Interacción de la proteína Tlp de Plasmodium Vivax con células Hepáticas y Epiteliales como mediadora del atravesamiento celular.
La malaria causada por Plasmodium vivax continúa siendo un problema de salud pública en el mundo y desafortunadamente la resistencia de este parásito ante las opciones terapéuticas enfatizan la necesidad de profundizar en el estudio biológico de P. vivax con el fin de desarrollar nuevas alternativas...
- Autores:
-
Cardona Guarín, David Felipe
- Tipo de recurso:
- Trabajo de grado de pregrado
- Fecha de publicación:
- 2021
- Institución:
- Colegio Mayor de Cundinamarca
- Repositorio:
- Repositorio Colegio Mayor de Cundinamarca
- Idioma:
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- oai:repositorio.unicolmayor.edu.co:unicolmayor/2839
- Acceso en línea:
- https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/2839
- Palabra clave:
- Plasmodium vivax
TLP
Invasión
Conservación
Proteína
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- Derechos Reservados - Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2021
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La malaria causada por Plasmodium vivax continúa siendo un problema de salud pública en el mundo y desafortunadamente la resistencia de este parásito ante las opciones terapéuticas enfatizan la necesidad de profundizar en el estudio biológico de P. vivax con el fin de desarrollar nuevas alternativas que ayuden a mitigar la situación. Se ha descrito, que la familia de proteínas relacionadas con la trombospondina (TRAP) están involucradas en procesos como la motilidad del parásito y la invasión a las células hospederas. Un miembro de esta familia es la proteína similar a TRAP (TLP, del inglés, TRAP- like protein) presente en las diferentes especies del género Plasmodium, lo cual sugiere que TLP cumple una función importante para el desarrollo del parásito durante una o más etapas del ciclo de vida. En especies como P. falciparum se ha encontrado que está proteína está involucrada en un proceso denominado atravesamiento celular el cual corresponde a la interacción con un amplio número de células epiteliales y hepáticas hasta acceder al hepatocito. Teniendo en cuenta la relevancia funcional de esta proteína, este proyecto de investigación se enfocó en evaluar la interacción que tiene la proteína TLP de P. vivax con estas células durante el desplazamiento del esporozoíto. Los resultados muestran que la proteína recombinante PvTLP interactúa con las células HepG2 y HeLa y tres péptidos localizados en el dominio vWA fueron capaces de inhibir la unión de la proteína a las HepG2, donde el péptido 42433 presentó una unión específica superior al 1%. |
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Arévalo Pinzón, Gabriela3dd83e7b546fe22342d6cc31cc2cbc79Castañeda Ramírez, Jeimmy Johana0314e07283a7341d301e410463aac247Cardona Guarín, David Feliped06b014098ed8f32c664376da230d9f92021-09-11T00:59:34Z2021-09-11T00:59:34Z2021-05-28https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/2839La malaria causada por Plasmodium vivax continúa siendo un problema de salud pública en el mundo y desafortunadamente la resistencia de este parásito ante las opciones terapéuticas enfatizan la necesidad de profundizar en el estudio biológico de P. vivax con el fin de desarrollar nuevas alternativas que ayuden a mitigar la situación. Se ha descrito, que la familia de proteínas relacionadas con la trombospondina (TRAP) están involucradas en procesos como la motilidad del parásito y la invasión a las células hospederas. Un miembro de esta familia es la proteína similar a TRAP (TLP, del inglés, TRAP- like protein) presente en las diferentes especies del género Plasmodium, lo cual sugiere que TLP cumple una función importante para el desarrollo del parásito durante una o más etapas del ciclo de vida. En especies como P. falciparum se ha encontrado que está proteína está involucrada en un proceso denominado atravesamiento celular el cual corresponde a la interacción con un amplio número de células epiteliales y hepáticas hasta acceder al hepatocito. Teniendo en cuenta la relevancia funcional de esta proteína, este proyecto de investigación se enfocó en evaluar la interacción que tiene la proteína TLP de P. vivax con estas células durante el desplazamiento del esporozoíto. Los resultados muestran que la proteína recombinante PvTLP interactúa con las células HepG2 y HeLa y tres péptidos localizados en el dominio vWA fueron capaces de inhibir la unión de la proteína a las HepG2, donde el péptido 42433 presentó una unión específica superior al 1%.Malaria caused by Plasmodium vivax continues to be a public health problem in the world and unfortunately the resistance of this parasite to therapeutic options emphasizes the need to deepen the biological study of P. vivax in order to develop new alternatives to help mitigate the situation. It has been described that the family of thrombospondin-related proteins (TRAP) is involved in processes such as parasite motility and host cell invasion. One member of this family is the TRAP-like protein (TLP) present in the different species of the genus Plasmodium, suggesting that TLP plays an important role in parasite development during one or more stages of the life cycle. In species such as P. falciparum, it has been found that this protein is involved in a process called cell crossing, which corresponds to the interaction with a wide number of epithelial and hepatic cells until accessing the hepatocyte. Considering the functional relevance of this protein, this research project focused on evaluating the interaction of the TLP protein of P. vivax with these cells during the movement of the sporozoite. The results show that the recombinant PvTLP protein interacts with HepG2 and HeLa cells and three peptides located in the vWA domain were able to inhibit the binding of the protein to HepG2, where peptide 42433 presented a specific binding higher than 1%.RESUMEN 11 INTRODUCCIÓN 13 OBJETIVOS 15 Objetivo general 15 Objetivos específicos 15 1. ANTECEDENTES 16 2. MARCO TEÓRICO 20 2.1. Malaria 20 2.2. Epidemiología 20 2.2.1. Epidemiologia en Colombia 22 2.3. Manifestaciones Clínicas 23 2.4. Plasmodium vivax 24 2.4.1 Ciclo de vida 24 2.4.2. Proceso de invasión al hepatocito 26 2.5. Familia TRAP de Plasmodium sp. 28 2.5.1. Proteína similar a TRAP – (TLP) de Plasmodium 30 3. DISEÑO METODOLÓGICO 31 3.1 Tipo de investigación 31 3.2 Enfoque de la investigación 31 3.3 Población objeto de estudio 31 3.4 Muestra objeto de estudio 31 3.5. Hipótesis 31 3.6. Variables 31 3.6.1 Variables independientes 31 3.6.2. Variables dependientes 32 3.6.3. Variables controladas 32 3.7. OBTENCION DE PvTLP RECOMBINANTE 33 3.7.1 Transformación en E. coli 33 3.7.2. Expresión de la proteína recombinante PvTLP 33 3.7.3. Separación de la proteína recombinante por SDS-PAGE 34 3.7.4 Identificación por Western blot 34 3.7.5 Purificación de la proteína recombinante 34 3.7.6. Cuantificación de proteína recombinante 35 3.8 DETERMINACIÓN DE LA UNIÓN DE LA PROTEÍNA A LAS CELULAS EN CULTIVO 35 3.8.1 Cultivo celular 35 3.8.2. Determinación de la unión total de la proteína 35 3.8.3. Radiomarcaje de la proteína recombinante 36 3.8.4. Ensayos de unión de proteína radiomarcada 36 3.9. SELECCIÓN, DESEÑO DE PEPTIDOS SINTETICOS Y ENSAYOS DE COMPETICION 3.9.1. Análisis, Selección y síntesis de péptidos 37 3.9.2 Ensayos de competición proteína-péptido 37 3.9.3. Radio marcaje de los péptidos sintéticos 38 3.9.4. Ensayos de unión de los péptidos radio marcados 38 4. OBTENCION DE PvTLP RECOMBINANTE 39 4.1. Transformación de células JM109 con el vector PQE30 PvTLP 39 4.2. Expresión de PvTLP 40 4.3 Purificación y diálisis de la proteína PvTLP 41 4.4. Determinación de la unión total de la proteína PvTLP por citometría de flujo 42 4.5. Unión de la proteína recombinante radiomarcada a células HepG2 y HeLa. 44 4.6. Alineamiento múltiple de secuencias y selección de péptidos 44 4.7. Ensayo de competición con los péptidos y proteína PvTLP 46 4.8. Ensayo de unión de péptidos sintéticos a células HepG2 48 5. DISCUSIÓN 49 6. CONCLUSIONES 53 7. PERSPECTIVAS 53 8. 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