Caracterización bioquímica de Bacillus Thuringiensis Serovar Coreanensis 4al1 (t25001) en relación a su actividad hacia células cáncerigenas
Las proteínas parasporina (PS) son sintetizadas en la fase de esporulación de Bacillus thuringiensis (Bt), una bacteria Gram positiva ampliamente estudiada por actividad insecticida debida a sus toxinas altamente específicas (proteínas Cry). Las PS son una clase de proteínas Cry, y tienen actividad...
- Autores:
-
Becerra Manrique, Ana María
- Tipo de recurso:
- Trabajo de grado de pregrado
- Fecha de publicación:
- 2020
- Institución:
- Colegio Mayor de Cundinamarca
- Repositorio:
- Repositorio Colegio Mayor de Cundinamarca
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- Bacillus thuringiensis serovar coreanensis
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Las proteínas parasporina (PS) son sintetizadas en la fase de esporulación de Bacillus thuringiensis (Bt), una bacteria Gram positiva ampliamente estudiada por actividad insecticida debida a sus toxinas altamente específicas (proteínas Cry). Las PS son una clase de proteínas Cry, y tienen actividad citotóxica y especifica frente a células cancerosas, induciéndoles muerte celular por necrosis o apoptosis, además de poseer baja o nula actividad sobre las células con funcionamiento normal. Se han descrito varias cepas portadoras de actividad anticancerígena: Bt coreanensis, Bt dakota o Bt colmeri. En este trabajo se decidió caracterizar la cepa de Bt coreanensis 4AL1, en relación a posible actividad anticancerígena mediada por PS. Para este fin, se diseñaron oligonucleótidos específicos para cada uno de los grupos de PS (PS1, PS2, PS3, PS4, PS5, y PS6) registrados en Bacillus thuringiensis toxin nomenclature, tanto para identificar la presencia del gen como para su posterior aislamiento. En segunda instancia se estudió la cepa de Bt coreanensis 4AL1, en el contexto de analizar bioinformáticamente sus genomas en la búsqueda de genes codificantes de PS, y su caracterización bioquímica in silico, donde se determinó la presencia de un péptido relacionado con PS2Aa. Finalmente, se utilizó la cepa Bt coreanensis 4AL1, para obtener ADN genómico por método Hot Shot + Tween, la purificación de cristales posiblemente asociados a PS, y su determinación mediante SDS- PAGE, con presencia de una banda de 37 kDa que podría estar asociada a PS2Aa. Este 9 trabajo aporta a la caracterización de cepas de Bt, específicamente en el contexto de la síntesis de PS asociadas a control de cáncer. |
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En este trabajo se decidió caracterizar la cepa de Bt coreanensis 4AL1, en relación a posible actividad anticancerígena mediada por PS. Para este fin, se diseñaron oligonucleótidos específicos para cada uno de los grupos de PS (PS1, PS2, PS3, PS4, PS5, y PS6) registrados en Bacillus thuringiensis toxin nomenclature, tanto para identificar la presencia del gen como para su posterior aislamiento. En segunda instancia se estudió la cepa de Bt coreanensis 4AL1, en el contexto de analizar bioinformáticamente sus genomas en la búsqueda de genes codificantes de PS, y su caracterización bioquímica in silico, donde se determinó la presencia de un péptido relacionado con PS2Aa. Finalmente, se utilizó la cepa Bt coreanensis 4AL1, para obtener ADN genómico por método Hot Shot + Tween, la purificación de cristales posiblemente asociados a PS, y su determinación mediante SDS- PAGE, con presencia de una banda de 37 kDa que podría estar asociada a PS2Aa. Este 9 trabajo aporta a la caracterización de cepas de Bt, específicamente en el contexto de la síntesis de PS asociadas a control de cáncer.RESUMEN 8 INTRODUCCIÓN 10 OBJETIVOS 12 Objetivo general 12 Objetivos específicos 12 1. ANTECEDENTES 13 2. MARCO REFERENCIAL 20 2.1. Generalidades de Bacillus thuringiensis 20 2.2 Proteínas de Cry 21 2.3 Mecanismo de acción de Cry 22 2.5 Aplicaciones de parasporina 27 2.6 Modo de acción de las proteínas tipo parasporina 28 2.7 Cáncer 30 3. METODOLOGÍA 33 3.1 Tipo de investigación 33 3.2 Universo 33 3.3 Población 33 3.4 Muestra 33 3.5. Variables 33 3.6. Indicadores 33 3.7. Hipótesis 34 3.8. Técnicas y Procedimientos 34 3.8.1 Microscopia 34 3.8.2 Diseño de oligonucleótidos específicos para genes tipo parasporina 34 3.8.3. Análisis genómico 35 3.8.4 Extracción de ADN 35 3.8.5. Lavado de Biomasa y Solubilización de Proteínas 36 3.8.7 Cuantificación de Proteínas por método Bradford 36 4.1. Caracterización morfológica de B. thuringiensis serovar coreanensis 38 4.1.2. Microscopia 38 4.1.3 Microscopia de contraste de fases 39 4.2 Diseño de oligonucleótido específicos de genes tipo parasporina 40 4.3 Análisis genomico de B. thuringiensis serovar coreanensis 42 4.3.1 Genoma de B. thuringiensis serovar coreanensis cepa ST7 42 4.3.2 Genoma de Bt serovar coreanensis cepa 4AL1 43 4.3.2.1 Análisis de PS5 en el genoma de Bt serovar coreanensis CEPA 4AL1 44 4.3.3 Análisis de secuencia de aminoácidos extraída de la literatura 45 4.4. Características de las proteínas tipo parasporina 46 4.6. Cuantificación de proteínas 47 4.7. Perfiles proteicos 49 5. DISCUSIÓN 50 6. CONCLUSIONES 54 BibliografíaPregradoBacteriólogo(a) y Laboratorista Clínico83p.application/pdfspaUniversidad Colegio Mayor de CundinamarcaFacultad de Ciencias de la SaludBogotá, D.C.Bacteriología y Laboratorio ClínicoDerechos Reservados-Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2020https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/info:eu-repo/semantics/closedAccessAtribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0)http://purl.org/coar/access_right/c_14cbCaracterización bioquímica de Bacillus Thuringiensis Serovar Coreanensis 4al1 (t25001) en relación a su actividad hacia células cáncerigenasTrabajo de grado - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fhttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85Textinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesishttps://purl.org/redcol/resource_type/TPinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionSocia, Ministerio de Salud y Protección. 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accessunicolmayor/62oai:repositorio.unicolmayor.edu.co:unicolmayor/622024-04-29 16:36:08.856An error occurred on the license name.|||https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/open accessBiblioteca Digital 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