Detección de Treponema pallidum subespecie pallidum en muestras clínicas para el diagnóstico de Sífilis congénita mediante la utilizaciòn de variantes de la reacciòn en cadena de la polimerasa en tiempo real

La sífilis es una enfermedad sistémica de transmisión sexual, sanguínea, y vertical (congénita, perinatal y neonatal) causada por la espiroqueta Treponema pallidum subsp pallidum, que se desarrolla en etapas agudas asintomáticas o sintomáticas y puede llegar a producir infecciones crónicas con secue...

Full description

Autores:
Barbosa Barrero, Milena Patricia
Gonzalez Chaves, Brigete Stephany
Tipo de recurso:
Trabajo de grado de pregrado
Fecha de publicación:
2019
Institución:
Colegio Mayor de Cundinamarca
Repositorio:
Repositorio Colegio Mayor de Cundinamarca
Idioma:
spa
OAI Identifier:
oai:repositorio.unicolmayor.edu.co:unicolmayor/4765
Acceso en línea:
https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/4765
Palabra clave:
Enfermedad
Infecciones de transmisión sexual
Organización Mundial de la Salud
Sífilis
Sífilis congénita
Treponema pallidum subsp
Pallidum
PCR
TpN47
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closedAccess
License
Derechos Reservados - Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2019
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description La sífilis es una enfermedad sistémica de transmisión sexual, sanguínea, y vertical (congénita, perinatal y neonatal) causada por la espiroqueta Treponema pallidum subsp pallidum, que se desarrolla en etapas agudas asintomáticas o sintomáticas y puede llegar a producir infecciones crónicas con secuelas y discapacidades considerables si no es detectada y tratada oportunamente. La sífilis congénita es un importante problema de salud pública en Colombia ya que puede conllevar a padecer una condición con consecuencias graves y un alto costo humano, social y económico para los pacientes. En el presente estudio, por medio de variantes de la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (PCR tr y PCR tr-sondaTaqman) se evaluó la presencia del gen TpN47 en muestras clínicas para la identificación de Treponema pallidum subsp pallidum para comparar la sensibilidad y especificidad de estas variantes. De 27 muestras procesadas de sangre total periférica y suero de gestantes y neonatos, sangre de cordón umbilical y líquido cefalorraquídeo, el 48,14% arrojaron resultados positivos para la PCR tr y el 81,48% para PCR tr-Taqman en comparación con la técnica serológica VDRL con una especificidad del 100% para ambas variantes. El límite de detección para la PCR tr y PCR tr-Taqman fue de 4,5 fg y 1,135 fg respectivamente. Se puede concluir que el gen TpN47 es una diana molecular promisoria y la variante PCR tr-Taqman es una herramienta valiosa para el diagnóstico de sífilis congénita que minimiza tanto los falsos negativos como positivos de las técnicas serológicas.
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spelling Pinilla Bermudez, Gladysb0e759816b2dc448fd114cf8b39b68be600Barbosa Barrero, Milena Patriciae7d2e1b4b07cf807066aa2af8a369ff8Gonzalez Chaves, Brigete Stephany0388ceddd131a8afd1112f1f091c8d502022-03-04T14:43:29Z2022-03-04T14:43:29Z2019https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/476558672La sífilis es una enfermedad sistémica de transmisión sexual, sanguínea, y vertical (congénita, perinatal y neonatal) causada por la espiroqueta Treponema pallidum subsp pallidum, que se desarrolla en etapas agudas asintomáticas o sintomáticas y puede llegar a producir infecciones crónicas con secuelas y discapacidades considerables si no es detectada y tratada oportunamente. La sífilis congénita es un importante problema de salud pública en Colombia ya que puede conllevar a padecer una condición con consecuencias graves y un alto costo humano, social y económico para los pacientes. En el presente estudio, por medio de variantes de la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (PCR tr y PCR tr-sondaTaqman) se evaluó la presencia del gen TpN47 en muestras clínicas para la identificación de Treponema pallidum subsp pallidum para comparar la sensibilidad y especificidad de estas variantes. De 27 muestras procesadas de sangre total periférica y suero de gestantes y neonatos, sangre de cordón umbilical y líquido cefalorraquídeo, el 48,14% arrojaron resultados positivos para la PCR tr y el 81,48% para PCR tr-Taqman en comparación con la técnica serológica VDRL con una especificidad del 100% para ambas variantes. El límite de detección para la PCR tr y PCR tr-Taqman fue de 4,5 fg y 1,135 fg respectivamente. Se puede concluir que el gen TpN47 es una diana molecular promisoria y la variante PCR tr-Taqman es una herramienta valiosa para el diagnóstico de sífilis congénita que minimiza tanto los falsos negativos como positivos de las técnicas serológicas.Objetivos específicos 18 ANTECEDENTES 19 MARCO TEÓRICO 22 1. Generalidades de la Sífilis 22 1.1 Patogenia 22 1.2 Sífilis primaria, secundaria y terciaria 23 1.3 Sífilis gestacional y congénita 26 1.4 Infección fetal 27 1.4.1. Sífilis Congénita Temprana 29 1.4.2. Sífilis Congénita Tardía 29 2. Agente etiológico 31 2.1 Taxonomía 32 2.2 Estructura 33 2.3 Virulencia y Componentes Antigénicos 33 2.4 Genoma 34 2.4.1 Gen TpN47 35 3. Inmunología 35 3.1 Respuesta Inmune 35 3.2 Mecanismo de Evasión 36 4. Epidemiología 37 4.1 Sífilis Congénita 38 5. Diagnóstico 40 5.1 Pruebas directas 41 5.2 Pruebas serológicas 41 5.2.1 Pruebas no treponémicas 42 5.2.2 Pruebas Treponémicas 43 5.3 Pruebas Moleculares 45 5.3.1 Fundamento de la Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) 45 5.3.2 PCR en Tiempo Real (PCR tr) 45 5.3.3 PCR en tiempo real en el diagnóstico de sífilis 47 6. Tratamiento y Prevención 48 METODOLOGÍA 50 7. Tipo de investigación 50 8. Población de estudio 50 8.1 Muestra 50 9. Controles 50 9.1 Control Positivo 50 9.2 Control Negativo 50 9.3 Control Exógeno 50 9.4 Control Endógeno de extracciòn 51 9.5 Control Interno de Amplificación 51 10. Muestras Clínicas 51 11. Extracción de ADN 52 11.1 Control Positivo y Muestras Clínicas 52 11.2 ADN Plasmídico 52 12. PCR Convencional 52 12.1 Titulación del ADN 53 12.2 Titulación de primers 54 12.3 Ensayo de Sensibilidad en PCR convencional 54 13. PCR en Tiempo Real (PCR tr 55 13.1 Curva de Calibración para PCR tr 55 13.2 Ensayo de sensibilidad en PCR tr 56 13.3 Ensayo de especificidad en PCR tr 56 14. PCR en Tiempo Real con Sonda Taqman 47 REMA (PCR tr-Taqman) 57 14.1 Curva de Calibración para PCR tr-Taqman 58 14.2 Ensayo de sensibilidad en PCR tr-Taqman 58 14.3 Ensayo de especificidad en PCR tr-Taqman 59 RESULTADOS 60 15. PCR Convencional 60 15.1 Titulación de ADN 60 15.2 Titulación de los primers TpN47 61 15.3 Ensayo de sensibilidad por PCR convencional 61 16. PCR en Tiempo Real (PCR tr ) 62 16.1 Curva de calibración PCR tr 62 16.2 Ensayo de sensibilidad por PCR tr 65 16.3 Ensayo de especificidad por PCR tr 65 16.3.1 Análisis bioinformático de los primers TpN47 67 16.4 Controles negativos en PCR tr 71 16.5 Control interno de amplificación en PCR tr 71 17. PCR en Tiempo Real con Sonda Taqman (PCR tr Taqman) 72 17.1 Curva de Calibración PCR tr Taqman 72 17.2 Ensayo de sensibilidad PCR tr-Taqman 74 17.3 Ensayo de Especificidad PCR Taqman 74 17.3.1 Análisis bioinformático de la sonda Taqman 47 REMA 76 17.4 Control Negativo en PCR tr-Taqman 79 17.5 Control de amplificación en PCR tr-Taqman 79 18. Valores de Ct 80 19. Muestras Clínicas 81 DISCUSIÓN 87 CONCLUSIONES 97 ANEXOS 100 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 111PregradoBacteriólogo(a) y Laboratorista Clínico118p.application/pdfspaUniversidad Colegio Mayor de CundinamarcaFacultad de Ciencias de la SaludBogotá D.CBacteriología y Laboratorio ClínicoDerechos Reservados - Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2019https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/info:eu-repo/semantics/closedAccessAtribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0)http://purl.org/coar/access_right/c_14cbDetección de Treponema pallidum subespecie pallidum en muestras clínicas para el diagnóstico de Sífilis congénita mediante la utilizaciòn de variantes de la reacciòn en cadena de la polimerasa en tiempo realTrabajo de grado - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fhttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85Textinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesishttps://purl.org/redcol/resource_type/TPinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionWHO. 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