Analisis de la presencia de los complejos enzimaticos Pksi, Pksii y Nrps por Pcr y/o enfrentamiento directo en actinobacterias aisladas del rio Arauca

El hallazgo de nuevos compuestos microbianos y de metabolitos secundarios bioactivos sigue siendo importante en la investigación de nuevos medicamentos. Por lo cual, se requieren estrategias con el fin de aumentar la probabilidad de conocer nuevas sustancias y propiedades que disminuyan el tiempo de...

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Autores:
Hernández Duarte, Dihana Estefanyha
Tipo de recurso:
Trabajo de grado de pregrado
Fecha de publicación:
2018
Institución:
Colegio Mayor de Cundinamarca
Repositorio:
Repositorio Colegio Mayor de Cundinamarca
Idioma:
spa
OAI Identifier:
oai:repositorio.unicolmayor.edu.co:unicolmayor/3637
Acceso en línea:
https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/3637
Palabra clave:
Compuestos Microbianos
Bioactivos
Investigación
Identificación molecular
Actinobacterias
Rights
closedAccess
License
Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2018
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description El hallazgo de nuevos compuestos microbianos y de metabolitos secundarios bioactivos sigue siendo importante en la investigación de nuevos medicamentos. Por lo cual, se requieren estrategias con el fin de aumentar la probabilidad de conocer nuevas sustancias y propiedades que disminuyan el tiempo de elaboración y el costo de los procesos tradicionales de identificación, en la producción de nuevos medicamentos. Así entonces, se planteó un estudio mediante la realización de una prueba de identificación molecular, como la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) que permitió detectar a nivel molecular en Actinobacterias aisladas de la ribera del Río Arauca la presencia de algunos genes biosintéticos pertenecientes a los complejos Policétido sintasa tipo I: PKSI, Policétido sintasa tipo II: PKSII y Péptido sintasa no ribosómicos NRPS. Proceso en el cual se tomaron 30 cepas Pertenecientes a la Universidad de La Sabana, identificadas dentro del género Streptomyces, en las cuales gen que codifica para algunas enzimas de los complejos PKSI, PKSII y NRPS, fue amplificado en 18 cepas (60%); a diferencia de 12 (40%) cepas que no presentaron amplificación para los mismos genes; Se identificaron 6 cepas : 160 (Streptomyces sp), 326 (Streptomyces sp), 412 (Streptomyces sp parvulus ), 445 (Streptomyces sp), 627 (Streptomyces sp) y 270(Streptomyces sp ) con la presencia de los tres genes seleccionados, correspondientes a los complejos PKSI, PKSII y NRPS. Se realizó una evaluación de la actividad antimicrobiana por enfrentamiento directo o antagonismo donde se determinó una actividad antibactérial preferencialmente hacia bacterias Gram positivas del 67%, comparando estas evaluaciones con los resultados de la técnica de PCR, indicando que las cepas que no presentaron amplificación pero si tienen actividad antimicrobiana, pueden producir antibióticos mediante otros mecanismos diferentes al objeto de estudio de la presente investigación. Se concluye que la técnica de PCR disminuye los tiempos de evaluación de producción de metabolitos antibacteriales en cepas microbiológicas con una alta eficiencia y a bajos costos (frente a técnicas microbiológicas) aunque se debe ampliar el grupo de genes a evaluar a otros sistemas de síntesis de compuestos antibacteriales.
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spelling Díaz Barrera, Luis Eduardo397c2bcf3677d58ebbf0b951f04aa348600Hernández Duarte, Dihana Estefanyha45a9251f40848fd1ea790695f2fad8656002021-11-10T19:24:35Z2021-11-10T19:24:35Z2018-03https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/3637El hallazgo de nuevos compuestos microbianos y de metabolitos secundarios bioactivos sigue siendo importante en la investigación de nuevos medicamentos. Por lo cual, se requieren estrategias con el fin de aumentar la probabilidad de conocer nuevas sustancias y propiedades que disminuyan el tiempo de elaboración y el costo de los procesos tradicionales de identificación, en la producción de nuevos medicamentos. Así entonces, se planteó un estudio mediante la realización de una prueba de identificación molecular, como la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) que permitió detectar a nivel molecular en Actinobacterias aisladas de la ribera del Río Arauca la presencia de algunos genes biosintéticos pertenecientes a los complejos Policétido sintasa tipo I: PKSI, Policétido sintasa tipo II: PKSII y Péptido sintasa no ribosómicos NRPS. Proceso en el cual se tomaron 30 cepas Pertenecientes a la Universidad de La Sabana, identificadas dentro del género Streptomyces, en las cuales gen que codifica para algunas enzimas de los complejos PKSI, PKSII y NRPS, fue amplificado en 18 cepas (60%); a diferencia de 12 (40%) cepas que no presentaron amplificación para los mismos genes; Se identificaron 6 cepas : 160 (Streptomyces sp), 326 (Streptomyces sp), 412 (Streptomyces sp parvulus ), 445 (Streptomyces sp), 627 (Streptomyces sp) y 270(Streptomyces sp ) con la presencia de los tres genes seleccionados, correspondientes a los complejos PKSI, PKSII y NRPS. Se realizó una evaluación de la actividad antimicrobiana por enfrentamiento directo o antagonismo donde se determinó una actividad antibactérial preferencialmente hacia bacterias Gram positivas del 67%, comparando estas evaluaciones con los resultados de la técnica de PCR, indicando que las cepas que no presentaron amplificación pero si tienen actividad antimicrobiana, pueden producir antibióticos mediante otros mecanismos diferentes al objeto de estudio de la presente investigación. Se concluye que la técnica de PCR disminuye los tiempos de evaluación de producción de metabolitos antibacteriales en cepas microbiológicas con una alta eficiencia y a bajos costos (frente a técnicas microbiológicas) aunque se debe ampliar el grupo de genes a evaluar a otros sistemas de síntesis de compuestos antibacteriales.TABLA DE CONTENIDO 1 Introducción 1 2 Antecedentes 5 3 Marco teórico 9 3.1 Actinomicetes 9 3.2 Policétidos 10 3.3 Biosíntesis de policétidos y péptidos no ribosomales 11 3.3.1 Biosíntesis de policétidos tipo PKS I y PKS II 11 3.3.2 Biosíntesis de péptidos no ribosomales 16 4 OBJETIVOS 19 4.1 OBJETIVO GENERAL 19 4.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS 19 5 Diseño metodológico 20 5.1 Tipo de investigación 20 5.2 Población 20 5.3 Muestra 20 5.4 Hipótesis 20 5.5 Variables 21 5.6 Técnicas y procedimientos 22 5.6.1 Activación de actinomicetos 22 5.6.2 Identificación morfológica 23 5.6.3 Actividad antimicrobiana 23 5.6.4 Extracción de ADN 24 5.6.4.1 5.6.4.1 Amplificación del gen 16S rRNA 25 5.6.4.2 5.6.4.2 Identificación y presencia de genes mediante PCR 26 5.6.4.3. Secuenciación 28 6 Análisis estadístico 28 7 Resultados 28 7.1 . Cultivos 29 7.1.1. Activación de actinomicetos 29 7.1.2 Identificación morfológica 31 7.1.2.1 Características Macroscópicas 31 7.1.2.2 Características Microscópicas 32 7.1.3 Actividad antimicrobiana 33 7.2 Interpretación de datos por técnica de enfrentamiento directo 35 8 Identificación Molecular 36 8.1 Extracción de ADN 36 8.2 Amplificación del gen 16S rRNA 37 8.3 Resultados de la técnica de PCR detección del gen PKSI, PKSII Y NRPS 39 8.3.1 Determinación de las concentraciones para la técnica de PCR 39 8.3.2 Amplicones para los Genes PKSI, PKSII YNRPS 42 8.4 Interpretación de datos presencia de los genes PKSI, PKSII Y NRPS en PCR 46 9 Interpretación de resultados de las técnicas PCR y Enfrentamiento directo 48 9.1 Actividad antimicrobiana vs presencia de genes biosintéticos 48 10. Análisis estadístico 50 10 Discusión 51 12 Conclusiones 61 Referencias bibliográficas 63PregradoConstructor(a) y Gestor(a) en Arquitectura68p.application/pdfspaUniversidad Colegio Mayor de CundinamarcaFacultad de Ingeniería y ArquitecturaBogotá D.CConstrucción y Gestión en Arquitectura Ciclo ProfesionalUniversidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2018https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/info:eu-repo/semantics/closedAccessAtribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0)http://purl.org/coar/access_right/c_14cbAnalisis de la presencia de los complejos enzimaticos Pksi, Pksii y Nrps por Pcr y/o enfrentamiento directo en actinobacterias aisladas del rio AraucaTrabajo de grado - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fhttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85Textinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesishttps://purl.org/redcol/resource_type/TPinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionGanesan P et al. 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presentacion.pdfapplication/pdf5107888https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3637/3/ANALISIS%20DE%20LA%20PRESENCIA%20DE%20LOS%20COMPLEJOS%20ENZIMATICOS.%20presentacion.pdfe75d6188fe60d3abec39e3d6e5337f8cMD53open accessLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-814828https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3637/4/license.txt2f9959eaf5b71fae44bbf9ec84150c7aMD54open accessTEXTAnalisis de la Presencia de complejos enzimaticos PKSI- PKSII Y NRPS.pdf.txtAnalisis de la Presencia de complejos enzimaticos PKSI- PKSII Y NRPS.pdf.txtExtracted texttext/plain114146https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3637/5/Analisis%20de%20la%20Presencia%20de%20complejos%20enzimaticos%20PKSI-%20PKSII%20Y%20NRPS.pdf.txtdaea2686b3d03e8bdf7a3eb304e54058MD55open accessCartas.pdf.txtCartas.pdf.txtExtracted 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