Evaluación de la diversidad bacteriana procedente de agua Marina antártica utilizando microbiología convencional
Las condiciones especiales del ecosistema de la Antártida son propicias para encontrar diversidad microbiana con potencial para ser utilizada en bioprospección. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la diversidad microbiana procedente de agua marina de la Antártida, que fue tomada por la Arm...
- Autores:
-
Torres Cortés, Sara Gabriela
Avendaño Osorio, Yuly Vanessa
- Tipo de recurso:
- Trabajo de grado de pregrado
- Fecha de publicación:
- 2019
- Institución:
- Colegio Mayor de Cundinamarca
- Repositorio:
- Repositorio Colegio Mayor de Cundinamarca
- Idioma:
- spa
- OAI Identifier:
- oai:repositorio.unicolmayor.edu.co:unicolmayor/3534
- Acceso en línea:
- https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/3534
- Palabra clave:
- Diversidad
Biosfera
Microorganismos
Enzimas
Bioprospección
Agua Marina Antártica
Microbiología Convencional
Actividad Enzimática
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- closedAccess
- License
- https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/
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Las condiciones especiales del ecosistema de la Antártida son propicias para encontrar diversidad microbiana con potencial para ser utilizada en bioprospección. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la diversidad microbiana procedente de agua marina de la Antártida, que fue tomada por la Armada Nacional de Colombia en la expedición 2017, con el fin de establecer la capacidad enzimática utilizando microbiología convencional. La metodología incluyó estimular el crecimiento de las bacterias en temperaturas de 5, 10 y 20 °C con diferentes concentraciones de NaCl para su recuperación, determinación de la actividad enzimática de las bacterias que crecieron en los medios de cultivo y conservación de los microorganismos a - 70 °C. Se aislaron 18 cepas, entre psicrófilas y psicrótrofas. El 22,2 % crecieron a temperatura de 5 ºC; 5,5 % a 10 ºC y 72,2 % a 20 ºC. El 27,7 % de las bacterias aisladas fueron halófilas moderadas (6 % - 15 % de NaCl) y el 72,2 % halófilas leves (<6% de NaCl). El 44,4 % presentaron estructura de cocobacilos Gram negativos, el 38,8% bacilos Gram negativos y el 16,6 % cocos Gram positivos. El 61,1 % demostraron actividad enzimática amilolítica, el 22,2 % fijadora de nitrógeno, el 22,2 % desnitrificantes y ninguna presentó actividad proteolítica. Se concluye que existe una diversidad bacteriana con actividad enzimática que podría ser utilizada en bioprospección. A futuro se espera evaluar otras capacidades enzimáticas a las bacterias congeladas y hacer escalamientos para obtener biomasa que pueda ser utilizada en bioprospección. |
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Cavicchioli R., Charlton T., Erfan H., Mohd S., Siddiqui K., Williams T. Biotechnological uses of enzymes from psychrophiles. Microbial biotechnology. [Internet]. 2011 [Citado en Agosto 11 del 2017]; p. 449- 460. Disponible en: DOI: 10.1007/s00284-005-4583-9. Convey P., Brandt A., Nicole S. Life in a cold environment. In Antarctica: Global science from a frozen Continent. Walton D. W. H. Cambridge University Press, New York. [Internet]. 2013 [Citado en Agosto 2 del 2017]; p. 161- 210. Disponible en: ISBN: 9781107003927. D’Amico S., Collins T., Marx J., Feller G., Gerday C. Psychrophilic microorganisms: challenges for life. Laboratory or biochemistry. Institute of Chemistry, University of Liege, Sart-Tilman, Belgic. [Internet]. 2006 [Citado en Octubre 8 del 2017]; p.385- 389. Disponible en: PMID: 16585939. Margesin R, Schinner F. Potential of halotolerant and halophilic microorganisms for biotechnology. Extremophiles. [Internet]. 2001 [Citado en Octubre 5 del 2017]; p.5: 73-83. Disponible en: PMID: 11354458. Fernando V., Tratado antártico y mecanismos de protección del territorio antártico, 21 International Law, Revista Colombiana de Derecho Internacional. [Internet]. 2012. [Citado en junio 16 del 2018]; p. 255-295. Disponible en: ISSN:1692-8156. Junke K, Gosink J, Hoppe H, Staley J. Arthrobacter, Brachybacterium and Planococcus Isolates Identified from Antarctic Sea Ice Brine. Description of Planococcus mcmeekinii, sp. Nov. System. Appl Microbiol. [Internet]. 1998 [Citado en Octubre 12 del 2017]; p.306-314. Disponible en: PMID: 9704115. Lokendra, S., Venkata K. Isolation and Characterization of Psychrotrophic Antarctic Bacteria from Blue-green Algal Mats and Their Hydrolytic Enzymes. Department of Ocean Development, Technical Publication. [Internet]. 1998. [Citado en Octubre 12 del 2017]; p. 199- 206. Disponible en: http://14.139.119.23:8080/dspace/bitstream/123456789/424/3/ARTICL E+16.pdf. Sánchez-Porro, C., Martín, S., Mellado, E. y Ventosa, A. Diversity of moderately halophilic bacteria producing extracellular hydrolytic enzymes. Journal of Applied Microbiology. [Internet]. 2003. [Citado en agosto 2 del 2018]; p. 94: 295-300. Disponible en: PMID: 12534822. Ventosa A, Quesada E, Rodríguez F, Ruíz F, Ramos A. Numerical taxonomy of moderately halophilic-negative rods. Journal of General Microbioly. [Internet]. 1982. [Citado en Julio 11 del 2018]; p. 128: 1959- 68. Disponible en: mic-128-9-1959.pdf. Soria, V. Solari, A., Cabot, S., Varela, H. y Loperena, L. Evaluación de bacterias Antárticas como potenciales productores de lipasas de interés industrial. Depto. de Bioingeniería, Inst. Ing. Química, Facultad Ingeniería. [Internet]. 1998. [Citado en octubre 5 del 2017]; Disponible en: https://es.scribd.com/document/33014692/Evaluacion-debacterias- Antarticas-como-potenciales-productoras-de-lipasas-deinteres- industrial. Mojib N, Philpott R, Huang J, Niederweis M, Bej A. Antimycobacterial activity in vitro of pigments isolated from Antarctic bacteria. Antonie van Leeuwenhoek 98. [Internet]. 2010. [Citado en octubre 5 del 2017]; p. 531–540. Disponible en: DOI: 10.1007/s10482-010-9470-0. Rosado, A., Arroyo, M. Evaluación de la Actividad Proteolítica Extracelulares Producidas por Bacterias Marinas Aisladas en Punta Fort William, Antártida. Laboratorio de Protal-INTEC, ESPOL-CIBE, Instituto de Investigaciones de Recursos Naturales (IIRN). [Internet]. 2010. [Citado en agosto 9 del 2017]; Disponible en: https://es.scribd.com/document/58009763/bacterias-marinas. Antony R, Sanyal A, Kapse N, Dhakephalkar P, Thamban M, Nair S. Microbial communities associated with Antarctic snowpack and their biogeochemical implications. Microbial Research. [Internet]. 2016. [Citado en septiembre 12 del 2017]; p. 192-202. Disponible en: PMID: 27664737. Zhenzhen Xu, Yue Ben, Zhonglin Chen, Anxi Jiang, Jimin Shen, Xiaoyun Han. Application and microbial ecology of psychrotrophs in domestic wastewater treatment at low temperature. Chemosphere. Volume 191. [Internet]. 201¨7. [Citada en agosto 26 del 2018]. p. 946- 953. Disponible en: http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S004565351731706X. Zaady, E. and Perevolotsky, A. Enhancement of growth and establishment of Oak (Quercus ithaburensis Decaine) seedling by inoculation with Azospirillum brasilense. Forest Ecology Management. [Internet]. 2015. [Citado en agosto 11 del 2017]; p. 238-248. Disponible en: ISSN: 2319-7706 Domínguez Y. Bacterias Antárticas y agentes antibacterianos. Boletín Antártico Chileno. Vol. 27 No. 1. Punta Arenas, Chile. [Internet]. 2008. [Citado en agosto 2 del 2017]; p. 4-5. Disponible en: https://www.oceandocs.org/handle/1834/3372?locale-attribute=ru. Garzón D., Rodríguez C. Determinación de la biodiversidad bacteriana en ecosistemas glaciares de la Antártida. Universidad técnica de Ambato. [Internet]. 2013. [Citado en octubre 24 del 2017]; Disponible en: http://repositorio.uta.edu.ec/bitstream/123456789/3179/1/BQ37.pdf. Madigan M., Martinko J., Parker J. Biología de los microorganismos. Décima edición Pearson Prentice Hall. Madrid. [Internet]. 2004. [Citado en octubre 11 del 2017]; p.151- 155. Disponible en: https://es.scribd.com/doc/89368128/1-pdfBrock-Biologia-de-Los- Microorganismos-10ed-1089pag-2 Villalta J. Estudio polifásico de bacterias psicrófilas colectadas en la isla Greenwich, Bahía Chile (Continente Antártico). Universidad de Guayaquil. [Internet]. 2013. [Citado en agosto 2 del 2017]; Disponible en: http://repositorio.ug.edu.ec/handle/redug/3917. Castillo F., Roldán M., Blasco R. Biotecnología ambiental. Editorial TEBAR. Madrid. [Internet]. 2005. [Citado en noviembre 6 del 2017]; p. 381- 385, 393- 394. Disponible en: https://books.google.com.co/books?Biotecnolog%C3%ADa+ambiental. +Editorial+TEBAR.+Madrid. Rodríguez C., Gamboa A., Hernández F., García J. Biotecnología general: Principios y prácticas de laboratorio. Editorial Universidad de Costa Rica. [Internet]. 2015. [Citado en noviembre 6 del 2017]; p. 149- 15.7. Disponible en: https://books.google.com.co/books?id=vwB0fgirgN0C&lpg=PR15&ots= xZrhy-pcAh&lr&hl=es&pg=PR15#v=onepage&q&f=false. Morita R. 1975. Psychrophilic bacteria. Bacteriol Rev 39. [Internet]. 2007. [Citado en abril 27 del 2018]; pp.144–167. Disponible en: https://doi.org/10.1002/9780470015902.a0000402.pub2. Margesin, R., Miteva, V. Diversity and ecology of psychrophilic microorganisms, Springer Berlin Heidelberg, 162. [Internet]. 2008. [Citado en junio 8 del 2018]; pp.346-361. Disponible en: PMID: 21187146. Hoyoux A., Blaise V., Collins T., D’Amico S., Gratia E., Huston A., Marx J., Sonan G., Zeng G., Gerday C. Extreme catalysts from lowtemperature environments. J. Biosci. Bioeng, 98. [Internet] 2004. [Citado en noviembre 6 del 2017]; p. 317- 330. Disponible en: PMID: 16233714. Marx C., Collins S., D’Amico C., Gerday C. Cold-adapted enzymes from marine Antarctic microorganisms. Mar. Biotech, 90. [Internet]. 2007. [Citado en noviembre 21 del 2017]; p. 293- 304. Disponible en: PMID: 17195087. Alvarado V. Evaluación del exopolisacárido producido por una bacteria psicrotolerante aislada del noroeste de México y sus potenciales aplicaciones industriales. Facultad de ciencias químicas. [Internet]. 2015. [Citado en junio 8 del 2018]; Disponible en: http://eprints.uanl.mx/9408/1/1080214905.pdf. CASTREE, N. Bioprospecting: from theory to practice (and back again). Transactions of the Institute of British Geographers, 28. [Internet]. 2003. [Citado en junio 24 del 2018]; p. 1: 35-55. Disponible en: https://doi.org/10.1111/1475-5661.00076. Kushner, D.J. Vida Microbiana en Ambientes Extremos. Londres: Academic Press. [Internet]. 1978. [Citado en noviembre 29 del 2017]; p. 317-368. Disponible en: http://www.redalyc.org/html/579/57937307. Martins LO, Santos H. Accumulation of mannolyglycerate and di-myoinositol- phosphate by Pyrococcus furious in response to salinity and temperature. Appl Environ Microbiol. [Internet]. 1995. [Citado en noviembre 6 del 2017]; p. 299-303. Disponible en: PMID: 16535119. Fennema R. Química de los alimentos. Editorial Acribia. España. [Internet]. 1993. [Citado en noviembre 17 del 2017]; p. 415- 422, 427- 437. Disponible en: https://sceqa.files.wordpress.com/2014/05/quc3admica-de-losalimentos- fennema.pdf. Smalas A., Leiros H., Os V., Willassen N. Cold adapted enzymes. Biotechnol Annu Rev 6. [Internet]. 2000. [Citado en noviembre 29 del 2017]; p. 1- 57. Disponible en: PMID: 11193291. Lehninger L. Principios de Bioquímica. 2da Edición. Editorial Omega. Barcelona, España. [Internet]. 1993. [Citado en octubre 11 del 2017]; p. 196- 237. Disponible en: http://www.edicionesomega. es/bioquimica/35-lehninger-principios-de-bioquimica-978-84- 282-1603-6.html. Reed C., Cleveland C., Townsend R. Functional ecology of free-living nitrogen fixation: a contemporary perspective. Annual Review of Ecology, Evolution, and Systematics. [Internet]. 2011 [Citado en Agosto 2 del 2018]; p. 489-512. Disponible en: DOI: 10.1146/annurev-ecolsys- 102710-145034. Ward B., Arp D., Klotz M. Nitrification. American Society for Microbiology Press, Washington, U.S.A. [Internet]. 2011 [Citado en Agosto 2 del 2018]; Disponible en: https://www.princeton.edu/nitrogen/publications/pdfs/Ward_2015_Nitrifi cation.pdf. Peña A. Bioquímica grupo Noriega, México D.F. [Internet]. 2004. [Citado en octubre 11 del 2017]; p. 305. Disponible en: https://books.google.com.pe/books?id=EFUP472dyEMC&printsec=fron tcover#v=onepage&q&f=false. Gupta, R., Beg, Q.K. y Lorenz, P. Bacteruak alkaline proteases: molecular approaches and industrial applications. Apple Microbiol Biotechnol. [Internet]. (2002). [Citado en noviembre 22 del 2017]; p. 59: 15-32. Disponible en: DOI: 10.1007/s00253-002-0975-y. Rothschild L., Mancinelli L. Life in extreme environments. Nature 409. [Internet]. 2001. [Citado en noviembre 6 del 2017]; p. 1092– 1101. Disponible en: PMID: 11234023 Ruiz Herrera Brenda Lizette, Campos González Angulo Jorge Arturo, Barba Behrens Norah. Cofactor FeMco (M = Mo, V, Fe) en la nitrogenasa. Educ. quím. [Internet]. 2008. [Citado en agosto 15 del 2017]; p. 19(1): 34-41. Disponible en: ISSN: 0187-893X. Haritha R, Kumar KS, Mohan J, Ramana T. Amylolytic and proteolytic Actinobacteria Isolated from marine sediments of Bay of Bengal. International Journal of Microbiological Research. [Internet]. 2010 [Citado en Julio 20 del 2018]; 1(2), 37‐ 44. Disponible en: ISSN: 2079- 2093. Leon J., Pellon F., Unda V., Mendoza V. Produccion de enzimas extracelulares por bacterias asiladas de invertebrados marinos. Revista peruana de biología. [Internet]. 2000. [Citada en Agosto 9 del 2018]; Disponible en: http://dx.doi.org/10.15381/rpb.v7i2.6828. Zumft, W. G. (1997). Cell biology and molecular basis of denitrification. Microbiology and Molecular Biology Reviews. [Internet]. 1997 [Citado en Julio 21 del 2018]; 61(4), 533-616. Disponible en: PMID: 9409151. Fields P., Somero G. Hot spots in cold adaptation: localized increases in conformational flexibility in lactate dehydrogenase A (4) orthologs of Antarctic notothenioid fishes. Proc Natl Acad Sci USA 95. [Internet]. 1998. [Citado en septiembre 18 del 2017]; p. 11476– 1148. Disponible en: PMID: 9736762. Cavicchioli R., Charlton T., Erfan H., Mohd S., Siddiqui K., Williams T. Biotechnological uses of enzymes from psychrophiles. Microbial biotechnology. [Internet]. 2011. [Citado en noviembre 21 del 2017]; p. 449- 460. Disponible en: DOI: 10.1007/s00284-005-4583-9. Collins T., Dutron A., Georis J., Genot B., Dauvrin T., Arnaut P., Gerday C., Feller G. Use of glycoside hydrolase family 8 xylanases in baking. J. Ceredal Sci. 43. [Internet]. 2006. [Citado en noviembre 6 del 2017]; p. 79-84. Disponible en: http://citeseerx.ist.psu.edu/viewdoc/download?doi=10.1.1.545.9113&re p=rep1&type=pdf. Gerday C., Aittaleb M., Bentahir M., Chessa J., Claverie P., Collins T., D’Amico S., Dumont J., Garsoux G., Georlette D., Hoyoux A., Lonhienne T., Meuwis A., Feller, G. Cold-adapted enzymes: from fundamentals to biotechnology. Trends Biotechnol. 18. [Internet]. 2000. [Citado en noviembre 28 del 2017]; p. 103-107. Disponible en: PMID: 10675897. Bowman J. Methods for Psychrophilic Bacteria. University of Tasmania. Methods in Microbiology, Volumen 30. [Internet]. 2001. [Citado en febrero 12 del 2018]; p. 591-614. Disponible en: DOI: 10.1016/S0580- 9517(01)30064-8. López L., Hernández M., Colín C., Ortega S., Cerón G., Franco R. Las tinciones básicas en el laboratorio de microbiología. Investigación en Discapacidad. México DF. [Internet]. 2014. [Citado en febrero 12 del 2018]; p. 10-18. Disponible en: http://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2014/ir141b.pdf. Sánchez, Jaime, & Sanabria, Janeth. Metabolismos microbianos involucrados en procesos avanzados para la remoción de Nitrógeno, una revisión prospectiva. Revista Colombiana de Biotecnología. [Internet]. 2009. [Citado en agosto 17 del 2018]; p. 11(1), 114-124. Disponible en: ISSN 0123-3475. Sánchez L., Corrales L. Congelación bacteriana: Factores que intervienen en el proceso. Nova, Publicación Científica. Vol. 3. [Internet]. 2005. [Citado en abril 24 del 2018]; p. 109-113. Disponible en: URI: http://hdl.handle.net/10596/6772. Sánchez L., Corrales L. Evaluación de la congelación para conservación de especies autóctonas bacterianas. Nova, Publicación Científica, Vol. 3. [Internet]. 2005. [Citado en febrero 12 del 2018]; p. 21- 29. Disponible en: http://www.unicolmayor.edu.co/invest_nova/NOVA/ARTORIG2_4.pdf. Garzón D. Determinación de la biodiversidad bacteriana en ecosistemas glaciares de la Antártida. Ambato-Ecuador. [Internet]. 2013. [Citada en agosto 9 del 2018]. Disponible en: http://repositorio.uta.edu.ec/jspui/handle/123456789/3179. LAIRD, S; ten KATE, K. Biodiversity prospecting: the commercial use of genetic resources and best practice in benefit-sharing. In: Biodiversity and Traditional Knowledge. Equitable Partnerships in Practice. Edited By Sarah A. Laird. Earthscan Publications Ltd, London, Sterling, VA. Section IV, Chapter 8. [Internet]. 2002. [Citado en Julio 11 del 2018]; p. 241-286. Disponible en: https://portals.iucn.org/library/sites/library/files/documents/2003-25.pdf. 53. MORAN, K.; KING, S.; CARLSON, The Biodiversity Prospecting Lessons and Prospects Annual Review of Anthropology. [Internet]. 2001. [Citado en Julio 23 del 2018]. p. 30: 505-526. Disponible en: https://doi.org/10.1146/annurev.anthro.30.1.505. Centro de Información y Comunicación Ambiental de Norte América, Bioprospección. [Internet]. 2017. [Citado en Julio 11 del 2018]; Disponible en: http://www.ciceana.org.mx/contenido.php?cont=197. Sánchez T., Leon J., Woocoltt J., Arauco K. Proteasas extracelulares producidas por bacterias marinas aisladas de aguas contaminadas con efluentes pesqueros. Rev. Perú biol vol.11. [Internet]. 2004. [Citado en febrero 12 del 2018]; Disponible en: ISSN 1727-9933. Correa Galeote, D. Biodiversidad y ecología funcional de bacterias desnitrificantes. Granada: Universidad de Granada. [Internet]. 2016. [Citado en agosto 2 del 2018]; Disponible en: [http://hdl.handle.net/10481/43294]. REVILLA, A. Tecnología de la leche: procesamiento, manufactura y análisis. Segunda Edición. San José. Costa Rica. [Internet]. 1982. [Citado en agosto 17 del 2018]; p. 56, 57. Citado en: http://agris.fao.org/agris-search/search.do?recordID=XL2012001316. Rosa Margesin, Georges Feller. Biotechnological applications of psychrophiles. Environ Technol. [Internet]. 2010. [Citado en Julio 23 del 2018]; p. 31(8-9): 835–844. Disponible en: PMID: 20662375. Pérez Davo, A. Microorganismos halófilos en ambientes salinos de Andalucía: estudio taxonómico numérico y molecular. Granada: Universidad de Granada. [Internet]. 2014. [Citado en agosto 2 del 2018]; p. 418. Disponible en: http://hdl.handle.net/10481/34130. Runa Antony, Aritri Sanyal, Neelam Kapse, Prashant K. Dhakephalkar, Meloth Thamban, Shanta Nair, Microbial communities associated with Antarctic snow pack and their biogeochemical implications, Microbiological Research, Volume 192. [Internet]. 2016. [Citada en agosto 26 del 2018]. p. 192-202. Disponible en: ISSN 0944-5013. Elena, B., & Monticelli, L. S Estudio taxonómico y ecológico de las bacterias marinas de la Antártida. Taxonomic and ecological study of the marine bacteria of Antártida. [Internet]. 1998. [Citado en agosto 12 del 2018]; p. 97-106. Disponible en: elena-y-monticelli- 142616735019.pdf. Rodríguez M., Díaz C. Determinación preliminar de producción de compuestos bioactivos de actinomicetes y bacterias aislados de ecosistemas glaciares andinos y antárticos. [Internet]. 2018. [Citada en agosto 26 del 2018]; Disponible en: http://repositorio.uta.edu.ec/jspui/handle/123456789/27507. Kamekura M, Hamawata T, Onishi H. Application of halophilic nuclease H from Micrococcus varians subs. halophilus to commercial pruction of flavoring agent 5 ́-GMP. Appl Environ Microbiol. [Internet]. 1982. [Citado en marzo 23 del 2018]; p. 44: 994-5. Disponible en: ISSN 1517-8382. Carlos A. Biotecnología De Microorganismos Extremofilos. Universidad Católica de Manizales. [Internet]. 2010. [Citado en junio 16 del 2018]; Disponible en: URI: http://hdl.handle.net/10839/1410. |
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Sanchez Leal, Ligia Consuelob0b20d929821ff9c47b5d68186690827Torres Cortés, Sara Gabriela1f23e0c952b21272666d0bd6bee62790Avendaño Osorio, Yuly Vanessaffe3a7e80f83bf1a8f7de65c0cb3f1782021-10-22T18:11:30Z2021-10-22T18:11:30Z2019-02https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/353458686Las condiciones especiales del ecosistema de la Antártida son propicias para encontrar diversidad microbiana con potencial para ser utilizada en bioprospección. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la diversidad microbiana procedente de agua marina de la Antártida, que fue tomada por la Armada Nacional de Colombia en la expedición 2017, con el fin de establecer la capacidad enzimática utilizando microbiología convencional. La metodología incluyó estimular el crecimiento de las bacterias en temperaturas de 5, 10 y 20 °C con diferentes concentraciones de NaCl para su recuperación, determinación de la actividad enzimática de las bacterias que crecieron en los medios de cultivo y conservación de los microorganismos a - 70 °C. Se aislaron 18 cepas, entre psicrófilas y psicrótrofas. El 22,2 % crecieron a temperatura de 5 ºC; 5,5 % a 10 ºC y 72,2 % a 20 ºC. El 27,7 % de las bacterias aisladas fueron halófilas moderadas (6 % - 15 % de NaCl) y el 72,2 % halófilas leves (<6% de NaCl). El 44,4 % presentaron estructura de cocobacilos Gram negativos, el 38,8% bacilos Gram negativos y el 16,6 % cocos Gram positivos. El 61,1 % demostraron actividad enzimática amilolítica, el 22,2 % fijadora de nitrógeno, el 22,2 % desnitrificantes y ninguna presentó actividad proteolítica. Se concluye que existe una diversidad bacteriana con actividad enzimática que podría ser utilizada en bioprospección. A futuro se espera evaluar otras capacidades enzimáticas a las bacterias congeladas y hacer escalamientos para obtener biomasa que pueda ser utilizada en bioprospección.RESUMEN1 INTRODUCCIÓN3 OBJETIVOS5 1. ANTECEDENTES6 2. MARCO REFERENCIAL 2.1. Biodiversidad microbiana de la Antártida10 2.2. Metabolismo bacteriano11 - Efecto de la temperatura sobre el crecimiento bacteriano.12 2.3. Bacterias psicrófilas13 - Importancia de las bacterias psicrófilas como productoras de sustancias de interés biológico14 2.4. Bacterias psicrótrofas15 2.5. Bacterias halófilas16 2.6. Enzimas17 - Generalidades e importancia de enzimas bacterianas extracelulares18 2.7. Tipos de enzimas - Peptidasas19 - Amilasas20 - Nitrogenasas20 2.8 Actividad enzimática - Amilolítica21 - Proteolítica21 - Actividad enzimática del ciclo del Nitrógeno22 6 ● Fijación de Nitrógeno22 ● Nitrificación22 ● Desnitrificación23 2.9. Actividad y aplicación de enzimas psicrófilas y psicrotrofas.23 3. DISEÑO METODOLÓGICO 3.1. Universo, población y muestra25 3.2. Hipótesis, Variables e indicadores25 3.3. Técnicas y procedimientos27 FASE 1: Recuperación de microorganismos bacterianos de agua marina Antártica. - Obtención de agua marina Antártica27 - Recuperación de bacterias cultivables procedentes de agua marina Antártica27 FASE 2: Aislamiento de microorganismos bacterianos cultivables procedentes de agua marina Antártica. - Preparación de Medio de cultivo29 - Aislamiento de cepas bacterianas que lograron crecer en fase de recuperación29 FASE 3: Actividad enzimática de bacterias cultivables aisladas de agua marina Antártica. - Actividad proteolítica29 - Actividad amilolítica30 - Fijación de nitrógeno30 - Desnitrificación30 4. RESULTADOS 4.1. Aislamiento de microorganismos bacterianos cultivables procedentes de agua marina Antártica32 4.2. Actividad enzimática de bacterias cultivables aisladas de agua marina Antártica34 7 5. DISCUSIÓN58 6. CONCLUSIONES64 7. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICA65PregradoBacteriólogo(a) y Laboratorista Clínico86p.application/pdfspaUniversidad Colegio Mayor de CundinamarcaFacultad de Ciencias de la SaludBogotá D.CBacteriología y Laboratorio Clínicohttps://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/info:eu-repo/semantics/closedAccessAtribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0)http://purl.org/coar/access_right/c_14cbEvaluación de la diversidad bacteriana procedente de agua Marina antártica utilizando microbiología convencionalTrabajo de grado - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fhttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85Textinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesishttps://purl.org/redcol/resource_type/TPinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionCavicchioli R., Charlton T., Erfan H., Mohd S., Siddiqui K., Williams T. Biotechnological uses of enzymes from psychrophiles. Microbial biotechnology. [Internet]. 2011 [Citado en Agosto 11 del 2017]; p. 449- 460. Disponible en: DOI: 10.1007/s00284-005-4583-9.Convey P., Brandt A., Nicole S. Life in a cold environment. In Antarctica: Global science from a frozen Continent. Walton D. W. H. Cambridge University Press, New York. [Internet]. 2013 [Citado en Agosto 2 del 2017]; p. 161- 210. Disponible en: ISBN: 9781107003927.D’Amico S., Collins T., Marx J., Feller G., Gerday C. Psychrophilic microorganisms: challenges for life. Laboratory or biochemistry. Institute of Chemistry, University of Liege, Sart-Tilman, Belgic. [Internet]. 2006 [Citado en Octubre 8 del 2017]; p.385- 389. Disponible en: PMID: 16585939.Margesin R, Schinner F. Potential of halotolerant and halophilic microorganisms for biotechnology. Extremophiles. [Internet]. 2001 [Citado en Octubre 5 del 2017]; p.5: 73-83. Disponible en: PMID: 11354458.Fernando V., Tratado antártico y mecanismos de protección del territorio antártico, 21 International Law, Revista Colombiana de Derecho Internacional. [Internet]. 2012. [Citado en junio 16 del 2018]; p. 255-295. Disponible en: ISSN:1692-8156.Junke K, Gosink J, Hoppe H, Staley J. Arthrobacter, Brachybacterium and Planococcus Isolates Identified from Antarctic Sea Ice Brine. Description of Planococcus mcmeekinii, sp. Nov. System. Appl Microbiol. [Internet]. 1998 [Citado en Octubre 12 del 2017]; p.306-314. Disponible en: PMID: 9704115.Lokendra, S., Venkata K. Isolation and Characterization of Psychrotrophic Antarctic Bacteria from Blue-green Algal Mats and Their Hydrolytic Enzymes. Department of Ocean Development, Technical Publication. [Internet]. 1998. [Citado en Octubre 12 del 2017]; p. 199- 206. Disponible en: http://14.139.119.23:8080/dspace/bitstream/123456789/424/3/ARTICL E+16.pdf.Sánchez-Porro, C., Martín, S., Mellado, E. y Ventosa, A. Diversity of moderately halophilic bacteria producing extracellular hydrolytic enzymes. Journal of Applied Microbiology. [Internet]. 2003. [Citado en agosto 2 del 2018]; p. 94: 295-300. Disponible en: PMID: 12534822.Ventosa A, Quesada E, Rodríguez F, Ruíz F, Ramos A. Numerical taxonomy of moderately halophilic-negative rods. Journal of General Microbioly. [Internet]. 1982. [Citado en Julio 11 del 2018]; p. 128: 1959- 68. Disponible en: mic-128-9-1959.pdf.Soria, V. Solari, A., Cabot, S., Varela, H. y Loperena, L. Evaluación de bacterias Antárticas como potenciales productores de lipasas de interés industrial. Depto. de Bioingeniería, Inst. Ing. Química, Facultad Ingeniería. [Internet]. 1998. [Citado en octubre 5 del 2017]; Disponible en: https://es.scribd.com/document/33014692/Evaluacion-debacterias- Antarticas-como-potenciales-productoras-de-lipasas-deinteres- industrial.Mojib N, Philpott R, Huang J, Niederweis M, Bej A. Antimycobacterial activity in vitro of pigments isolated from Antarctic bacteria. Antonie van Leeuwenhoek 98. [Internet]. 2010. [Citado en octubre 5 del 2017]; p. 531–540. Disponible en: DOI: 10.1007/s10482-010-9470-0.Rosado, A., Arroyo, M. Evaluación de la Actividad Proteolítica Extracelulares Producidas por Bacterias Marinas Aisladas en Punta Fort William, Antártida. Laboratorio de Protal-INTEC, ESPOL-CIBE, Instituto de Investigaciones de Recursos Naturales (IIRN). [Internet]. 2010. [Citado en agosto 9 del 2017]; Disponible en: https://es.scribd.com/document/58009763/bacterias-marinas.Antony R, Sanyal A, Kapse N, Dhakephalkar P, Thamban M, Nair S. Microbial communities associated with Antarctic snowpack and their biogeochemical implications. Microbial Research. [Internet]. 2016. [Citado en septiembre 12 del 2017]; p. 192-202. Disponible en: PMID: 27664737.Zhenzhen Xu, Yue Ben, Zhonglin Chen, Anxi Jiang, Jimin Shen, Xiaoyun Han. Application and microbial ecology of psychrotrophs in domestic wastewater treatment at low temperature. Chemosphere. Volume 191. [Internet]. 201¨7. [Citada en agosto 26 del 2018]. p. 946- 953. Disponible en: http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S004565351731706X.Zaady, E. and Perevolotsky, A. Enhancement of growth and establishment of Oak (Quercus ithaburensis Decaine) seedling by inoculation with Azospirillum brasilense. Forest Ecology Management. [Internet]. 2015. [Citado en agosto 11 del 2017]; p. 238-248. Disponible en: ISSN: 2319-7706Domínguez Y. Bacterias Antárticas y agentes antibacterianos. Boletín Antártico Chileno. Vol. 27 No. 1. Punta Arenas, Chile. [Internet]. 2008. [Citado en agosto 2 del 2017]; p. 4-5. Disponible en: https://www.oceandocs.org/handle/1834/3372?locale-attribute=ru.Garzón D., Rodríguez C. Determinación de la biodiversidad bacteriana en ecosistemas glaciares de la Antártida. Universidad técnica de Ambato. [Internet]. 2013. [Citado en octubre 24 del 2017]; Disponible en: http://repositorio.uta.edu.ec/bitstream/123456789/3179/1/BQ37.pdf.Madigan M., Martinko J., Parker J. Biología de los microorganismos. Décima edición Pearson Prentice Hall. Madrid. [Internet]. 2004. [Citado en octubre 11 del 2017]; p.151- 155. Disponible en: https://es.scribd.com/doc/89368128/1-pdfBrock-Biologia-de-Los- Microorganismos-10ed-1089pag-2Villalta J. Estudio polifásico de bacterias psicrófilas colectadas en la isla Greenwich, Bahía Chile (Continente Antártico). Universidad de Guayaquil. [Internet]. 2013. [Citado en agosto 2 del 2017]; Disponible en: http://repositorio.ug.edu.ec/handle/redug/3917.Castillo F., Roldán M., Blasco R. Biotecnología ambiental. Editorial TEBAR. Madrid. [Internet]. 2005. [Citado en noviembre 6 del 2017]; p. 381- 385, 393- 394. Disponible en: https://books.google.com.co/books?Biotecnolog%C3%ADa+ambiental. +Editorial+TEBAR.+Madrid.Rodríguez C., Gamboa A., Hernández F., García J. Biotecnología general: Principios y prácticas de laboratorio. Editorial Universidad de Costa Rica. [Internet]. 2015. [Citado en noviembre 6 del 2017]; p. 149- 15.7. Disponible en: https://books.google.com.co/books?id=vwB0fgirgN0C&lpg=PR15&ots= xZrhy-pcAh&lr&hl=es&pg=PR15#v=onepage&q&f=false.Morita R. 1975. Psychrophilic bacteria. Bacteriol Rev 39. [Internet]. 2007. [Citado en abril 27 del 2018]; pp.144–167. Disponible en: https://doi.org/10.1002/9780470015902.a0000402.pub2.Margesin, R., Miteva, V. Diversity and ecology of psychrophilic microorganisms, Springer Berlin Heidelberg, 162. [Internet]. 2008. [Citado en junio 8 del 2018]; pp.346-361. Disponible en: PMID: 21187146.Hoyoux A., Blaise V., Collins T., D’Amico S., Gratia E., Huston A., Marx J., Sonan G., Zeng G., Gerday C. Extreme catalysts from lowtemperature environments. J. Biosci. Bioeng, 98. [Internet] 2004. [Citado en noviembre 6 del 2017]; p. 317- 330. Disponible en: PMID: 16233714.Marx C., Collins S., D’Amico C., Gerday C. Cold-adapted enzymes from marine Antarctic microorganisms. Mar. Biotech, 90. [Internet]. 2007. [Citado en noviembre 21 del 2017]; p. 293- 304. Disponible en: PMID: 17195087.Alvarado V. Evaluación del exopolisacárido producido por una bacteria psicrotolerante aislada del noroeste de México y sus potenciales aplicaciones industriales. Facultad de ciencias químicas. [Internet]. 2015. [Citado en junio 8 del 2018]; Disponible en: http://eprints.uanl.mx/9408/1/1080214905.pdf.CASTREE, N. Bioprospecting: from theory to practice (and back again). Transactions of the Institute of British Geographers, 28. [Internet]. 2003. [Citado en junio 24 del 2018]; p. 1: 35-55. Disponible en: https://doi.org/10.1111/1475-5661.00076.Kushner, D.J. Vida Microbiana en Ambientes Extremos. Londres: Academic Press. [Internet]. 1978. [Citado en noviembre 29 del 2017]; p. 317-368. Disponible en: http://www.redalyc.org/html/579/57937307.Martins LO, Santos H. Accumulation of mannolyglycerate and di-myoinositol- phosphate by Pyrococcus furious in response to salinity and temperature. Appl Environ Microbiol. [Internet]. 1995. [Citado en noviembre 6 del 2017]; p. 299-303. Disponible en: PMID: 16535119.Fennema R. Química de los alimentos. Editorial Acribia. España. [Internet]. 1993. [Citado en noviembre 17 del 2017]; p. 415- 422, 427- 437. Disponible en: https://sceqa.files.wordpress.com/2014/05/quc3admica-de-losalimentos- fennema.pdf.Smalas A., Leiros H., Os V., Willassen N. Cold adapted enzymes. Biotechnol Annu Rev 6. [Internet]. 2000. [Citado en noviembre 29 del 2017]; p. 1- 57. Disponible en: PMID: 11193291.Lehninger L. Principios de Bioquímica. 2da Edición. Editorial Omega. Barcelona, España. [Internet]. 1993. [Citado en octubre 11 del 2017]; p. 196- 237. Disponible en: http://www.edicionesomega. es/bioquimica/35-lehninger-principios-de-bioquimica-978-84- 282-1603-6.html.Reed C., Cleveland C., Townsend R. Functional ecology of free-living nitrogen fixation: a contemporary perspective. Annual Review of Ecology, Evolution, and Systematics. [Internet]. 2011 [Citado en Agosto 2 del 2018]; p. 489-512. Disponible en: DOI: 10.1146/annurev-ecolsys- 102710-145034.Ward B., Arp D., Klotz M. Nitrification. American Society for Microbiology Press, Washington, U.S.A. [Internet]. 2011 [Citado en Agosto 2 del 2018]; Disponible en: https://www.princeton.edu/nitrogen/publications/pdfs/Ward_2015_Nitrifi cation.pdf.Peña A. Bioquímica grupo Noriega, México D.F. [Internet]. 2004. [Citado en octubre 11 del 2017]; p. 305. Disponible en: https://books.google.com.pe/books?id=EFUP472dyEMC&printsec=fron tcover#v=onepage&q&f=false.Gupta, R., Beg, Q.K. y Lorenz, P. Bacteruak alkaline proteases: molecular approaches and industrial applications. Apple Microbiol Biotechnol. [Internet]. (2002). [Citado en noviembre 22 del 2017]; p. 59: 15-32. Disponible en: DOI: 10.1007/s00253-002-0975-y.Rothschild L., Mancinelli L. Life in extreme environments. Nature 409. [Internet]. 2001. [Citado en noviembre 6 del 2017]; p. 1092– 1101. Disponible en: PMID: 11234023Ruiz Herrera Brenda Lizette, Campos González Angulo Jorge Arturo, Barba Behrens Norah. Cofactor FeMco (M = Mo, V, Fe) en la nitrogenasa. Educ. quím. [Internet]. 2008. [Citado en agosto 15 del 2017]; p. 19(1): 34-41. Disponible en: ISSN: 0187-893X.Haritha R, Kumar KS, Mohan J, Ramana T. Amylolytic and proteolytic Actinobacteria Isolated from marine sediments of Bay of Bengal. International Journal of Microbiological Research. [Internet]. 2010 [Citado en Julio 20 del 2018]; 1(2), 37‐ 44. Disponible en: ISSN: 2079- 2093.Leon J., Pellon F., Unda V., Mendoza V. Produccion de enzimas extracelulares por bacterias asiladas de invertebrados marinos. Revista peruana de biología. [Internet]. 2000. [Citada en Agosto 9 del 2018]; Disponible en: http://dx.doi.org/10.15381/rpb.v7i2.6828.Zumft, W. G. (1997). Cell biology and molecular basis of denitrification. Microbiology and Molecular Biology Reviews. [Internet]. 1997 [Citado en Julio 21 del 2018]; 61(4), 533-616. Disponible en: PMID: 9409151.Fields P., Somero G. Hot spots in cold adaptation: localized increases in conformational flexibility in lactate dehydrogenase A (4) orthologs of Antarctic notothenioid fishes. Proc Natl Acad Sci USA 95. [Internet]. 1998. [Citado en septiembre 18 del 2017]; p. 11476– 1148. Disponible en: PMID: 9736762.Cavicchioli R., Charlton T., Erfan H., Mohd S., Siddiqui K., Williams T. Biotechnological uses of enzymes from psychrophiles. Microbial biotechnology. [Internet]. 2011. [Citado en noviembre 21 del 2017]; p. 449- 460. Disponible en: DOI: 10.1007/s00284-005-4583-9.Collins T., Dutron A., Georis J., Genot B., Dauvrin T., Arnaut P., Gerday C., Feller G. Use of glycoside hydrolase family 8 xylanases in baking. J. Ceredal Sci. 43. [Internet]. 2006. [Citado en noviembre 6 del 2017]; p. 79-84. Disponible en: http://citeseerx.ist.psu.edu/viewdoc/download?doi=10.1.1.545.9113&re p=rep1&type=pdf.Gerday C., Aittaleb M., Bentahir M., Chessa J., Claverie P., Collins T., D’Amico S., Dumont J., Garsoux G., Georlette D., Hoyoux A., Lonhienne T., Meuwis A., Feller, G. Cold-adapted enzymes: from fundamentals to biotechnology. Trends Biotechnol. 18. [Internet]. 2000. [Citado en noviembre 28 del 2017]; p. 103-107. Disponible en: PMID: 10675897.Bowman J. Methods for Psychrophilic Bacteria. University of Tasmania. Methods in Microbiology, Volumen 30. [Internet]. 2001. [Citado en febrero 12 del 2018]; p. 591-614. Disponible en: DOI: 10.1016/S0580- 9517(01)30064-8.López L., Hernández M., Colín C., Ortega S., Cerón G., Franco R. Las tinciones básicas en el laboratorio de microbiología. Investigación en Discapacidad. México DF. [Internet]. 2014. [Citado en febrero 12 del 2018]; p. 10-18. Disponible en: http://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2014/ir141b.pdf.Sánchez, Jaime, & Sanabria, Janeth. Metabolismos microbianos involucrados en procesos avanzados para la remoción de Nitrógeno, una revisión prospectiva. Revista Colombiana de Biotecnología. [Internet]. 2009. [Citado en agosto 17 del 2018]; p. 11(1), 114-124. Disponible en: ISSN 0123-3475.Sánchez L., Corrales L. Congelación bacteriana: Factores que intervienen en el proceso. Nova, Publicación Científica. Vol. 3. [Internet]. 2005. [Citado en abril 24 del 2018]; p. 109-113. Disponible en: URI: http://hdl.handle.net/10596/6772.Sánchez L., Corrales L. Evaluación de la congelación para conservación de especies autóctonas bacterianas. Nova, Publicación Científica, Vol. 3. [Internet]. 2005. [Citado en febrero 12 del 2018]; p. 21- 29. Disponible en: http://www.unicolmayor.edu.co/invest_nova/NOVA/ARTORIG2_4.pdf.Garzón D. Determinación de la biodiversidad bacteriana en ecosistemas glaciares de la Antártida. Ambato-Ecuador. [Internet]. 2013. [Citada en agosto 9 del 2018]. Disponible en: http://repositorio.uta.edu.ec/jspui/handle/123456789/3179.LAIRD, S; ten KATE, K. Biodiversity prospecting: the commercial use of genetic resources and best practice in benefit-sharing. In: Biodiversity and Traditional Knowledge. Equitable Partnerships in Practice. Edited By Sarah A. Laird. Earthscan Publications Ltd, London, Sterling, VA. Section IV, Chapter 8. [Internet]. 2002. [Citado en Julio 11 del 2018]; p. 241-286. Disponible en: https://portals.iucn.org/library/sites/library/files/documents/2003-25.pdf. 53. MORAN, K.; KING, S.; CARLSON, The Biodiversity Prospecting Lessons and Prospects Annual Review of Anthropology. [Internet]. 2001. [Citado en Julio 23 del 2018]. p. 30: 505-526. Disponible en: https://doi.org/10.1146/annurev.anthro.30.1.505.Centro de Información y Comunicación Ambiental de Norte América, Bioprospección. [Internet]. 2017. [Citado en Julio 11 del 2018]; Disponible en: http://www.ciceana.org.mx/contenido.php?cont=197.Sánchez T., Leon J., Woocoltt J., Arauco K. Proteasas extracelulares producidas por bacterias marinas aisladas de aguas contaminadas con efluentes pesqueros. Rev. Perú biol vol.11. [Internet]. 2004. [Citado en febrero 12 del 2018]; Disponible en: ISSN 1727-9933.Correa Galeote, D. Biodiversidad y ecología funcional de bacterias desnitrificantes. Granada: Universidad de Granada. [Internet]. 2016. [Citado en agosto 2 del 2018]; Disponible en: [http://hdl.handle.net/10481/43294].REVILLA, A. Tecnología de la leche: procesamiento, manufactura y análisis. Segunda Edición. San José. Costa Rica. [Internet]. 1982. [Citado en agosto 17 del 2018]; p. 56, 57. Citado en: http://agris.fao.org/agris-search/search.do?recordID=XL2012001316.Rosa Margesin, Georges Feller. Biotechnological applications of psychrophiles. Environ Technol. [Internet]. 2010. [Citado en Julio 23 del 2018]; p. 31(8-9): 835–844. Disponible en: PMID: 20662375.Pérez Davo, A. Microorganismos halófilos en ambientes salinos de Andalucía: estudio taxonómico numérico y molecular. Granada: Universidad de Granada. [Internet]. 2014. [Citado en agosto 2 del 2018]; p. 418. Disponible en: http://hdl.handle.net/10481/34130.Runa Antony, Aritri Sanyal, Neelam Kapse, Prashant K. Dhakephalkar, Meloth Thamban, Shanta Nair, Microbial communities associated with Antarctic snow pack and their biogeochemical implications, Microbiological Research, Volume 192. [Internet]. 2016. [Citada en agosto 26 del 2018]. p. 192-202. Disponible en: ISSN 0944-5013.Elena, B., & Monticelli, L. S Estudio taxonómico y ecológico de las bacterias marinas de la Antártida. Taxonomic and ecological study of the marine bacteria of Antártida. [Internet]. 1998. [Citado en agosto 12 del 2018]; p. 97-106. Disponible en: elena-y-monticelli- 142616735019.pdf.Rodríguez M., Díaz C. Determinación preliminar de producción de compuestos bioactivos de actinomicetes y bacterias aislados de ecosistemas glaciares andinos y antárticos. [Internet]. 2018. [Citada en agosto 26 del 2018]; Disponible en: http://repositorio.uta.edu.ec/jspui/handle/123456789/27507.Kamekura M, Hamawata T, Onishi H. Application of halophilic nuclease H from Micrococcus varians subs. halophilus to commercial pruction of flavoring agent 5 ́-GMP. Appl Environ Microbiol. [Internet]. 1982. [Citado en marzo 23 del 2018]; p. 44: 994-5. Disponible en: ISSN 1517-8382.Carlos A. Biotecnología De Microorganismos Extremofilos. Universidad Católica de Manizales. [Internet]. 2010. [Citado en junio 16 del 2018]; Disponible en: URI: http://hdl.handle.net/10839/1410.DiversidadBiosferaMicroorganismosEnzimasBioprospecciónAgua Marina AntárticaMicrobiología ConvencionalActividad EnzimáticaTEXTCartas derechos de autor.pdf.txtCartas derechos de autor.pdf.txtExtracted texttext/plain2https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3534/5/Cartas%20derechos%20de%20autor.pdf.txte1c06d85ae7b8b032bef47e42e4c08f9MD55open accessEVALUACION DE LA DIVERSIDAD BACTERIANA PROCEDENTE DE AGUA MARINA ANTARTICA UTILIZANDO MICROBIOLOG.pdf.txtEVALUACION DE LA DIVERSIDAD BACTERIANA PROCEDENTE DE AGUA MARINA ANTARTICA UTILIZANDO MICROBIOLOG.pdf.txtExtracted texttext/plain96389https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3534/7/EVALUACION%20DE%20LA%20DIVERSIDAD%20BACTERIANA%20PROCEDENTE%20DE%20AGUA%20MARINA%20ANTARTICA%20UTILIZANDO%20MICROBIOLOG.pdf.txt4528f1dc6cbb720f4560ed7b656f21cbMD57open accessPRESENTACIÓN EVALUACION DE LA DIVERSIDAD BACTERIANA PROCEDENTE DE AGUA MARINA ANTARTICA UTILIZAND.pdf.txtPRESENTACIÓN EVALUACION DE LA DIVERSIDAD BACTERIANA PROCEDENTE DE AGUA MARINA ANTARTICA UTILIZAND.pdf.txtExtracted texttext/plain12664https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3534/9/PRESENTACI%c3%93N%20EVALUACION%20DE%20LA%20DIVERSIDAD%20BACTERIANA%20PROCEDENTE%20DE%20AGUA%20MARINA%20ANTARTICA%20UTILIZAND.pdf.txtf3de11cf0af767ce676281c725dbf4bfMD59open accessTHUMBNAILCartas derechos de autor.pdf.jpgCartas derechos de autor.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg6584https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3534/6/Cartas%20derechos%20de%20autor.pdf.jpgb843fdf30d4e6e18e23b6c83c8a88030MD56open accessEVALUACION DE LA DIVERSIDAD BACTERIANA PROCEDENTE DE AGUA MARINA ANTARTICA UTILIZANDO MICROBIOLOG.pdf.jpgEVALUACION DE LA DIVERSIDAD BACTERIANA PROCEDENTE DE AGUA MARINA ANTARTICA UTILIZANDO MICROBIOLOG.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg7841https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3534/8/EVALUACION%20DE%20LA%20DIVERSIDAD%20BACTERIANA%20PROCEDENTE%20DE%20AGUA%20MARINA%20ANTARTICA%20UTILIZANDO%20MICROBIOLOG.pdf.jpg3932b18097c74db1c5fd29d1d0a9ebd5MD58open accessPRESENTACIÓN EVALUACION DE LA DIVERSIDAD BACTERIANA PROCEDENTE DE AGUA MARINA ANTARTICA UTILIZAND.pdf.jpgPRESENTACIÓN EVALUACION DE LA DIVERSIDAD BACTERIANA PROCEDENTE DE AGUA MARINA ANTARTICA UTILIZAND.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg6793https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3534/10/PRESENTACI%c3%93N%20EVALUACION%20DE%20LA%20DIVERSIDAD%20BACTERIANA%20PROCEDENTE%20DE%20AGUA%20MARINA%20ANTARTICA%20UTILIZAND.pdf.jpg43e78e835866fc7e9f756c04d70dfedfMD510open accessORIGINALCartas derechos de autor.pdfCartas derechos de autor.pdfapplication/pdf230791https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3534/1/Cartas%20derechos%20de%20autor.pdf8c2774469e0576c6c77d159ac06c75f6MD51open 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