Determinación de proteínas de choque térmico Hsp70 y Hsp90 en línea celular mes-ov tratada con Cisplatino
El cáncer de ovario es la séptima neoplasia maligna en Colombia y en el mundo, con un incremento en el porcentaje de muertes en mujeres de 45 a 50 años de acuerdo con el último reporte registrado por el sistema de información de cáncer - SICC (1). El diagnóstico de cáncer de ovario es uno de los más...
- Autores:
-
Ávila Torres, Ana María
- Tipo de recurso:
- Trabajo de grado de pregrado
- Fecha de publicación:
- 2018
- Institución:
- Colegio Mayor de Cundinamarca
- Repositorio:
- Repositorio Colegio Mayor de Cundinamarca
- Idioma:
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- OAI Identifier:
- oai:repositorio.unicolmayor.edu.co:unicolmayor/4782
- Acceso en línea:
- https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/4782
- Palabra clave:
- Muertes en mujeres
Membrana celular
Células tumorales
Proteínas de choque térmico
Cáncer de ovario
Cisplatino
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- Derechos Reservados - Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2018
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El cáncer de ovario es la séptima neoplasia maligna en Colombia y en el mundo, con un incremento en el porcentaje de muertes en mujeres de 45 a 50 años de acuerdo con el último reporte registrado por el sistema de información de cáncer - SICC (1). El diagnóstico de cáncer de ovario es uno de los más difíciles debido a que las mujeres con cáncer en estadios I y II de la escala FIGO (Federación Internacional de Ginecología y Obstetricia) no presentan ningún síntoma, razón por la cual, el diagnóstico de esta patología se realiza en estadios III y IV. El tratamiento en los estadios III y IV incluye una terapia combinada basada en compuestos platinos y taxanos. Sin embargo, aproximadamente del 10 al 15% de los pacientes hacen resistencia a esta quimioterapia (2). A partir del sexto al doceavo mes las pacientes hacen resistencia al cisplatino, lo que conduce a la muerte. La literatura internacional ha sugerido a las proteínas de choque térmico (HSP’s) como posibles causantes de la refractariedad a los fármacos. Las HSP’s son una familia de proteínas que cumplen funciones de chaperonas moleculares en la mayoría de procesos químicos y moleculares que realiza la célula (2). Por lo anterior el objetivo de este trabajo fue identificar si las proteínas de choque térmico Hsp70 y Hsp90 cambian su expresión intracelular y en la membrana celular de la línea celular MES-OV de cáncer de ovario y de origen humano al ser tratada a diferentes concentraciones de cisplatino. Para esto se usó epi-inmunofluorescencia directa y se identificó la expresión de las proteínas de choque térmico Hsp70 y Hsp90. Se encontró que al tratar la línea celular MES-OV con concentraciones de 111.4µM, 148.6 µM, 185.8 µM de cisplatino la proteína Hsp70 intracelular aumenta del 61.9% al 100% y del 37% al 98% en membrana celular, también se encontró que la Hsp90 intracelular aumenta de 91.2% al 99.5%, sin embargo, en membrana se encontró que pasa de 59.5% a 8% al ser tratada con 111.4 µM, a 17.6% al ser tratada con 148.6 µM y a 63.2% al ser tratada con 185.8 µM decisplatino. Este hallazgo sugiere que las proteínas de choque térmico están involucradas en el mecanismo de adaptación y resistencia de las células tumorales al cisplatino. |
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Sin embargo, aproximadamente del 10 al 15% de los pacientes hacen resistencia a esta quimioterapia (2). A partir del sexto al doceavo mes las pacientes hacen resistencia al cisplatino, lo que conduce a la muerte. La literatura internacional ha sugerido a las proteínas de choque térmico (HSP’s) como posibles causantes de la refractariedad a los fármacos. Las HSP’s son una familia de proteínas que cumplen funciones de chaperonas moleculares en la mayoría de procesos químicos y moleculares que realiza la célula (2). Por lo anterior el objetivo de este trabajo fue identificar si las proteínas de choque térmico Hsp70 y Hsp90 cambian su expresión intracelular y en la membrana celular de la línea celular MES-OV de cáncer de ovario y de origen humano al ser tratada a diferentes concentraciones de cisplatino. Para esto se usó epi-inmunofluorescencia directa y se identificó la expresión de las proteínas de choque térmico Hsp70 y Hsp90. Se encontró que al tratar la línea celular MES-OV con concentraciones de 111.4µM, 148.6 µM, 185.8 µM de cisplatino la proteína Hsp70 intracelular aumenta del 61.9% al 100% y del 37% al 98% en membrana celular, también se encontró que la Hsp90 intracelular aumenta de 91.2% al 99.5%, sin embargo, en membrana se encontró que pasa de 59.5% a 8% al ser tratada con 111.4 µM, a 17.6% al ser tratada con 148.6 µM y a 63.2% al ser tratada con 185.8 µM decisplatino. Este hallazgo sugiere que las proteínas de choque térmico están involucradas en el mecanismo de adaptación y resistencia de las células tumorales al cisplatino.1. INTRODUCCIÓN 1 2. ANTECEDENTES 3 3. MARCO TEÓRICO 6 3.1. Cáncer de ovario 6 3.2. Generalidades de las proteínas de choque térmico 11 3.3. Proteínas de choque térmico en cáncer 14 3.4. Cisplatino 3.4.1 Mecanismo de acción 16 3.4.2 Efectos colaterales del fármaco en la quimioterapia… 18 4. DISEÑO METODOLÓGICO… 19 4.1. Tipo de estudio 19 4.2. TÉCNICAS Y PROCEDIMIENTOS 4.2.1. Viabilidad celular con MTT 19 4.2.2. Determinación de dosis letales por método probit 21 4.2.3. Inmunofluorescencia directa 21 4.2.4. Detección de Apoptosis/Necrosis 23 4.2.5. TUNEL Alexa Fluor 647 24 4.3. Estadística 25 5. RESULTADOS 26 5.1 Cultivo de línea celular MES-OV 26 5.1. Ensayo de Viabilidad celular con MTT 26 5.2. Concentración de cisplatino utilizado para obtener dosis letales 25, 50 y 70 28 5.3 Determinación de proteínas de choque térmico medianteInmunofluorescencia directa 5.3.1. Determinación de Hsp70 al ser tratada con cisplatino 30 5.3.2. Determinación de Hsp90 al ser tratada con cisplatino 33 5.4. Identificación de señales de muerte de células MES-OV al ser tratadas con cisplatino 36 5.5. Cambios en la fragmentación del DNA de las células MES-OV (ATCC) al ser tratadas con cisplatino 38 6. DISCUSIÓN 39 7. CONCLUSIÓN 41 8. SUGERENCIAS 42 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ANEXOSPregradoBacteriólogo(a) y Laboratorista Clínico64p.application/pdfspaUniversidad Colegio Mayor de CundinamarcaFacultad de Ciencias de la SaludBogotá D.CBacteriología y Laboratorio ClínicoDerechos Reservados - Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2018https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/info:eu-repo/semantics/closedAccessAtribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0)http://purl.org/coar/access_right/c_14cbDeterminación de proteínas de choque térmico Hsp70 y Hsp90 en línea celular mes-ov tratada con CisplatinoTrabajo de grado - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fhttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85Textinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesishttps://purl.org/redcol/resource_type/TPinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionLucasian Labs S.A.S. y Alejandría Soluciones de Tecnología S.A.S. Sistema de Información de Cáncer en Colombia [Internet]. [Citado el 18 Junio 2018]. 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charset=utf-814828https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/4782/4/license.txt2f9959eaf5b71fae44bbf9ec84150c7aMD54open accessTEXTDETERMINACION DE PROTEINAS DE CHOQUE TERMICO HSP70 Y HSP90 EN LINEA CELULAR MES-OV TRATADA CON CI.pdf.txtDETERMINACION DE PROTEINAS DE CHOQUE TERMICO HSP70 Y HSP90 EN LINEA CELULAR MES-OV TRATADA CON CI.pdf.txtExtracted texttext/plain13945https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/4782/5/DETERMINACION%20DE%20PROTEINAS%20DE%20CHOQUE%20TERMICO%20HSP70%20Y%20HSP90%20EN%20LINEA%20CELULAR%20MES-OV%20TRATADA%20CON%20CI.pdf.txtc57cbbe9968841cabdf97a0caa31401cMD55open accessDeterminación de proteinas de choque termico HSP70 y HSP90 en línea celular MES - OV tratado con .pdf.txtDeterminación de proteinas de choque termico HSP70 y HSP90 en línea celular MES - OV tratado con .pdf.txtExtracted texttext/plain79170https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/4782/7/Determinaci%c3%b3n%20de%20proteinas%20de%20choque%20termico%20HSP70%20y%20HSP90%20en%20l%c3%adnea%20celular%20MES%20-%20OV%20tratado%20con%20.pdf.txtc5e5637cd7facc60859e14d0e322729cMD57open accessDeterminación de proteinas de choque termico HSP70 y HSP90 en línea celular MES - OV tratado con FORMATO DERECHOS DE AUTOR.pdf.txtDeterminación de proteinas de choque termico HSP70 y HSP90 en línea celular MES - OV tratado con FORMATO DERECHOS DE AUTOR.pdf.txtExtracted texttext/plain4https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/4782/9/Determinaci%c3%b3n%20de%20proteinas%20de%20choque%20termico%20HSP70%20y%20HSP90%20en%20l%c3%adnea%20celular%20MES%20-%20OV%20tratado%20con%20FORMATO%20DERECHOS%20DE%20AUTOR.pdf.txtce17bbb4d4f1cbe9a2413e4ea88bb0b2MD59metadata only accessTHUMBNAILDETERMINACION DE PROTEINAS DE CHOQUE TERMICO HSP70 Y HSP90 EN LINEA CELULAR MES-OV TRATADA CON CI.pdf.jpgDETERMINACION DE PROTEINAS DE CHOQUE TERMICO HSP70 Y HSP90 EN LINEA CELULAR MES-OV TRATADA CON CI.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg10113https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/4782/6/DETERMINACION%20DE%20PROTEINAS%20DE%20CHOQUE%20TERMICO%20HSP70%20Y%20HSP90%20EN%20LINEA%20CELULAR%20MES-OV%20TRATADA%20CON%20CI.pdf.jpgcd0510d978c383d98bc718ec6b880bc0MD56open accessDeterminación de proteinas de choque termico HSP70 y HSP90 en línea celular MES - OV tratado con .pdf.jpgDeterminación de proteinas de choque termico HSP70 y HSP90 en línea celular MES - OV tratado con .pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg7308https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/4782/8/Determinaci%c3%b3n%20de%20proteinas%20de%20choque%20termico%20HSP70%20y%20HSP90%20en%20l%c3%adnea%20celular%20MES%20-%20OV%20tratado%20con%20.pdf.jpg37df3559ff0dc5974564023525d8a083MD58open accessDeterminación de proteinas de choque termico HSP70 y HSP90 en línea celular MES - OV tratado con FORMATO DERECHOS DE 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