Estudio preliminar de la expresión de un fragmento de la proteína hipotética PFL1395c de Plasmodium falciparum en un sistema heterólogo.
La malaria es una enfermedad causada por hemoparásitos del género Plasmodium; existen cinco especies capaces de infectar al ser humano, entre ellas se encuentra Plasmodium falciparum, especie causante de la mayoría de muertes en el mundo durante el año 2018 según la organización mundial de la salud...
- Autores:
-
Cárdenas Galindo, Yuri Tatiana
Contreras Jiménez, Jeymy Victoria
- Tipo de recurso:
- Trabajo de grado de pregrado
- Fecha de publicación:
- 2019
- Institución:
- Colegio Mayor de Cundinamarca
- Repositorio:
- Repositorio Colegio Mayor de Cundinamarca
- Idioma:
- spa
- OAI Identifier:
- oai:repositorio.unicolmayor.edu.co:unicolmayor/4766
- Acceso en línea:
- https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/4766
- Palabra clave:
- Enfermedad
Célula infectada
Proteínas
Anticuerpo monoclonal (AcM7)
Expresión heteróloga de proteínas
Proteína PFL1395c
pGEX 4T-3
Plasmodium falciparum
- Rights
- closedAccess
- License
- Derechos Reservados - Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2019
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Anticuerpo monoclonal (AcM7) Expresión heteróloga de proteínas Proteína PFL1395c pGEX 4T-3 Plasmodium falciparum |
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La malaria es una enfermedad causada por hemoparásitos del género Plasmodium; existen cinco especies capaces de infectar al ser humano, entre ellas se encuentra Plasmodium falciparum, especie causante de la mayoría de muertes en el mundo durante el año 2018 según la organización mundial de la salud (OMS). El presente trabajo tiene como objetivo la expresión de un fragmento de la proteína hipotética PFL1395c de P. falciparum en un sistema heterólogo. Para lo cual se partió de la reactivación de las células E. coli XL1-Blue, las cuales contenían el vector de clonación y expresión pGEX4T-3, obtenidas en trabajos anteriores por el grupo de investigación, Biología Celular de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Colombia sede Bogotá. Luego se extrajo el ADN plasmídico de estas células y se purificó mediante el uso del kit Miniprep de Thermo Fisher, posteriormente se amplificó por PCR, se visualizó y analizó a través de geles de agarosa, el ADN plasmídico se envió a secuenciar y las secuencias obtenidas se analizaron mediante el uso de diferentes herramientas bioinformáticas. Seguidamente se indujo la expresión del fragmento de la proteína PFL1395c mediante el uso de Isopropil-β-D-1- Tiogalactopiranósido (IPTG), y finalmente se analizó la expresión de la proteína mediante electroforesis en geles discontinuos de poliacrilamida y se comprobó su presencia mediante una inmunodetección de tipo Dot blot usando el anticuerpo monoclonal 7 (AcM7). En conclusión el desarrollo de este trabajo permitió avanzar en el estudio de P. falciparum y en la estandarización de un método de expresión a baja escala de un fragmento de la proteína PFL1395c |
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Hernández Rojas, Edith del Carmen691add7415cca2135c3de6050313997bCortés Cantín, Gladys Thalíaeb15a4d7e6771faaa2c0c42c9f6be40aCárdenas Galindo, Yuri Tatiana590eac09a0c699abbc8df90cf55f0640Contreras Jiménez, Jeymy Victoriafd37e43d7842dc54ee61b85893abcc522022-03-04T15:08:54Z2022-03-04T15:08:54Z2019https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/476658676La malaria es una enfermedad causada por hemoparásitos del género Plasmodium; existen cinco especies capaces de infectar al ser humano, entre ellas se encuentra Plasmodium falciparum, especie causante de la mayoría de muertes en el mundo durante el año 2018 según la organización mundial de la salud (OMS). El presente trabajo tiene como objetivo la expresión de un fragmento de la proteína hipotética PFL1395c de P. falciparum en un sistema heterólogo. Para lo cual se partió de la reactivación de las células E. coli XL1-Blue, las cuales contenían el vector de clonación y expresión pGEX4T-3, obtenidas en trabajos anteriores por el grupo de investigación, Biología Celular de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Colombia sede Bogotá. Luego se extrajo el ADN plasmídico de estas células y se purificó mediante el uso del kit Miniprep de Thermo Fisher, posteriormente se amplificó por PCR, se visualizó y analizó a través de geles de agarosa, el ADN plasmídico se envió a secuenciar y las secuencias obtenidas se analizaron mediante el uso de diferentes herramientas bioinformáticas. Seguidamente se indujo la expresión del fragmento de la proteína PFL1395c mediante el uso de Isopropil-β-D-1- Tiogalactopiranósido (IPTG), y finalmente se analizó la expresión de la proteína mediante electroforesis en geles discontinuos de poliacrilamida y se comprobó su presencia mediante una inmunodetección de tipo Dot blot usando el anticuerpo monoclonal 7 (AcM7). En conclusión el desarrollo de este trabajo permitió avanzar en el estudio de P. falciparum y en la estandarización de un método de expresión a baja escala de un fragmento de la proteína PFL1395cMalaria is a disease caused by hemoparasites of the genus Plasmodium; there are five possibilities to infect humans, among them are Plasmodium falciparum, which causes the most deaths in the world during 2018 according to the World Health Organization (WHO). The present work aims at the expression of a fragment of the hypothetical protein PFL1395c of P. falciparum in a heterologous system. To this end, we started with the reactivation of the E. coli XL1-Blue cells, which contained the cloning vector and expression pGEX4T-3, obtained in previous works by the research group, Cell Biology of the Faculty of Medicine of the National University of Colombia Bogota headquarters. The plasmid DNA was then extracted from these cells and purified by the use of the Thermo Fisher Miniprep kit, subsequently amplified by PCR, visualized and analyzed through agarose gels, the plasmid DNA was sent to be sequenced and the sequences obtained they were analyzed by using different bioinformatics tools. Subsequently, the expression of the PFL1395c protein fragment was induced by the use of Isopropyl-βD-1-thiogalactopyranoside (IPTG), and finally the expression of the protein was analyzed by electrophoresis in discontinuous polyacrylamide gels and its presence was checked by means of an immunodetection of type Dot blot using monoclonal antibody 7 (AcM7). In conclusion, the development of this work allowed advancing in the study of P. falciparum and in the standardization of a method of low-scale expression of a fragment of the protein PFL1395c.Lista de Figuras 10 Lista de Tablas 11 Lista de anexos 12 Glosario 13 Resumen 15 Abstract 16 INTRODUCCIÓN 17 1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA 19 2. OBJETIVOS 21 2.1. General 21 2.2. Específicos 21 3. MARCO REFERENCIAL 22 3.1. Antecedentes 22 3.2. Marco teórico 25 3.2.1. Malaria. 25 3.2.2. Ciclo biológico 26 3.2.3. Modificaciones postraduccionales 27 3.2.4. Principales proteínas de Plasmodium 29 3.2.4.1 Proteínas de choque térmico de Plasmodium 29 3.2.4.2 HSP70 29 HSP70-2 31 3.3. Proteína hipotética de función desconocida PFL1395c. 31 3.4. Rutas de exportación de proteínas 32 3.4.1 Ruta clásica o del Retículo endoplasmático (RE). 33 3.5. Vectores de clonación. 34 3.5.1. Vector de clonación y expresión pGEX. 35 4. MATERIALES Y MÉTODOS 37 4.1. Diseño metodológico 37 4.1.1 Universo, Población, Muestra. 37 4.1.2 Técnicas y procedimientos 37 4.1.2.1 Descongelación de las células E. coli XL1 Blue con el vector pGEX 4-T3 37 4.1.2.2 Reactivación de células E. coli XL1-Blue transformadas con el vector pGEX4T-3. 37 4.1.2.3 Purificación de ADN plasmídico 38 4.1.2.4 Cuantificación de ADN plasmídico 39 4.1.2.5 Amplificación por PCR del ADN plasmídico obtenido. 39 4.1.2.6 Visualización de los amplímeros obtenidos por PCR. 40 4.1.2.7 Secuenciación del ADN purificado extraído 40 Análisis Bioinformático 40 4.1.2.8 Preparación de células competentes E. coli BL21 (DE3) 41 4.1.2.9. Transformación de células E. coli BL21 (DE3) 42 4.1.2.10 Expresión del fragmento de la proteína hipotética PFL1395c en células E. coli BL21 (DE3) 42 4.1.2.11 Visualización de del fragmento expresado por medio de electroforesis en geles discontinuos de poliacrilamida (método de Laemmli) 43 4.1.2.12. Inmunodetección del fragmento expresado 44 5. RESULTADOS 45 5.1. Recuperación de células E. coli XL1-Blue en medio LB/amp. 45 5.2. Cuantificación de ADN plasmídico. 46 5.3. Visualización de los amplimeros en electroforesis en geles de agarosa 46 5.4. Análisis de la secuencia de ADN plasmídico 47 5.5. Preparación de células competentes E. coli BL21 (DE3) 48 5.6. Transformación de células E. coli BL21 (DE3) 49 5.7. Inmunodetección de la proteína obtenida 51 6. CONCLUSIONES 56 Referencias bibliográficas 57 Anexos 66PregradoBacteriólogo(a) y Laboratorista Clínico69p.application/pdfspaUniversidad Colegio Mayor de CundinamarcaFacultad de Ciencias de la SaludBogotá D.CBacteriología y Laboratorio ClínicoDerechos Reservados - Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2019https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/info:eu-repo/semantics/closedAccessAtribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional (CC BY-NC-ND 4.0)http://purl.org/coar/access_right/c_14cbEstudio preliminar de la expresión de un fragmento de la proteína hipotética PFL1395c de Plasmodium falciparum en un sistema heterólogo.Trabajo de grado - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fhttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85Textinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesishttps://purl.org/redcol/resource_type/TPinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionRicardo Durlach, Viviana E. Rodríguez, Cecilia Ezcurra, Cristina Freuler. 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texttext/plain7181https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/4766/7/Estudio%20preliminar%20de%20la%20expresi%c3%b3n%20de%20un%20fragmento%20de%20la%20prote%c3%adna%20hipot%c3%a9tica%20PFL1395c%20de%20Plasmodi.pdf.txt335535bd9fe0ad290b0fed9029b81428MD57open accessEstudio preliminar de la expresión de un fragmento de la proteína hipotética PFL1395c de Plasmod2 FORMATO DERECHOS DE AUTOR.pdf.txtEstudio preliminar de la expresión de un fragmento de la proteína hipotética PFL1395c de Plasmod2 FORMATO DERECHOS DE AUTOR.pdf.txtExtracted texttext/plain19https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/4766/9/Estudio%20preliminar%20de%20la%20expresi%c3%b3n%20de%20un%20fragmento%20de%20la%20prote%c3%adna%20hipot%c3%a9tica%20PFL1395c%20de%20Plasmod2%20FORMATO%20DERECHOS%20DE%20AUTOR.pdf.txt654ea0c44be4cb030713cee103caf4b0MD59metadata only accessTHUMBNAILEstudio preliminar de la expresión de un fragmento de la proteína hipotética PFL1395c de Plasmod2.pdf.jpgEstudio preliminar de la expresión de un fragmento de la proteína hipotética PFL1395c de Plasmod2.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg7712https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/4766/6/Estudio%20preliminar%20de%20la%20expresi%c3%b3n%20de%20un%20fragmento%20de%20la%20prote%c3%adna%20hipot%c3%a9tica%20PFL1395c%20de%20Plasmod2.pdf.jpgaeb721c3f6c5520e2798895e64fdeb46MD56open accessEstudio preliminar de la expresión de un fragmento de la proteína hipotética PFL1395c de Plasmodi.pdf.jpgEstudio preliminar de la expresión de un fragmento de la proteína hipotética PFL1395c de Plasmodi.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg7939https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/4766/8/Estudio%20preliminar%20de%20la%20expresi%c3%b3n%20de%20un%20fragmento%20de%20la%20prote%c3%adna%20hipot%c3%a9tica%20PFL1395c%20de%20Plasmodi.pdf.jpg1271cf4d336c160370f7dacc031a507aMD58open accessEstudio preliminar de la expresión de un fragmento de la proteína hipotética PFL1395c de Plasmod2 FORMATO DERECHOS DE AUTOR.pdf.jpgEstudio preliminar de la expresión de un fragmento de la proteína hipotética PFL1395c de Plasmod2 FORMATO DERECHOS DE AUTOR.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg5407https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/4766/10/Estudio%20preliminar%20de%20la%20expresi%c3%b3n%20de%20un%20fragmento%20de%20la%20prote%c3%adna%20hipot%c3%a9tica%20PFL1395c%20de%20Plasmod2%20FORMATO%20DERECHOS%20DE%20AUTOR.pdf.jpgaa7cc2501ba3a51296350cf650017e6aMD510metadata only accessORIGINALEstudio preliminar de la expresión de un fragmento de la proteína hipotética PFL1395c de Plasmod2.pdfEstudio preliminar de la expresión de un fragmento de la proteína hipotética PFL1395c de Plasmod2.pdfapplication/pdf1476571https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/4766/1/Estudio%20preliminar%20de%20la%20expresi%c3%b3n%20de%20un%20fragmento%20de%20la%20prote%c3%adna%20hipot%c3%a9tica%20PFL1395c%20de%20Plasmod2.pdf6f89128bc51854cf69b2e170458db02fMD51open 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AUTOR.pdfapplication/pdf286174https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/4766/3/Estudio%20preliminar%20de%20la%20expresi%c3%b3n%20de%20un%20fragmento%20de%20la%20prote%c3%adna%20hipot%c3%a9tica%20PFL1395c%20de%20Plasmod2%20FORMATO%20DERECHOS%20DE%20AUTOR.pdfd351d01c28374f5cf7ea450aab55abebMD53metadata only accessLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-814828https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/4766/4/license.txt2f9959eaf5b71fae44bbf9ec84150c7aMD54open accessunicolmayor/4766oai:repositorio.unicolmayor.edu.co:unicolmayor/47662022-03-08 03:01:19.575An error occurred on the license name.|||https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/open accessBiblioteca Digital 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