Optimización de péptidos quiméricos derivados del antígeno AMA – 1 de Plasmodium yoelii, para el anclaje a moléculas H2-IEd en modelo murino.

La malaria ha sido descrita por la OMS como una de las enfermedades tropicales de mayor importancia en salud publica debido a las cifras de mortalidad y morbilidad que presentan en su mayor parte en zonas donde los determinantes de salud son precarios, esto debido a las dificultades encontradas para...

Full description

Autores:
Hernández Bermúdez, Luisa Fernanda
Tipo de recurso:
Trabajo de grado de pregrado
Fecha de publicación:
2022
Institución:
Colegio Mayor de Cundinamarca
Repositorio:
Repositorio Colegio Mayor de Cundinamarca
Idioma:
spa
OAI Identifier:
oai:repositorio.unicolmayor.edu.co:unicolmayor/6915
Acceso en línea:
https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/6915
Palabra clave:
Plasmodium
Complejo mayor de histocompatibilidad
Péptido
AMA-1
Bioinformática
Rights
closedAccess
License
Derechos Reservados - Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2024
id UCOLMAYOR2_ca96ad0fdbee5d187a5915f70885c017
oai_identifier_str oai:repositorio.unicolmayor.edu.co:unicolmayor/6915
network_acronym_str UCOLMAYOR2
network_name_str Repositorio Colegio Mayor de Cundinamarca
repository_id_str
dc.title.spa.fl_str_mv Optimización de péptidos quiméricos derivados del antígeno AMA – 1 de Plasmodium yoelii, para el anclaje a moléculas H2-IEd en modelo murino.
title Optimización de péptidos quiméricos derivados del antígeno AMA – 1 de Plasmodium yoelii, para el anclaje a moléculas H2-IEd en modelo murino.
spellingShingle Optimización de péptidos quiméricos derivados del antígeno AMA – 1 de Plasmodium yoelii, para el anclaje a moléculas H2-IEd en modelo murino.
Plasmodium
Complejo mayor de histocompatibilidad
Péptido
AMA-1
Bioinformática
title_short Optimización de péptidos quiméricos derivados del antígeno AMA – 1 de Plasmodium yoelii, para el anclaje a moléculas H2-IEd en modelo murino.
title_full Optimización de péptidos quiméricos derivados del antígeno AMA – 1 de Plasmodium yoelii, para el anclaje a moléculas H2-IEd en modelo murino.
title_fullStr Optimización de péptidos quiméricos derivados del antígeno AMA – 1 de Plasmodium yoelii, para el anclaje a moléculas H2-IEd en modelo murino.
title_full_unstemmed Optimización de péptidos quiméricos derivados del antígeno AMA – 1 de Plasmodium yoelii, para el anclaje a moléculas H2-IEd en modelo murino.
title_sort Optimización de péptidos quiméricos derivados del antígeno AMA – 1 de Plasmodium yoelii, para el anclaje a moléculas H2-IEd en modelo murino.
dc.creator.fl_str_mv Hernández Bermúdez, Luisa Fernanda
dc.contributor.advisor.none.fl_str_mv Rodríguez Obediente, Kewin Jair
Hernández Rojas, Edith del Carmen
dc.contributor.author.none.fl_str_mv Hernández Bermúdez, Luisa Fernanda
dc.contributor.corporatename.spa.fl_str_mv Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca
dc.subject.proposal.spa.fl_str_mv Plasmodium
Complejo mayor de histocompatibilidad
Péptido
AMA-1
Bioinformática
topic Plasmodium
Complejo mayor de histocompatibilidad
Péptido
AMA-1
Bioinformática
description La malaria ha sido descrita por la OMS como una de las enfermedades tropicales de mayor importancia en salud publica debido a las cifras de mortalidad y morbilidad que presentan en su mayor parte en zonas donde los determinantes de salud son precarios, esto debido a las dificultades encontradas para su control y eliminación. La existencia de un tratamiento profiláctico se hace cada vez más necesario para mitigar los efectos de esta afección representando así un reto para la comunidad científica, por esta razón se han diseñado nuevas estrategias para hallar proteínas candidatas a vacuna contra la malaria. En este proyecto se evaluó la antigenicidad y capacidad de unión a Complejo Mayor de Histocompatibilidad H2- IEd de péptidos derivados de regiones conservadas de la proteína AMA – 1 de Plasmodium yoelii, adicionalmente mediante herramientas bioinformáticas se diseñaron 6 constructos de péptidos quiméricos con alta unión a H2-IEd que permiten ser utilizados como objeto de estudio para la determinación de la respuesta inmune presentada en modelo murino. Los resultados obtenidos nos permiten garantizar la metodología y su aplicabilidad para la evaluación in vitro de péptidos y la optimización in silico de constructos que representen importancia en el desarrollo de un tratamiento profiláctico peptídico ante esta u otra enfermedad.
publishDate 2022
dc.date.issued.none.fl_str_mv 2022
dc.date.accessioned.none.fl_str_mv 2024-05-23T21:57:45Z
dc.date.available.none.fl_str_mv 2024-05-23T21:57:45Z
dc.type.spa.fl_str_mv Trabajo de grado - Pregrado
dc.type.coar.spa.fl_str_mv http://purl.org/coar/resource_type/c_7a1f
dc.type.coarversion.spa.fl_str_mv http://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85
dc.type.content.spa.fl_str_mv Text
dc.type.driver.spa.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/bachelorThesis
dc.type.redcol.spa.fl_str_mv https://purl.org/redcol/resource_type/TP
dc.type.version.spa.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
format http://purl.org/coar/resource_type/c_7a1f
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.none.fl_str_mv https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/6915
url https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/6915
dc.language.iso.spa.fl_str_mv spa
language spa
dc.relation.references.spa.fl_str_mv OPS, OMS. Guía para atención clínica integral del paciente con malaria. Bogotá: Ministerio de la Protección Social. 2010.
Organization WH. World malaria report 2021. 2021.
Organization WH. World malaria report 2020: 20 years of global progress and challenges. 2020.
Pérez DAM. Determinación del proteoma de la cepa vcg-1 de plasmodium vivax y caracterización de moléculas candidatas para su inclusión en el desarrollo de una vacuna: Universidad de Salamanca; 2017.
Prieto P. Comités de ética en investigación con seres humanos: relevancia actual en Colombia Experiencia de la Fundación Santa Fe de Bogotá. Acta Médica Colombiana. 2011;36(2):98-104.
González I. Inmunidad a la malaria letal en modelos murinos: adquisición espontánea o mediada por tratamiento quimioterapéutico. 2013.
Stevenson M, Riley E. Innate immunity to malaria. Nature Reviews Immunology. 2004;4(3):169-80.
Rojas W, Anaya J, Cano L, Aristizábal B, Gómez L, Lopera D. Inmunología de Rojas: CIB Fondo Editorial; 2007.
Tobón-Castaño A. Acciones necesarias para la eliminación de la malaria en Colombia. Revista Ciencias de la Salud. 2020;18(3):1-3.
Alonso P. Vacunas contra la malaria.
Goodman A, Forbes E, Williams A, Douglas A, de Cassan S, Bauza K, et al. The utility of Plasmodium berghei as a rodent model for anti-merozoite malaria vaccine assessment. Scientific reports. 2013;3(1):1-13.
Draper S, Sack B, King C, Nielsen C, Rayner J, Seder R, et al. Malaria vaccines: recent advances and new horizons. Cell host & microbe. 2018;24(1):43-56.
Tubo N, Pagán A, Taylor J, Nelson R, Linehan J, Ertelt J, et al. Single naive CD4+ T cells from a diverse repertoire produce different effector cell types during infection. Cell. 2013;153(4):785-96.
Carvalho L, Oliveira S, Alves F, Brígido M, Muniz J, Daniel-Ribeiro C. Aotus infulatus monkey is susceptible to Plasmodium falciparum infection and may constitute an alternative experimental model for malaria. Memorias do Instituto Oswaldo Cruz. 2000;95(3):363-5.
Nardin E. The past decade in malaria synthetic peptide vaccine clinical trials. Human vaccines. 2010;6(1):27-38.
Fenton B, Clark J, Khan C, Robinson J, Walliker D, Ridley R, et al. Structural and antigenic polymorphism of the 35-to 48-kilodalton merozoite surface antigen (MSA-2) of the malaria parasite Plasmodium falciparum. Molecular and cellular biology. 1991;11(2):963-71.
Parker M, Penarete-Vargas DM, Hamilton P, Guérin A, Dubey J, Perlman S, et al. Dissecting the interface between apicomplexan parasite and host cell: Insights from a divergent AMA–RON2 pair. Proceedings of the National Academy of Sciences. 2016;113(2):398-403.
Tyler J, Treeck M, Boothroyd J. Focus on the ringleader: the role of AMA1 in apicomplexan invasion and replication. Trends in parasitology. 2011;27(9):410-20.
Mitchell G, Thomas A, Margos G, Dluzewski A, Bannister L. Apical membrane antigen 1, a major malaria vaccine candidate, mediates the close attachment of invasive merozoites to host red blood cells. Infection and immunity. 2004;72(1):154-8.
Yang A, Lopaticki S, O'Neill M, Erickson S, Douglas D, Kneteman N, et al. AMA1 and MAEBL are important for Plasmodium falciparum sporozoite infection of the liver. Cellular microbiology. 2017;19(9):e12745.
Fraser T, Kappe S, Narum D, VanBuskirk K, Adams J. Erythrocyte-binding activity of Plasmodium yoelii apical membrane antigen-1 expressed on the surface of transfected COS-7 cells. Molecular and biochemical parasitology. 2001;117(1):49-59.
Narum D, Ogun S, Thomas A, Holder A. Immunization with parasite-derived apical membrane antigen 1 or passive immunization with a specific monoclonal antibody protects BALB/c mice against lethal Plasmodium yoelii yoelii YM blood-stage infection. Infection and immunity. 2000;68(5):2899-906.
Millares J. La vacuna contra la malaria: un gran desafío para la humanidad.
Srinivasan P, Ekanem E, Diouf A, Tonkin M, Miura K, Boulanger M, et al. Immunization with a functional protein complex required for erythrocyte invasion protects against lethal malaria. Proceedings of the National Academy of Sciences. 2014;111(28):10311-6.
Neafsey D, Juraska M, Bedford T, Benkeser D, Valim C, Griggs A, et al. Genetic diversity and protective efficacy of the RTS, S/AS01 malaria vaccine. New England Journal of Medicine. 2015;373(21):2025-37.
Dennison S, Reichartz M, Abraha M, Spreng R, Wille-Reece U, Dutta S, et al., editors. Magnitude, Specificity, and Avidity of Sporozoite-Specific Antibodies Associate With Protection Status and Distinguish Among RTS, S/AS01 Dose Regimens. Open Forum Infectious Diseases; 2021: Oxford University Press US.
Ouattara A, Niangaly A, Adams M, Coulibaly D, Kone A, Traore K, et al. Epitopebased sieve analysis of Plasmodium falciparum sequences from a FMP2. 1/AS02A vaccine trial is consistent with differential vaccine efficacy against immunologically relevant AMA1 variants. Vaccine. 2020;38(35):5700-6.
Pérez M. Diseño y síntesis de péptidos para el diagnóstico de la infección por el virus de la hepatitis G (GBV-C/HGV): Universitat de Barcelona; 2007.
Marussig M, Rénia L, Motard A, Miltgen F, Pétour P, Chauhan V, et al. Linear and multiple antigen peptides containing defined T and B epitopes of the Plasmodium yoelii circumsporozoite protein: antibody-mediated protection and boosting by sporozoite infection. International immunology. 1997;9(12):1817-24.
Leiton J, Montoya J, Villaroel M, Mondragón E. Influencia de la fuerza de infección y la transmisión vertical en la malaria: Modelado Matemático. Revista Facultad de Ciencias Básicas. 2017;13(1):4-18.
Ochoa J, Osorio L. Epidemiology of urban malaria in Quibdo, Choco. Biomedica. 2006;26(2):278-85.
Ospina M, Mancel E, Pacheco O, Quijada H. Enfermedades trasmitidas por vectores. Malaria. Boletín Epidemiológico Semanal. 2015;52:35-9.
Khanam S, Sharma S, Pathak S. Lethal and nonlethal murine malarial infections differentially affect apoptosis, proliferation, and CD 8 expression on thymic T cells. Parasite immunology. 2015;37(7):349-61.
Vale N, Aguiar L, Gomes P. Antimicrobial peptides: a new class of antimalarial drugs? Frontiers in Pharmacology. 2014;5:275.
Salud INd. Boletín epidemiológico semana 11. ins.gov.co: Instituto Nacional de Salud; 2022 [
Delgado J, Flores L, Chico M. Malaria importada en países no endémicos de las Américas, factores predisponentes 2013–2017. Boletín de Malariología y Salud Ambiental. 2021;61:52.
Granda S, Jiménez M. Paludismo: El desarrollo de una vacuna. Control Calid SEIMC. 2005:1-10.
Huang B, Pearman E, Kim C. Mouse models of uncomplicated and fatal malaria. Bioprotocol. 2015;5(13).
Killick-Kendrick R. Rodent malaria: Elsevier; 2012.
Taylor-Robinson A. Regulation of immunity to Plasmodium: implications from mouse models for blood stage malaria vaccine design. Experimental parasitology. 2010;126(3):406-14.
Boundenga L, Ngoubangoye B, Ntie S, Moukodoum N, Renaud F, Rougeron V, et al. Rodent malaria in Gabon: diversity and host range. International Journal for Parasitology: Parasites and Wildlife. 2019;10:117-24.
Vasquez G, Patiño E, Garcia L, Barrera L. Los antigenos del complejo mayor de histocompatibilidad clase II: regulacion y relacion con infecciones intracelulares. Acta méd colomb. 2001:73-81.
Gardner M, Hall N, Fung E, White O, Berriman M, Hyman R, et al. Genome sequence of the human malaria parasite Plasmodium falciparum. Nature. 2002;419(6906):498-511.
Oliva S. La malaria y la controversia sobre su vacuna. Offarm: farmacia y sociedad. 2001;20(4):140-3.
Olotu A, Fegan G, Wambua J, Nyangweso G, Awuondo K, Leach A, et al. Four-year efficacy of RTS, S/AS01E and its interaction with malaria exposure. New England Journal of Medicine. 2013;368(12):1111-20.
Reyes C, Molina-Franky J, Aza-Conde J, Suárez C, Pabón L, Moreno-Vranich A, et al. Malaria: Paving the way to developing peptide-based vaccines against invasion in infectious diseases. Biochemical and biophysical research communications. 2020;527(4):1021-6.
Moisa A, Kolesanova E. Synthetic peptide vaccines. Insight and Control of Infectious Disease in Global Scenario. 2012:201-28.
Yepes-Pérez Y, López C, Suárez CF, Patarroyo MA. Plasmodium vivax Pv 12 B-cell epitopes and HLA-DRβ1*-dependent T-cell epitopes in vitro antigenicity. PloS one. 2018;13(9):e0203715.
Jensen KK, Andreatta M, Marcatili P, Buus S, Greenbaum JA, Yan Z, et al. Improved methods for predicting peptide binding affinity to MHC class II molecules. Immunology. 2018;154(3):394-406.
Reynisson B, Barra C, Kaabinejadian S, Hildebrand WH, Peters B, Nielsen M. Improved prediction of MHC II antigen presentation through integration and motif deconvolution of mass spectrometry MHC eluted ligand data. Journal of proteome research Immunology. 2020;19(6):2304-15.
Livingston B, Crimi C, Newman M, Higashimoto Y, Appella E, Sidney J, et al. A rational strategy to design multiepitope immunogens based on multiple Th lymphocyte epitopes. The Journal of Immunology. 2002;168(11):5499-506.
Giguère S, Drouin A, Lacoste A, Marchand M, Corbeil J, Laviolette F. MHC-NP: predicting peptides naturally processed by the MHC. Journal of immunological methods. 2013;400:30-6.
Drozdetskiy A, Cole C, Procter J, Barton GJ. JPred4: a protein secondary structure prediction server. Nucleic acids research. 2015;43(W1):W389-W94.
Lacerda-Queiroz N, Riteau N, Eastman R, Bock K, Orandle M, Moore I, et al. Mechanism of splenic cell death and host mortality in a Plasmodium yoelii malaria model. Scientific reports. 2017;7(1):1-12.
Lesmes L, Gallego G, Carreño L, Hoebecke J, Lozano J. Actividad funcional de anticuerpos inducidos por péptidos-miméticos derivados del antígeno msp-2 del plasmodium, como potenciales agentes inmunoterapéuticos en malaria causada por plasmodium yoelii y plasmodium berghei en ratonres balb/c. Revista Colombiana de Ciencias Químico Farmacéuticas. 2011.
Martinez C. Estudio comparativo y evaluacion del impacto de la cloroquina en muestras de ratones infectados con Plasmodium berghei, Plasmodium yoelii y Plasmodium vinckei; según la produccion de derivados hematimetricos. 2004.
Langhorne J, Quin S, Sanni L. Mouse models of blood-stage malaria infections: immune responses and cytokines involved in protection and pathology. Chem Immunol. 2002;80(80):204-28.
Deharo E, Gautret P, Mufioz V, Sauvain M. Técnicas de laboratorio para la selección de sustancias antimalaricas. Biblioteca virtual em saúde. 2000.
Martinez M. Estudio comparativo y evaluacion del impacto de la cloroquina en muestras de ratones infectados con Plasmodium berghei, Plasmodium yoelii y Plasmodium vinckei; según la produccion de derivados hematimetricos. 2004.
Carlton J, Angiuoli S, Suh B, Kooij T, Pertea M, Silva J, et al. Genome sequence and comparative analysis of the model rodent malaria parasite Plasmodium yoelii yoelii. Nature. 2002;419(6906):512-9.
Taylor H, Triglia T, Thompson J, Sajid M, Fowler R, Wickham M, et al. Plasmodium falciparum homologue of the genes for Plasmodium vivax and Plasmodium yoelii adhesive proteins, which is transcribed but not translated. Infection and immunity. 2001;69(6):3635- 45.
Fu Y, Ding Y, Zhou T, Ou Q, Xu W. Comparative histopathology of mice infected with the 17XL and 17XNL strains of Plasmodium yoelii. Journal of Parasitology. 2012;98(2):310-5.
Peng Y, Qi Y, Zhang C, Yao X, Wu J, Pattaradilokrat S, et al. Plasmodium yoelii erythrocyte-binding-like protein modulates host cell membrane structure, immunity, and disease severity. MBio. 2020;11(1):e02995-19.
Obando‐Martinez A, Curtidor H, Vanegas M, Arévalo‐Pinzón G, Patarroyo M, Patarroyo M. Conserved regions from Plasmodium falciparum MSP11 specifically interact with host cells and have a potential role during merozoite invasion of red blood cells. Journal of cellular biochemistry. 2010;110(4):882-92.
Patarroyo M, Bermúdez A, Alba M, Vanegas M, Moreno-Vranich A, Poloche L, et al. IMPIPS: The Immune Protection-Inducing Protein Structure Concept in the Search for Steric-Electron and Topochemical Principles for Complete Fully-Protective Chemically Synthesised Vaccine Development. PLoS One. 2015;10(4):e0123249.
Rodriguez L, Jaimes R. Evaluación de la antigenicidad de péptidos derivados de la proteína pv12 de Plasmodium Vivax en muestras obtenidas de individuos de zonas endémicas de Colombia. 2018.
Kindt T, Goldsby R, Osborne B. Inmunología de Kuby: McGraw Hill; 2007.
De Jesús R, Torres E. Evaluación de factores de reproducción para detectar posible contaminación genética en cepas consanguíneas de ratones. J Bol Mal Salud Amb. 2006;46(2).
Rodríguez J, Bernal P, Prieto S, Correa C. Teoría de péptidos de alta unión de malaria al glóbulo rojo: predicciones teóricas de nuevos péptidos de unión y mutaciones teóricas predictivas de aminoácidos críticos. Inmunología. 2010;29(1):7-19.
Rodrigues-da-Silva R, Correa-Moreira D, Soares I, de-Luca P, Totino P, Morgado F, et al. Immunogenicity of synthetic peptide constructs based on PvMSP9E795-A808, a linear B-cell epitope of the P. vivax merozoite surface protein-9. Vaccine. 2019;37(2):306-13.
Reynisson B, Alvarez B, Paul S, Peters B, Nielsen M. NetMHCpan-4.1 and NetMHCIIpan-4.0: improved predictions of MHC antigen presentation by concurrent motif deconvolution and integration of MS MHC eluted ligand data. Nucleic acids research. 2020;48(W1):W449-W54.
Nielsen M, Lundegaard C, Blicher T, Peters B, Sette A, Justesen S, et al. Quantitative predictions of peptide binding to any HLA-DR molecule of known sequence: NetMHCIIpan. PLoS computational biology. 2008;4(7):e1000107.
Tourdot S, Oukka M, Manuguerra J, Magafa V, Vergnon I, Riche N, et al. Chimeric peptides: a new approach to enhancing the immunogenicity of peptides with low MHC class I affinity: application in antiviral vaccination. The Journal of Immunology. 1997;159(5):2391-8.
Fonseca J, Cabrera-Mora M, Singh B, Oliveira-Ferreira J, da Costa Lima-Junior J, Calvo-Calle J, et al. A chimeric protein-based malaria vaccine candidate induces robust T cell responses against Plasmodium vivax MSP119. Scientific reports. 2016;6(1):1-18.
Rodríguez J. Teoría de unión al HLA clase II: teoría de probabilidad, combinatoria y entropía aplicadas a secuencias peptídicas. Inmunología. 2008;27(4):151-66.
dc.rights.spa.fl_str_mv Derechos Reservados - Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2024
dc.rights.uri.spa.fl_str_mv https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/
dc.rights.accessrights.spa.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/closedAccess
dc.rights.creativecommons.spa.fl_str_mv Atribución-NoComercial 4.0 Internacional (CC BY-NC 4.0)
dc.rights.coar.spa.fl_str_mv http://purl.org/coar/access_right/c_14cb
rights_invalid_str_mv Derechos Reservados - Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2024
https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/
Atribución-NoComercial 4.0 Internacional (CC BY-NC 4.0)
http://purl.org/coar/access_right/c_14cb
eu_rights_str_mv closedAccess
dc.format.extent.spa.fl_str_mv 71p.
dc.format.mimetype.spa.fl_str_mv application/pdf
dc.publisher.spa.fl_str_mv Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca
dc.publisher.faculty.spa.fl_str_mv Facultad de Ciencias de la Salud
dc.publisher.place.spa.fl_str_mv Bogotá D.C
dc.publisher.program.spa.fl_str_mv Bacteriología y Laboratorio Clínico
institution Colegio Mayor de Cundinamarca
bitstream.url.fl_str_mv https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/6915/1/PROYECTO%20DE%20GRADO%20-%20LUISA%20FERNANDA%20HERN%c3%81NDEZ%20BERM%c3%9aDEZ.pdf
https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/6915/2/Presentaci%c3%b3n%20final%20proyecto.pdf
https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/6915/3/CARTA%20DERECHOS%20DE%20AUTOR%20Hernandez.pdf
https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/6915/4/5.%20arreglado%20luisa%20FORMATO%20IDENTIFICACI%c3%93N%20TRABAJOS%20DE%20GRADO%20firmado%20%281%29.pdf
https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/6915/5/license.txt
https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/6915/6/PROYECTO%20DE%20GRADO%20-%20LUISA%20FERNANDA%20HERN%c3%81NDEZ%20BERM%c3%9aDEZ.pdf.txt
https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/6915/8/Presentaci%c3%b3n%20final%20proyecto.pdf.txt
https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/6915/10/CARTA%20DERECHOS%20DE%20AUTOR%20Hernandez.pdf.txt
https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/6915/12/5.%20arreglado%20luisa%20FORMATO%20IDENTIFICACI%c3%93N%20TRABAJOS%20DE%20GRADO%20firmado%20%281%29.pdf.txt
https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/6915/7/PROYECTO%20DE%20GRADO%20-%20LUISA%20FERNANDA%20HERN%c3%81NDEZ%20BERM%c3%9aDEZ.pdf.jpg
https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/6915/9/Presentaci%c3%b3n%20final%20proyecto.pdf.jpg
https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/6915/11/CARTA%20DERECHOS%20DE%20AUTOR%20Hernandez.pdf.jpg
https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/6915/13/5.%20arreglado%20luisa%20FORMATO%20IDENTIFICACI%c3%93N%20TRABAJOS%20DE%20GRADO%20firmado%20%281%29.pdf.jpg
bitstream.checksum.fl_str_mv c5166504303a4455338292da288c1c2d
11a96dcf320a028930607cd5d10757d4
8e07f4b08949b583d18b44c97e8ae087
190ed78037f40d553605d90dc611c0b9
2f9959eaf5b71fae44bbf9ec84150c7a
273b0838a3f9726703a3ae7334292d21
8a0be51f9533c358b022fb1d56a49eb9
529eaaa98481479efa24dfe4179301ad
2f64b5013c79b9562d24fbfc35c5a68b
c719d839cc55c65d2dc73e34b9305692
7e3d91b57270d2d1547f46d3aa8f7d65
15f65eb942301e42674aef875170fb86
c7c51f43beba33659a60ed0b06cb7ddf
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv MD5
MD5
MD5
MD5
MD5
MD5
MD5
MD5
MD5
MD5
MD5
MD5
MD5
repository.name.fl_str_mv Biblioteca Digital Unicolmayor
repository.mail.fl_str_mv repositorio@unicolmayor.edu.co
_version_ 1812210074740850688
spelling Rodríguez Obediente, Kewin Jair37bb1f00483c3f3e38356be032a1bf8bHernández Rojas, Edith del Carmen691add7415cca2135c3de6050313997bHernández Bermúdez, Luisa Fernanda54da9569e4c2693a0546290d189190d7Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca2024-05-23T21:57:45Z2024-05-23T21:57:45Z2022https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/6915La malaria ha sido descrita por la OMS como una de las enfermedades tropicales de mayor importancia en salud publica debido a las cifras de mortalidad y morbilidad que presentan en su mayor parte en zonas donde los determinantes de salud son precarios, esto debido a las dificultades encontradas para su control y eliminación. La existencia de un tratamiento profiláctico se hace cada vez más necesario para mitigar los efectos de esta afección representando así un reto para la comunidad científica, por esta razón se han diseñado nuevas estrategias para hallar proteínas candidatas a vacuna contra la malaria. En este proyecto se evaluó la antigenicidad y capacidad de unión a Complejo Mayor de Histocompatibilidad H2- IEd de péptidos derivados de regiones conservadas de la proteína AMA – 1 de Plasmodium yoelii, adicionalmente mediante herramientas bioinformáticas se diseñaron 6 constructos de péptidos quiméricos con alta unión a H2-IEd que permiten ser utilizados como objeto de estudio para la determinación de la respuesta inmune presentada en modelo murino. Los resultados obtenidos nos permiten garantizar la metodología y su aplicabilidad para la evaluación in vitro de péptidos y la optimización in silico de constructos que representen importancia en el desarrollo de un tratamiento profiláctico peptídico ante esta u otra enfermedad.CONTENIDO RESUMEN 9 1. INTRODUCCION 9 2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA 13 2.1. Pregunta problema 15 3. OBJETIVOS 15 3.1. General 15 3.2. Especificos 16 3.2.1. Determinar la antigenicidad de peptidos derivados de regiones conservadas de la proteina AMA – 1 de Plasmodium yoelii. 16 3.2.2. Seleccionar peptidos derivados de regiones conservadas de la proteina AMA- 1 de Plasmodium yoelii dependientes de su union a moleculas H2-IEd. 16 3.2.3. Disenar y seleccionar in silico peptidos quimericos con capacidad de union a H2-IEd. 16 4. ANTECEDENTES 16 5. MARCO REFERENCIAL 18 5.1. Malaria 18 5.1.1. Ciclo de vida 20 5.2. Epidemiologia 21 5.3. Malaria murina 23 5.3.1. Plasmodium yoelii 24 5.3.2. Cultivo celular 24 5.4. Aspectos eticos 25 5.4.1. Normativa de manejo animal 25 6. DISENO METODOLOGICO 25 6.1. Universo, poblacion, muestra 25 6.1.1. Poblacion de estudio 26 6.1.2. Muestra 26 6.2. Justificacion 26 6.2.2. Hipotesis 29 7. METODOLOGIA 29 7.2. Infeccion de ratones con Plasmodium yoelii 17XNL 30 7.2.1. Parasitemia e histologia 31 1.1. Evaluacion de antigenicidad de peptidos derivados de PyAMA-1 31 7.3. Cultivo de Plasmodium yoelii 17XNL 32 7.3.1. Cultivo celular 32 7.4. Evaluacion de reconocimiento especifico de molecula H2-IEd por anticuerpo producido in vitro 34 7.4.1. Purificacion de moleculas H2-IEd 34 7.5. Cuantificacion de moleculas H2 - IEd 36 7.6. Perfil de union de peptidos a moleculas H2-IEd 36 7.7. Diseno y optimizacion de peptidos quimericos para anclaje a moleculas H2-IEd . 37 8. RESULTADOS 37 8.1. Curso de la infeccion por Plasmodium yoelii en modelo murino. 38 8.2. Infeccion in vitro de GRs murinos con P. yoelii. 41 8.3. Evaluacion de antigenicidad presentada por cada peptido derivado de regiones conservadas de la proteina AMA-1 de Plasmodium yoelii 42 8.4. Evaluacion de capacidad de union a CMH H2-IEd 45 8.4.1. Evaluacion de identidad del H2 – IEd obtenido 47 8.4.2. Cuantificacion CMH 49 8.5. Constructos disenados in silico con alta union a H2-IEd 52 9. Discusion 59 10. CONCLUSIONES 65 BIBLIOGRAFIA 67PregradoBacteriólogo(a) y Laboratorista Clínico71p.application/pdfspaUniversidad Colegio Mayor de CundinamarcaFacultad de Ciencias de la SaludBogotá D.CBacteriología y Laboratorio ClínicoDerechos Reservados - Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2024https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/info:eu-repo/semantics/closedAccessAtribución-NoComercial 4.0 Internacional (CC BY-NC 4.0)http://purl.org/coar/access_right/c_14cbOptimización de péptidos quiméricos derivados del antígeno AMA – 1 de Plasmodium yoelii, para el anclaje a moléculas H2-IEd en modelo murino.Trabajo de grado - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fhttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85Textinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesishttps://purl.org/redcol/resource_type/TPinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionOPS, OMS. Guía para atención clínica integral del paciente con malaria. Bogotá: Ministerio de la Protección Social. 2010.Organization WH. World malaria report 2021. 2021.Organization WH. World malaria report 2020: 20 years of global progress and challenges. 2020.Pérez DAM. Determinación del proteoma de la cepa vcg-1 de plasmodium vivax y caracterización de moléculas candidatas para su inclusión en el desarrollo de una vacuna: Universidad de Salamanca; 2017.Prieto P. Comités de ética en investigación con seres humanos: relevancia actual en Colombia Experiencia de la Fundación Santa Fe de Bogotá. Acta Médica Colombiana. 2011;36(2):98-104.González I. Inmunidad a la malaria letal en modelos murinos: adquisición espontánea o mediada por tratamiento quimioterapéutico. 2013.Stevenson M, Riley E. Innate immunity to malaria. Nature Reviews Immunology. 2004;4(3):169-80.Rojas W, Anaya J, Cano L, Aristizábal B, Gómez L, Lopera D. Inmunología de Rojas: CIB Fondo Editorial; 2007.Tobón-Castaño A. Acciones necesarias para la eliminación de la malaria en Colombia. Revista Ciencias de la Salud. 2020;18(3):1-3.Alonso P. Vacunas contra la malaria.Goodman A, Forbes E, Williams A, Douglas A, de Cassan S, Bauza K, et al. The utility of Plasmodium berghei as a rodent model for anti-merozoite malaria vaccine assessment. Scientific reports. 2013;3(1):1-13.Draper S, Sack B, King C, Nielsen C, Rayner J, Seder R, et al. Malaria vaccines: recent advances and new horizons. Cell host & microbe. 2018;24(1):43-56.Tubo N, Pagán A, Taylor J, Nelson R, Linehan J, Ertelt J, et al. Single naive CD4+ T cells from a diverse repertoire produce different effector cell types during infection. Cell. 2013;153(4):785-96.Carvalho L, Oliveira S, Alves F, Brígido M, Muniz J, Daniel-Ribeiro C. Aotus infulatus monkey is susceptible to Plasmodium falciparum infection and may constitute an alternative experimental model for malaria. Memorias do Instituto Oswaldo Cruz. 2000;95(3):363-5.Nardin E. The past decade in malaria synthetic peptide vaccine clinical trials. Human vaccines. 2010;6(1):27-38.Fenton B, Clark J, Khan C, Robinson J, Walliker D, Ridley R, et al. Structural and antigenic polymorphism of the 35-to 48-kilodalton merozoite surface antigen (MSA-2) of the malaria parasite Plasmodium falciparum. Molecular and cellular biology. 1991;11(2):963-71.Parker M, Penarete-Vargas DM, Hamilton P, Guérin A, Dubey J, Perlman S, et al. Dissecting the interface between apicomplexan parasite and host cell: Insights from a divergent AMA–RON2 pair. Proceedings of the National Academy of Sciences. 2016;113(2):398-403.Tyler J, Treeck M, Boothroyd J. Focus on the ringleader: the role of AMA1 in apicomplexan invasion and replication. Trends in parasitology. 2011;27(9):410-20.Mitchell G, Thomas A, Margos G, Dluzewski A, Bannister L. Apical membrane antigen 1, a major malaria vaccine candidate, mediates the close attachment of invasive merozoites to host red blood cells. Infection and immunity. 2004;72(1):154-8.Yang A, Lopaticki S, O'Neill M, Erickson S, Douglas D, Kneteman N, et al. AMA1 and MAEBL are important for Plasmodium falciparum sporozoite infection of the liver. Cellular microbiology. 2017;19(9):e12745.Fraser T, Kappe S, Narum D, VanBuskirk K, Adams J. Erythrocyte-binding activity of Plasmodium yoelii apical membrane antigen-1 expressed on the surface of transfected COS-7 cells. Molecular and biochemical parasitology. 2001;117(1):49-59.Narum D, Ogun S, Thomas A, Holder A. Immunization with parasite-derived apical membrane antigen 1 or passive immunization with a specific monoclonal antibody protects BALB/c mice against lethal Plasmodium yoelii yoelii YM blood-stage infection. Infection and immunity. 2000;68(5):2899-906.Millares J. La vacuna contra la malaria: un gran desafío para la humanidad.Srinivasan P, Ekanem E, Diouf A, Tonkin M, Miura K, Boulanger M, et al. Immunization with a functional protein complex required for erythrocyte invasion protects against lethal malaria. Proceedings of the National Academy of Sciences. 2014;111(28):10311-6.Neafsey D, Juraska M, Bedford T, Benkeser D, Valim C, Griggs A, et al. Genetic diversity and protective efficacy of the RTS, S/AS01 malaria vaccine. New England Journal of Medicine. 2015;373(21):2025-37.Dennison S, Reichartz M, Abraha M, Spreng R, Wille-Reece U, Dutta S, et al., editors. Magnitude, Specificity, and Avidity of Sporozoite-Specific Antibodies Associate With Protection Status and Distinguish Among RTS, S/AS01 Dose Regimens. Open Forum Infectious Diseases; 2021: Oxford University Press US.Ouattara A, Niangaly A, Adams M, Coulibaly D, Kone A, Traore K, et al. Epitopebased sieve analysis of Plasmodium falciparum sequences from a FMP2. 1/AS02A vaccine trial is consistent with differential vaccine efficacy against immunologically relevant AMA1 variants. Vaccine. 2020;38(35):5700-6.Pérez M. Diseño y síntesis de péptidos para el diagnóstico de la infección por el virus de la hepatitis G (GBV-C/HGV): Universitat de Barcelona; 2007.Marussig M, Rénia L, Motard A, Miltgen F, Pétour P, Chauhan V, et al. Linear and multiple antigen peptides containing defined T and B epitopes of the Plasmodium yoelii circumsporozoite protein: antibody-mediated protection and boosting by sporozoite infection. International immunology. 1997;9(12):1817-24.Leiton J, Montoya J, Villaroel M, Mondragón E. Influencia de la fuerza de infección y la transmisión vertical en la malaria: Modelado Matemático. Revista Facultad de Ciencias Básicas. 2017;13(1):4-18.Ochoa J, Osorio L. Epidemiology of urban malaria in Quibdo, Choco. Biomedica. 2006;26(2):278-85.Ospina M, Mancel E, Pacheco O, Quijada H. Enfermedades trasmitidas por vectores. Malaria. Boletín Epidemiológico Semanal. 2015;52:35-9.Khanam S, Sharma S, Pathak S. Lethal and nonlethal murine malarial infections differentially affect apoptosis, proliferation, and CD 8 expression on thymic T cells. Parasite immunology. 2015;37(7):349-61.Vale N, Aguiar L, Gomes P. Antimicrobial peptides: a new class of antimalarial drugs? Frontiers in Pharmacology. 2014;5:275.Salud INd. Boletín epidemiológico semana 11. ins.gov.co: Instituto Nacional de Salud; 2022 [Delgado J, Flores L, Chico M. Malaria importada en países no endémicos de las Américas, factores predisponentes 2013–2017. Boletín de Malariología y Salud Ambiental. 2021;61:52.Granda S, Jiménez M. Paludismo: El desarrollo de una vacuna. Control Calid SEIMC. 2005:1-10.Huang B, Pearman E, Kim C. Mouse models of uncomplicated and fatal malaria. Bioprotocol. 2015;5(13).Killick-Kendrick R. Rodent malaria: Elsevier; 2012.Taylor-Robinson A. Regulation of immunity to Plasmodium: implications from mouse models for blood stage malaria vaccine design. Experimental parasitology. 2010;126(3):406-14.Boundenga L, Ngoubangoye B, Ntie S, Moukodoum N, Renaud F, Rougeron V, et al. Rodent malaria in Gabon: diversity and host range. International Journal for Parasitology: Parasites and Wildlife. 2019;10:117-24.Vasquez G, Patiño E, Garcia L, Barrera L. Los antigenos del complejo mayor de histocompatibilidad clase II: regulacion y relacion con infecciones intracelulares. Acta méd colomb. 2001:73-81.Gardner M, Hall N, Fung E, White O, Berriman M, Hyman R, et al. Genome sequence of the human malaria parasite Plasmodium falciparum. Nature. 2002;419(6906):498-511.Oliva S. La malaria y la controversia sobre su vacuna. Offarm: farmacia y sociedad. 2001;20(4):140-3.Olotu A, Fegan G, Wambua J, Nyangweso G, Awuondo K, Leach A, et al. Four-year efficacy of RTS, S/AS01E and its interaction with malaria exposure. New England Journal of Medicine. 2013;368(12):1111-20.Reyes C, Molina-Franky J, Aza-Conde J, Suárez C, Pabón L, Moreno-Vranich A, et al. Malaria: Paving the way to developing peptide-based vaccines against invasion in infectious diseases. Biochemical and biophysical research communications. 2020;527(4):1021-6.Moisa A, Kolesanova E. Synthetic peptide vaccines. Insight and Control of Infectious Disease in Global Scenario. 2012:201-28.Yepes-Pérez Y, López C, Suárez CF, Patarroyo MA. Plasmodium vivax Pv 12 B-cell epitopes and HLA-DRβ1*-dependent T-cell epitopes in vitro antigenicity. PloS one. 2018;13(9):e0203715.Jensen KK, Andreatta M, Marcatili P, Buus S, Greenbaum JA, Yan Z, et al. Improved methods for predicting peptide binding affinity to MHC class II molecules. Immunology. 2018;154(3):394-406.Reynisson B, Barra C, Kaabinejadian S, Hildebrand WH, Peters B, Nielsen M. Improved prediction of MHC II antigen presentation through integration and motif deconvolution of mass spectrometry MHC eluted ligand data. Journal of proteome research Immunology. 2020;19(6):2304-15.Livingston B, Crimi C, Newman M, Higashimoto Y, Appella E, Sidney J, et al. A rational strategy to design multiepitope immunogens based on multiple Th lymphocyte epitopes. The Journal of Immunology. 2002;168(11):5499-506.Giguère S, Drouin A, Lacoste A, Marchand M, Corbeil J, Laviolette F. MHC-NP: predicting peptides naturally processed by the MHC. Journal of immunological methods. 2013;400:30-6.Drozdetskiy A, Cole C, Procter J, Barton GJ. JPred4: a protein secondary structure prediction server. Nucleic acids research. 2015;43(W1):W389-W94.Lacerda-Queiroz N, Riteau N, Eastman R, Bock K, Orandle M, Moore I, et al. Mechanism of splenic cell death and host mortality in a Plasmodium yoelii malaria model. Scientific reports. 2017;7(1):1-12.Lesmes L, Gallego G, Carreño L, Hoebecke J, Lozano J. Actividad funcional de anticuerpos inducidos por péptidos-miméticos derivados del antígeno msp-2 del plasmodium, como potenciales agentes inmunoterapéuticos en malaria causada por plasmodium yoelii y plasmodium berghei en ratonres balb/c. Revista Colombiana de Ciencias Químico Farmacéuticas. 2011.Martinez C. Estudio comparativo y evaluacion del impacto de la cloroquina en muestras de ratones infectados con Plasmodium berghei, Plasmodium yoelii y Plasmodium vinckei; según la produccion de derivados hematimetricos. 2004.Langhorne J, Quin S, Sanni L. Mouse models of blood-stage malaria infections: immune responses and cytokines involved in protection and pathology. Chem Immunol. 2002;80(80):204-28.Deharo E, Gautret P, Mufioz V, Sauvain M. Técnicas de laboratorio para la selección de sustancias antimalaricas. Biblioteca virtual em saúde. 2000.Martinez M. Estudio comparativo y evaluacion del impacto de la cloroquina en muestras de ratones infectados con Plasmodium berghei, Plasmodium yoelii y Plasmodium vinckei; según la produccion de derivados hematimetricos. 2004.Carlton J, Angiuoli S, Suh B, Kooij T, Pertea M, Silva J, et al. Genome sequence and comparative analysis of the model rodent malaria parasite Plasmodium yoelii yoelii. Nature. 2002;419(6906):512-9.Taylor H, Triglia T, Thompson J, Sajid M, Fowler R, Wickham M, et al. Plasmodium falciparum homologue of the genes for Plasmodium vivax and Plasmodium yoelii adhesive proteins, which is transcribed but not translated. Infection and immunity. 2001;69(6):3635- 45.Fu Y, Ding Y, Zhou T, Ou Q, Xu W. Comparative histopathology of mice infected with the 17XL and 17XNL strains of Plasmodium yoelii. Journal of Parasitology. 2012;98(2):310-5.Peng Y, Qi Y, Zhang C, Yao X, Wu J, Pattaradilokrat S, et al. Plasmodium yoelii erythrocyte-binding-like protein modulates host cell membrane structure, immunity, and disease severity. MBio. 2020;11(1):e02995-19.Obando‐Martinez A, Curtidor H, Vanegas M, Arévalo‐Pinzón G, Patarroyo M, Patarroyo M. Conserved regions from Plasmodium falciparum MSP11 specifically interact with host cells and have a potential role during merozoite invasion of red blood cells. Journal of cellular biochemistry. 2010;110(4):882-92.Patarroyo M, Bermúdez A, Alba M, Vanegas M, Moreno-Vranich A, Poloche L, et al. IMPIPS: The Immune Protection-Inducing Protein Structure Concept in the Search for Steric-Electron and Topochemical Principles for Complete Fully-Protective Chemically Synthesised Vaccine Development. PLoS One. 2015;10(4):e0123249.Rodriguez L, Jaimes R. Evaluación de la antigenicidad de péptidos derivados de la proteína pv12 de Plasmodium Vivax en muestras obtenidas de individuos de zonas endémicas de Colombia. 2018.Kindt T, Goldsby R, Osborne B. Inmunología de Kuby: McGraw Hill; 2007.De Jesús R, Torres E. Evaluación de factores de reproducción para detectar posible contaminación genética en cepas consanguíneas de ratones. J Bol Mal Salud Amb. 2006;46(2).Rodríguez J, Bernal P, Prieto S, Correa C. Teoría de péptidos de alta unión de malaria al glóbulo rojo: predicciones teóricas de nuevos péptidos de unión y mutaciones teóricas predictivas de aminoácidos críticos. Inmunología. 2010;29(1):7-19.Rodrigues-da-Silva R, Correa-Moreira D, Soares I, de-Luca P, Totino P, Morgado F, et al. Immunogenicity of synthetic peptide constructs based on PvMSP9E795-A808, a linear B-cell epitope of the P. vivax merozoite surface protein-9. Vaccine. 2019;37(2):306-13.Reynisson B, Alvarez B, Paul S, Peters B, Nielsen M. NetMHCpan-4.1 and NetMHCIIpan-4.0: improved predictions of MHC antigen presentation by concurrent motif deconvolution and integration of MS MHC eluted ligand data. Nucleic acids research. 2020;48(W1):W449-W54.Nielsen M, Lundegaard C, Blicher T, Peters B, Sette A, Justesen S, et al. Quantitative predictions of peptide binding to any HLA-DR molecule of known sequence: NetMHCIIpan. PLoS computational biology. 2008;4(7):e1000107.Tourdot S, Oukka M, Manuguerra J, Magafa V, Vergnon I, Riche N, et al. Chimeric peptides: a new approach to enhancing the immunogenicity of peptides with low MHC class I affinity: application in antiviral vaccination. The Journal of Immunology. 1997;159(5):2391-8.Fonseca J, Cabrera-Mora M, Singh B, Oliveira-Ferreira J, da Costa Lima-Junior J, Calvo-Calle J, et al. A chimeric protein-based malaria vaccine candidate induces robust T cell responses against Plasmodium vivax MSP119. Scientific reports. 2016;6(1):1-18.Rodríguez J. Teoría de unión al HLA clase II: teoría de probabilidad, combinatoria y entropía aplicadas a secuencias peptídicas. Inmunología. 2008;27(4):151-66.PlasmodiumComplejo mayor de histocompatibilidadPéptidoAMA-1BioinformáticaORIGINALPROYECTO DE GRADO - LUISA FERNANDA HERNÁNDEZ BERMÚDEZ.pdfPROYECTO DE GRADO - LUISA FERNANDA HERNÁNDEZ BERMÚDEZ.pdfapplication/pdf7825449https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/6915/1/PROYECTO%20DE%20GRADO%20-%20LUISA%20FERNANDA%20HERN%c3%81NDEZ%20BERM%c3%9aDEZ.pdfc5166504303a4455338292da288c1c2dMD51open accessPresentación final proyecto.pdfPresentación final proyecto.pdfapplication/pdf5936189https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/6915/2/Presentaci%c3%b3n%20final%20proyecto.pdf11a96dcf320a028930607cd5d10757d4MD52open accessCARTA DERECHOS DE AUTOR Hernandez.pdfCARTA DERECHOS DE AUTOR Hernandez.pdfapplication/pdf154123https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/6915/3/CARTA%20DERECHOS%20DE%20AUTOR%20Hernandez.pdf8e07f4b08949b583d18b44c97e8ae087MD53metadata only access5. arreglado luisa FORMATO IDENTIFICACIÓN TRABAJOS DE GRADO firmado (1).pdf5. arreglado luisa FORMATO IDENTIFICACIÓN TRABAJOS DE GRADO firmado (1).pdfapplication/pdf212455https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/6915/4/5.%20arreglado%20luisa%20FORMATO%20IDENTIFICACI%c3%93N%20TRABAJOS%20DE%20GRADO%20firmado%20%281%29.pdf190ed78037f40d553605d90dc611c0b9MD54metadata only accessLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-814828https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/6915/5/license.txt2f9959eaf5b71fae44bbf9ec84150c7aMD55open accessTEXTPROYECTO DE GRADO - LUISA FERNANDA HERNÁNDEZ BERMÚDEZ.pdf.txtPROYECTO DE GRADO - LUISA FERNANDA HERNÁNDEZ BERMÚDEZ.pdf.txtExtracted texttext/plain121325https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/6915/6/PROYECTO%20DE%20GRADO%20-%20LUISA%20FERNANDA%20HERN%c3%81NDEZ%20BERM%c3%9aDEZ.pdf.txt273b0838a3f9726703a3ae7334292d21MD56open accessPresentación final proyecto.pdf.txtPresentación final proyecto.pdf.txtExtracted texttext/plain13286https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/6915/8/Presentaci%c3%b3n%20final%20proyecto.pdf.txt8a0be51f9533c358b022fb1d56a49eb9MD58open accessCARTA DERECHOS DE AUTOR Hernandez.pdf.txtCARTA DERECHOS DE AUTOR Hernandez.pdf.txtExtracted texttext/plain1146https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/6915/10/CARTA%20DERECHOS%20DE%20AUTOR%20Hernandez.pdf.txt529eaaa98481479efa24dfe4179301adMD510metadata only access5. arreglado luisa FORMATO IDENTIFICACIÓN TRABAJOS DE GRADO firmado (1).pdf.txt5. arreglado luisa FORMATO IDENTIFICACIÓN TRABAJOS DE GRADO firmado (1).pdf.txtExtracted texttext/plain3111https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/6915/12/5.%20arreglado%20luisa%20FORMATO%20IDENTIFICACI%c3%93N%20TRABAJOS%20DE%20GRADO%20firmado%20%281%29.pdf.txt2f64b5013c79b9562d24fbfc35c5a68bMD512metadata only accessTHUMBNAILPROYECTO DE GRADO - LUISA FERNANDA HERNÁNDEZ BERMÚDEZ.pdf.jpgPROYECTO DE GRADO - LUISA FERNANDA HERNÁNDEZ BERMÚDEZ.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg7604https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/6915/7/PROYECTO%20DE%20GRADO%20-%20LUISA%20FERNANDA%20HERN%c3%81NDEZ%20BERM%c3%9aDEZ.pdf.jpgc719d839cc55c65d2dc73e34b9305692MD57open accessPresentación final proyecto.pdf.jpgPresentación final proyecto.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg7841https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/6915/9/Presentaci%c3%b3n%20final%20proyecto.pdf.jpg7e3d91b57270d2d1547f46d3aa8f7d65MD59open accessCARTA DERECHOS DE AUTOR Hernandez.pdf.jpgCARTA DERECHOS DE AUTOR Hernandez.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg9577https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/6915/11/CARTA%20DERECHOS%20DE%20AUTOR%20Hernandez.pdf.jpg15f65eb942301e42674aef875170fb86MD511metadata only access5. arreglado luisa FORMATO IDENTIFICACIÓN TRABAJOS DE GRADO firmado (1).pdf.jpg5. arreglado luisa FORMATO IDENTIFICACIÓN TRABAJOS DE GRADO firmado (1).pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg13412https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/6915/13/5.%20arreglado%20luisa%20FORMATO%20IDENTIFICACI%c3%93N%20TRABAJOS%20DE%20GRADO%20firmado%20%281%29.pdf.jpgc7c51f43beba33659a60ed0b06cb7ddfMD513metadata only accessunicolmayor/6915oai:repositorio.unicolmayor.edu.co:unicolmayor/69152024-05-24 03:00:38.37An error occurred on the license name.|||https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/open accessBiblioteca Digital Unicolmayorrepositorio@unicolmayor.edu.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

Publicaciones similares