganaderos (página web). Colombia. (consultado 12 marzo 2014) Disponible en: http://www.fedegan.org.co/estadisticas/produccion-0Desarrollo MdAy. Resolución Número 000017 de 2012. Bogotá, Colombia2012. p. 17.Myllys V, Asplund K, Brofeldt E, Hirvelä-Koski V, Honkanen-Buzalski T, et al.Bovine mastitis in Finland in 1998 and 1995 – changes in prevalence and antimicrobial resistance. Acta Vet. Scand. 1998; 39: 119- 126.Pitkälä A, Haveri M, Pyörälä S, Myllys V, Honkanen-Buzalski T. Bovine mastitis in Finland 2001--prevalence, distribution of bacteria, and antimicrobial resistance. J Dairy Sci. 2004; 87(8):2433-41.S. Piepers, L. de Meulemeester, A. de Kruif, G. Opsomer, H. W. Barkema, y S. de Vliegher, “Prevalence and distribution of mastitis pathogens in subclinically infected dairy cows in Flanders, Belgium,” J Dairy Res. 2007; 74 (4): 478–483Simojoki. H, Hyvonen. P, CPF, S. Taponen, S. Pyorala. Is the biofilm formation and slime producing ability of coagulasenegative staphylococci associated with the persistence and severity of intramammary infection? Veterinary Microbiology. 2012; 158:8B.-A. Tenhagen, Koster G, Wallmann J, Heuwieser W. Prevalence of Mastitis Pathogens and Their Resistance Against Antimicrobial Agents in Dairy Cows in Brandenburg, Germany. Journal of Dairy Science. 2006; Vol. 89 No. 7:9.V. L. M. Rall, E. S. Miranda, I. G. Castilho, C. H. Camargo, H. Langoni, F. F. Guimarães, et al. Diversity of Staphylococcus species and prevalence of enterotoxin genes isolated from milk of healthy cows and cows with subclinical mastitis. Journal of Dairy Science. 2014; 97:9Calderón A, Rodríguez VC. Prevalencia de mastitis bovina y su etiología infecciosa en sistemas especializados en producción de leche en el altiplano cundiboyacense (Colombia). Revista Colombiana de Ciencias Pecuarias. 2008; 21:7Trujillo C, Nicolás Ramírez, Luis Palacio, Gallego A. Prevalence of mastitis in dairy herds in Eastern Antioquia. Revista Colombiana de Ciencias Pecuarias. 2010; 24:7.Nicolás Ramírez Vásquez, Ofelia Arroyave Henao, Mario Cerón-Muñoz, Manuel Jaramillo, Juan Cerón, Palacio LG. Factores asociados a mastitis en vacas de la microcuenca lechera del altiplano norte de Antioquia, Colombia. Revista de Medicina Veterinaria. 2011;N° 22:9Kot B, Binek T, Piechota M, Wolska KM, Zdunek E, Płatkowska K. Virulence factors and ability of staphylococci from bovine milk and the cowshed environment to biofilm formation. Polish Journal of Veterinary Sciences. 2013; 16:6.Norma Fariña, Letizia Carpinelli, Margarita Samudio, Rosa Guillén, Florentina Laspina, Ramona Sanabria, et al. Staphylococcus coagulasanegativa clínicamente significativos. Especies más frecuentes y factores de virulencia. Revista Chilena de Infectologia. 2013; 30 (5):8Bochniarz M, Wawron W. Haemolytic and proteolytic activity of coagulase-negative staphylococci isolated from mastitis cows. Polish Journal of Veterinary Sciences. 2012; 15:5.Darwis S, Asfour H. Investigation of Biofilm Forming Ability in Staphylococci Causing Bovine Mastitis Using Phenotypic and Genotypic Assays. The ScientificWorld Journal. 2013; Volume 2013:9Yannick D. N. Tremblay , Daphnée Lamarche , Pauline Chever , Denis Haine , Messier S, Jacques M. Characterization of the ability of coagulase-negative staphylococci isolated from the milk of Canadian farms to form biofilms. Journal of Dairy Science. 2013; 96:12G D Christensen, W A Simpson, A L Bisno y E H Beachey. Adherence of slime-producing strains of Staphylococcus epidermidis to smooth surfaces.Infect. Immun. 1982, 37(1):318.Tormo MA, Knecht E, Gootz F, Lasa I, s JRP. Bap-dependent biofilm formation by pathogenic species of Staphylococcus: evidence of horizontal gene transfer? SGM JOURNALS. 2005; 151:11.Carme C., M. Ángeles T., Carles Ú, M. Pilar T., Marta M. et al. Role of Biofilm-Associated Protein Bap in the Pathogenesis of Bovine Staphylococcus aureus. Infect Immun. Apr 2004; 72(4): 2177–2185.Yeon-Soo Seo, Deog Yong Lee, Nabin Rayamahji, Mi Lan Kang, Yoo HS. Biofilm-forming associated genotypic and phenotypic characteristics of Staphylococcus spp. isolated from animals and air. Research in Veterinary Science. 2008; 85:6.Mostafa Nemati , Katleen Hermans , Luc A. Devriese , Maes D, Haesebrouck F. Screening of genes encoding adhesion factors and biofilm formation in Staphylococcus aureus isolates from poultry. Taylor & Francis. 2009;38:4..Agriculture and consumer protection. Milking milk production hygiene and udder health. Unite States of America: FAO; 2001.Luciano C. [Tesis doctoral en Internet]. Nuevos enfoques en el diagnóstico, prevención y tratamiento de la mastitis bovina a través del uso de moléculas con acción antimicrobiana. Buenos Aires: biblioteca digital FCEN-UBA. 2010 [fecha de acceso 20 de octubre 2014] Disponible en: http://digital.bl.fcen.uba.ar/Download/Tesis/Tesis_4760_Chaneton.pdfHernando Morales Lopez. Mastitis bovina: enfoque biotecnológico (en línea). Cali, Colombia: ReCiTeIA; 2011. (fecha de acceso 13 de octubre de 2014). URL disponible en: http://books.google.com.co/books?id=CEHjQKafbNIC&pg=PA216&dq=m astitis+un+nuevo&hl=es&sa=X&ei=k9kWVNXGHqTisATFzIKABg&ved=0 CBoQ6AEwAA#v=onepage&q=mastitis%20un%20nuevo&f=falseArancibia Berrios Richard. Manual para el control de la mastitis (en línea). (consultado el 25 de agosto del 2014). Disponible en: http://www.greensouth.com/agro/archivos/manual_control_mastitis_dleche_chile.pdfAriznabarreta, A., Gonzalo, C., San Primitivo, F. Microbiological Quality and Somatic Cell Count of Ewe Milk with Special Reference to Staphylococci. J. Dairy Sci. 2002. 85:1370-1375Andres Gallegos Sorias, Jose Noe Moncada Cortez. Uso de extractos de semillas de cítricos para el control de la mastitis bovina (tesis). Universidad de Michoacana, México. 2011.Ramón Gazque Gómez. Enciclopedia Bovina. 1ª ed. FMVZ Mexico; 2008.Walter W, Castañeda V, Kloppert B, Zschoeck. La mastitis bovina. Instituto estatal de investigaciones de Hesse. Guadalajara.Klastrup, O., Madsen, P.S., 1974. Scandinavian recommendations concerning examination of udder samples for mastitis. Nord. Vet. Med. 26; 157-204.Davidson, J.F., Dohoo, I.R., Donald, A.W., Hariharan, H., Collins, K. A cohort study of coagulasenegative staphylococcal mastitis in selected dairy herds in Prince Edward Island. Can. J. Vet. Res. 1992. 56:275-280Haltia, L., Honkanen-Buzalski, T., Spiridonova, I., Olkonen, A, Myllys, V. A study of bovine mastitis, milking procedures and management practices on 25 Estonian dairy herds. Acta vet. Scand. 2006 48:22-27.Østerås, O., Sølverød, L., Reksen, O. Milk culture results in a large Norwegian survey – Effects of season, parity, days in milk, resistance, and clustering. J. Dairy Sci. 2006 89:1010-1023Makovec, J.A., Ruegg, P.L. Results of milk samples submitted for microbiological examination in Wisconsin from 1994 to 2001. J. Dairy Sci. 2003. 86:3466-3472.Corporación Colombiana de Investigación Agropecuaria, CORPOICA [Página principal en Internet], Colombia, 2012 [acceso 18 agosto 2014]. Disponible en : http://www.corpoica.org.co/sitioweb/Archivos/Publicaciones/CARTILLAbovinosnario.pdfNickerson, S. C. y J. W. Pankey. Neutrophil migration through teat end tissues of bovine mammary quarters experimentally challenged with Staphylococcus aureus.J Dairy Sci. 1984 Apr;67(4):826-34Hagnestam-Nielsen C, Emanuelson U, Berglund BE. Strandberg. Relationship between somatic cell count and milk yield in different stages of lactation. J. Dairy Sci.2009; 92: 3124-3133W. Nelson Philpot, Stephen C. Nickerson. Mastitis: contra ataque, una estrategia para combatir la mastitis. Babson Bros., 1992.Paape M, Duenas M, Wettemann R, Douglass L. Effects of intramammary infection and parity on calf weaning weight and milk quality in beef cows. Journal of animal science. 2000;78(10):2508.Cano, C. 2006. Nuevas alternativas en el diagnóstico clínico de campo y en el tratamiento de mastitis. Boletín Técnico Virtual. (en línea). México. Consultado 18 Agosto 2014. Disponible en: http://www.fmvz.unam.mx/fmvz/departamentos/rumiantes/bovinotecnia/B tRgCliC004.htmRoberto Novoa Quiñones. (tesis). Evaluación epizootiológica y económica de la mastitis bovina en rebaños lecheros especializados de la provincia de Cienfuegos. Universidad Agraria de la Habana, Cuba. 2003.Poutrel B, Rainard P. Predicting the probability of quarter infection (by major pathogens) from somatic cell concentration. Am J Vet Res. 1982Global Milk Quality. Contagious and Environmental Mastitis Pathogens: What is the Difference and Why Does it Matter?. United States of America: National Mastitis Council.Diego B., Juan F. y Martha S. Recomendaciones para mejorar la calidad higienica, sanitaria y composiciona de la leche. Universidad Nacional de Colombia 2° seminario mastitis bovina y la calidad de la leche. 2014.Hogan JS, Laboratory handbook on bovine mastitis 1999: National Mastitis Council. editor. National Mastitis Council.Calvinho L, Tirante L. Prevalencia de microorganismos patógenos de mastitis bovina y evolución del estado de salud de la glándula mamaria en Argentina en los últimos 25 años. Revista FAVE. 2005;Vol. 4 Nº1:11Phuektes, P., P.D. Mansell and G.F. Browning. Multiplex polymerase chain reaction assay for simultaneous detection ofStaphylococcus aureus and streptococcal causes of bovine mastitis. J. Dairy Sci.,2001 84: 1140-1148.Ogston A. Micrococcus poisoning. J Anat Physiol, 1882; 16:526-- 6; 1883; 17:24-58Götz F., Bannerman T. y Schleifer K. The Genera Staphylococcus and Macrococcus. In: Martin D., Stanley F. editors. The Prokaryotes. Springer Science & Business Media. 2006. P. 6-75.Rosenbach, AJ. Mikro-Qrganismen beiden Wund-Infections-Krankheiten des Menschen. Wiesbaden, J.F. Bergmann, 1884. p. 18Dufour S., Roy J., Barkema H., Descoteaux L., DeVries T., Reyher K., Scholl D. Epidemiology of coagulase-negative staphylococci intramammary infection in dairy cattle and the effect of bacteriological culture misclassification. Journal of Dairy Science. 2012: Vol. 95 No. 6Vanderhaeghen W., Piepers S., Leroy F., Coilie V., Haesebrouck F. y Vliegher S. Invited review: Effect, persistence, and virulence of coagulase-negative Staphylococcus species associated with rumiant udder health. J. Dairy Sci. 2014; 97:5275-5293.Seija V. Genero Staphylococcus. En: Temas de Bacteriología y Virología médica. Sección III: Etiopatogenia Microbiológica p. 257-271.Koneman E.W. Allen, S.D., Dowell, V.R., Sommer, H.M.: Diagnostico microbiologico. 6a edición. Buenos Aires: Medica Panamericana. 2008.Barret A, Raulings N., Woessner. J.F.Ed.Handbook of proteolytic enzymes. San Diego. Academic Press, 1998.Berta Elizabeth Llorente. Aislamiento, purificación, caracterización y producción in vitro de peptidasas de alcaucil coagulantes de la leche (tesis doctoral). Universidad Nacional de la Plata, Argentina. 2000.Navarro I, Periago M. Enzimas lipolíticas bacterianas: propiedades, clasificación, estructura, aplicaciones tecnológicas y aspectos legales. Revista Veterinaria de Murcia. 2012. Vol 28: 45-65..C. Rueda.Microbial lipases with interest in biotechnology and infectious diseases: isolation, characterization and inhibition by natural substances. Disponible en: http://hdl.handle.net/2445/42397.Cristian Ruiz Rueda. Microbial lipases with interest in biotechnology and infectious diseases: isolation, characterization and inhibition by natural substances (tesis doctoral). Universidad de Barcelona, España. 2005..L. Arpigny, E. Jaeger. Bacterial lipolytic enzymes: classification and properties. 1999. Biochemistry J. 343: 177-183R. V. F. Lachica, Genigeorgis y Hoeprich. Metachromatic Agar-Diffusion Methods for Detecting Staphylococcal Nuclease Activity. American Society for Microbiology. Apr. 1971, Vol. 21(4) p. 585-587.Nazar J. Biofilms bacterianos. Revista de otorrinolaringología. 2007. Vol 67: 61-72Donlan R. Biofilms: Microbial Life on Surfaces. Emerging Infectious Diseases. 2002. Vol. 8, No. 9.Lassa I, L. del Pozo J, Penadés J, Leiva J. Biofilms bacterianos e infección. Revista animal y sanitaria de Navarra. 2005. Vol 28: 163-175D Davies, M. Parsek, J Pearson, B. Iglewski, J. Costerton, E. Greenberg. The involvement of cell-to-cell signals in the development of a bacterial biofilm. Science. 1998. 280(5361):295-8.Otto M. Staphylococcal Biofilms. Curr Top Microbiol Immunol. 2008. 322: 207–228.Perez-Ordoyo Garcia Luis Ignacio. Exopolisacáridos y otros factores de virulencia en cepas de Staphylococcus aisladas de leche ovina (tesis doctoral). Universidad de Leon. España. 2010.C. Whitfield. Bacterial extracellular polysaccharides. Can. J. Microbiology. 1988. 34: 415-420F. Gotz. Staphylococcus and biofilms. Molecular Microbiology. 2002. 43, 1367–1378C. Ubeda, M. Tormo, C. Cucarella, P. Trotonda, T. Foster, I. Lasa, J. Penadés. Sip, an integrase protein with excision, circularization and integration activities, defines a new family of mobile Staphylococcus aureus pathogenicity islands. Molecular Microbiology. 2003. 49, 193– 210.Tormo M., Knecht E., Götz F., Lasa I., Penade´ s J. Bap-dependent biofilm formation by pathogenic species of Staphylococcus: evidence of horizontal gene transfer?. Microbiology. 2005. Vol: 151, 2465–2475.N. Harraghy, M. Hussain, A. Haggar, T. Chavakis, B. Sinha, M. Herrmann, J. Flock. The adhesive and immunomodulating properties of the multifunctional Staphylococcus aureus protein Eap. Microbiology. 2003. 149: 2701-2707.Tristan A., Ying L., Bes M., Etienne J., Vandenesch F., Gerard L. Use of Multiplex PCR To Identify Staphylococcus aureus Adhesins Involved in Human Hematogenous Infections. Journal of clinical microbiology. 2003. p. 4465–4467S. Clarke, S. Foster. Surface adhesins of Staphylococcus aureus. Adv. Microb.Physiol. 2006. 51: 187-225G. Sierra. A simple method for the detection of lipolytic activity of microorganisms and some observations on the influence of the contact between cells and fatty substrates. Antonie van Leeuwenhoek International Journal of General and Molecular Microbiology. 1957. 23, 15-22.Freeman DJ, Falkiner, Keane CT. New method for detecting slime production by coagulase negative staphylococci. J Clin Pathol 1989;42:872-874.Stepanovic S, Dragana V, Veronika H, Giovanni Di B.,Slobodanka D, Ivana C, Irkovic y Filip R. Quantification of biofilm in microtiter plates: overview of testing conditions and practical recommendations for assessment of biofilm production by staphylococci. APMIS 2007 115: 891–9.U. Reischl, M. Pulz, W. Ehret, H. Wolf. PCR-based detection of mycobacteria in sputum samples using a simple and reliable DNA extraction protocol. BioTechniques. 1994. Vol. 17,no. 5, pp. 844–845.Wesley Kloos, Karl Schleifer. Descriptions of Four New Species: Staphylococcus warneri, Staphylococcus capitis, Staphylococcus hominis, and Staphylococcus simulans. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology. 1975. Vol 25: 62-79..H. Matsumoto; E. Baba; T. Fukata; M. Naka, Sanenori. The distribution and characters of coagulase-negative staphylococci of the bovine udder. Osaka Prefecture University Education and Research Archives. (OPERA). 1984. Vol 26: 27-32..S. Citak, O. Varlik, N. Gundogan. Slime production and DNAse activity of staphylococci isolated from raw milk. Journal of Food Safety. 2003. Vol. 23: 281-288.B. Langlois, R. Harmon, K. Akers, D. Aaron. Comparison of Methods for Determining DNase and Phosphatase Activities of Staphylococci. Journal of Clinical Microbiology. 1989. Vol 27: 1127-1129.Cesar B. Mastitis bovina causada por Staphylococcus coagulasa negativos (tesis doctoral). Universidad Nacional de la Plata, Argentina. 2014.E. Hjelm, I. Lundell-Etherden. Slime Production by Staphylococcus saprophyticus. American Society for Microbiology: infection and immunity. 1991. Vol 59: 445-448.N. Bedidi-Madani, T. Greenland, Y. Richard. Exoprotein and slime production by coagulase-negative staphylococci isolated from goats’ milk. Veterinary Microbiology. 1998. Vol 59: 139-145.M. Souza da Cunha, L. Suppo de Souza Rugolo, C. Magalhães Lopes.Study of virulence factors in coagulase-negative staphylococci isolated from newborns. Mem Inst Oswaldo Cruz. 2006. Vol 101: 661- 668.N. Sierra. Detección de biofilm en cepas de Staphylococcus aureus y Staphylococcus coagulasa negativa aisladas de bovinos con mastitis subclínica (Tesis). Universidad de Zulia, Venezuela. 2012.B. Kenar, Y. Kuyucuoğlu, E. Şeker. Antibiotic Susceptibility of Coagulase-Negative Staphylococci Isolated from Bovine Subclinical Mastitis in Turkey. Pakistan Veterinary Journal. 2011. Vol 32: 390-393.V. Piessens, S. De Vliegher, B. Verbist, G. Braem, A. Van Nuffel, L. De Vuyst, M. Heyndrickx, E. Van Coillie. Characterization of coagulasenegative staphylococcus species from cow´s milk and environment based on bap, icaA, and mecA genes and phenotypic susceptibility to antimicrobials and teat dips. J. Dairy Sci. 2012. 95:7027–7038.L. Chaneton, L. Tirante, J. Maito, J. Chaves, L. Bussmann. Relationship Between Milk Lactoferrin and Etiological Agent in the Mastitic Bovine Mammary Gland. Journal of Dairy Science. 2008. Vol 91: 1865-1873.Jean F. MacFaddin. Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de importancia clínica. Montevideo, Uruguay: Medica Panamericana; 2000.Melchior M., Vaarkamp H., Fink-Gremmels J. Biofilms: A role in recurrent mastitis infections?. The Veterinary Journal. 2006. Vol 171: 398–407Mastitis bovinaEnfermedadProducción lecheraMicroorganismosMastitisFactores de virulenciaStaphylococcus coagulasa negativaSlimeBiopelículaORIGINALPresentacion.pdfPresentacion.pdfapplication/pdf6944863https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3720/1/Presentacion.pdfa2d52291f9bdea45a81e800f202d6ad5MD51open accessDocumento.pdfDocumento.pdfapplication/pdf2176894https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3720/2/Documento.pdfdba5cb31dd59096c6c874dbb5d494343MD52open accessDocumento Cartas.pdfDocumento Cartas.pdfapplication/pdf130801https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3720/3/Documento%20Cartas.pdf3a07cf061a2f6177124f3520b828df3aMD53metadata only accessLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-814828https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3720/4/license.txt2f9959eaf5b71fae44bbf9ec84150c7aMD54open accessTEXTPresentacion.pdf.txtPresentacion.pdf.txtExtracted 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Cartas.pdf.jpgDocumento Cartas.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg7250https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3720/10/Documento%20Cartas.pdf.jpg1d52ef396fdc57bc1e9a2818043762edMD510metadata only accessunicolmayor/3720oai:repositorio.unicolmayor.edu.co:unicolmayor/37202021-11-25 03:02:59.827An error occurred on the license name.|||https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/open accessBiblioteca Digital 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