Genotipificación de Malassezia Furfur atípica y una aproximación de potenciales inhibidores de crecimiento

Malassezia hace parte de la micobiota normal de la piel de humanos y animales de sangre caliente; son levaduras lipofílicas y lípido-dependientes, relacionadas con entidades dermatológicas e infecciones sistémicas. Actualmente, el género incluye 18 especies, entre las cuales se puede destacar a: M....

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Autores:
Rojas Padilla, Diana Catalina
Tipo de recurso:
Trabajo de grado de pregrado
Fecha de publicación:
2018
Institución:
Colegio Mayor de Cundinamarca
Repositorio:
Repositorio Colegio Mayor de Cundinamarca
Idioma:
spa
OAI Identifier:
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Acceso en línea:
https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/3759
Palabra clave:
Malassezia
Micobiota
Infecciones sistémicas
Furfur atípica
Sensibilidad antifúngica
Filogenia
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Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2018
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description Malassezia hace parte de la micobiota normal de la piel de humanos y animales de sangre caliente; son levaduras lipofílicas y lípido-dependientes, relacionadas con entidades dermatológicas e infecciones sistémicas. Actualmente, el género incluye 18 especies, entre las cuales se puede destacar a: M. globosa, M. restricta, M. furfur, M. sympodialis como las especies con mayor frecuencia aisladas a partir de pacientes con enfermedades como, pitiriasis versicolor, caspa, dermatitis seborreica, dermatitis atópica, foliculitis, psoriasis y M. pachydermatis en otitis y dermatitis en animales domésticos. Debido a la presentación de tipo crónico de estas enfermedades y al uso recurrente de compuestos antifúngicos, que está relacionado con fallas terapéuticas, hace necesaria la búsqueda de nuevas alternativas para su tratamiento. El objetivo de este estudio fue caracterizar fenotípica y molecularmente ocho cepas de M. furfur con patrón de asimilación de Tween 80 atípico (diferente). Además de evaluar su sensibilidad in vitro a dos inhibidores, usando los métodos de microdilución en placa (M27-A3CLSI, modificada), macrodilución (M27-A3) y difusión en agar (M44-A). En general, nuestros resultados de caracterización morfológica y fisiológica confirmaron el patrón atípico. Los análisis filogenéticos multilocus permitieron verificar la posición filogenética de nuestros aislados al formar un clado independiente dentro del complejo de M. furfur, utilizando las secuencias de ITS y LSU. Además, el análisis con el fragmento de RPB2 indica que nuestros aislados son potencialmente una nueva especie dentro del género con una distancia filogenética de aproximadamente 6% con cepas de M. furfur. En la sensibilidad antifúngica in vitro con los inhibidores Lisina y Treonina, no se observó inhibición en los ensayos de sensibilidad
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spelling Martinez Granados, Vilma Yamile94970ee431cfeb9643667fe116faf3dbCelis Ramírez, Adriana Marceladedc77c26361a148a4226ba3982f3f01Rojas Padilla, Diana Catalina2c41e7e6e8381e7b2bcd1472e45782b3Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca2021-12-02T19:23:19Z2021-12-02T19:23:19Z2018-11https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/375958667Malassezia hace parte de la micobiota normal de la piel de humanos y animales de sangre caliente; son levaduras lipofílicas y lípido-dependientes, relacionadas con entidades dermatológicas e infecciones sistémicas. Actualmente, el género incluye 18 especies, entre las cuales se puede destacar a: M. globosa, M. restricta, M. furfur, M. sympodialis como las especies con mayor frecuencia aisladas a partir de pacientes con enfermedades como, pitiriasis versicolor, caspa, dermatitis seborreica, dermatitis atópica, foliculitis, psoriasis y M. pachydermatis en otitis y dermatitis en animales domésticos. Debido a la presentación de tipo crónico de estas enfermedades y al uso recurrente de compuestos antifúngicos, que está relacionado con fallas terapéuticas, hace necesaria la búsqueda de nuevas alternativas para su tratamiento. El objetivo de este estudio fue caracterizar fenotípica y molecularmente ocho cepas de M. furfur con patrón de asimilación de Tween 80 atípico (diferente). Además de evaluar su sensibilidad in vitro a dos inhibidores, usando los métodos de microdilución en placa (M27-A3CLSI, modificada), macrodilución (M27-A3) y difusión en agar (M44-A). En general, nuestros resultados de caracterización morfológica y fisiológica confirmaron el patrón atípico. Los análisis filogenéticos multilocus permitieron verificar la posición filogenética de nuestros aislados al formar un clado independiente dentro del complejo de M. furfur, utilizando las secuencias de ITS y LSU. Además, el análisis con el fragmento de RPB2 indica que nuestros aislados son potencialmente una nueva especie dentro del género con una distancia filogenética de aproximadamente 6% con cepas de M. furfur. En la sensibilidad antifúngica in vitro con los inhibidores Lisina y Treonina, no se observó inhibición en los ensayos de sensibilidadINTRODUCCIÓN 16 1. OBJETIVOS 19 1.1GENERAL 19 1.2ESPECÍFICOS 19 2. ANTECEDENTES 20 3. MARCO TEÓRICO 22 3.1 Taxonomía 22 3.2 Características microbiológicas 24 3.2.1 Morfología 24 3.2.2 Ultraestructura 25 3.2.3 Lipidodependencia 25 3.2.4 Patogenicidad 26 3.2.5 Reproducción 27 3.3 Epidemiología y ecología en humanos 27 3.4 Identificación 29 3.4.1 Condiciones de cultivo 29 3.4.2 Pruebas fenotípicas y fisiológicas 30 3.4.3 Identificación molecular 32 3.5Tratamiento 34 3.6 Pruebas de sensibilidad in vitro 35 3.7Inhibidores 36 3.7.1 Lisina 36 3.7.2 Treonina 36 4. Diseño metodológico 38 4.1Tipo de investigación 38 4.2 Hipótesis 38 4.3Variables e indicadores 39 4.4Técnicas y procedimientos 40 4.4.1 Origen de los aislados 40 4.4.2 Pruebas fenotípicas y fisiológicas 41 4.4.3 Extracción de ADN 42 4.4.4 PCR convencional 42 4.4.5 Secuenciación 43 4.4.6 Ensamblaje de secuencias 44 4.4.7 Alineamientos múltiples 44 4.4.8 Análisis filogenético 44 4.4.9 Pruebas de sensibilidad antifúngica in vitro 45 4.4.9.1Preparación del inoculo 45 4.4.9.2Preparación de las diluciones del antifúngico y de los inhibidores Sensibilización de las placas 46 4.4.9.3Técnica de Macrodilución 46 5. RESULTADOS 49 5.1 Caracterización morfológica y fisiológica 49 5.2 Identificación molecular 56 5.2.1 PCR 57 5.2.2 Análisis filogenético 58 5.3 Sensibilidad de los inhibidores 59 5.3.1 Técnica de microdilución 60 5.3.2 Técnica de macrodilución 63 5.3.3 Técnica de difusión en agar 64 6. DISCUSIÓN 67 7. CONCLUSIONES 73 REFERENCIAS ANEXOS 89PregradoBacteriólogo(a) y Laboratorista Clínico94p.application/pdfspaUniversidad Colegio Mayor de CundinamarcaFacultad de Ciencias de la SaludBogotá D.CBacteriología y Laboratorio ClínicoUniversidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2018https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/info:eu-repo/semantics/closedAccessAtribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0)http://purl.org/coar/access_right/c_14cbGenotipificación de Malassezia Furfur atípica y una aproximación de potenciales inhibidores de crecimientoTrabajo de grado - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fhttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85Textinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesishttps://purl.org/redcol/resource_type/TPinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionCelis A, Wösten H, Triana S, Restrepo S, Cock H. Malassezia spp. beyond The Mycobiota. SMDJ [Internet]. 2017 Noviembre [Citado 2018 marzo 17]; 3(3):1019. 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Thumbnailimage/jpeg7056https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3759/10/GENOTIPIFICACION%20DE%20MALASSEZIA%20FURFUR%20ATIPICA%20Y%20UNA%20APROXIMACION%20DE%20INHIBIDORES%20DE%20CRECIMIENTO%20PR.pdf.jpg8d7161106de6d927b3a88df5a07b48c3MD510open accessunicolmayor/3759oai:repositorio.unicolmayor.edu.co:unicolmayor/37592021-12-03 03:00:50.207An error occurred on the license name.|||https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/open accessBiblioteca Digital 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