Estandarización de una herramienta molecular para la identificación y diferenciación de dos clones de Staphylococcus Aureus resistentes a Meticilina de genotipo comunitario (Sarmgc) de circulación en Colombia
Staphylococcus aureus resistentes a meticilina de genotipo comunitario (SARM-GC) son un grupo de aislamientos de gran importancia clínica y epidemiológica debido a su emergencia en el ambiente comunitario y rápida diseminación en ambientes hospitalarios, gracias a su gran capacidad de adquirir mecan...
- Autores:
-
Anchico Godoy, James Alexander
Laurens Hernández, Mario Alberto
- Tipo de recurso:
- Trabajo de grado de pregrado
- Fecha de publicación:
- 2018
- Institución:
- Colegio Mayor de Cundinamarca
- Repositorio:
- Repositorio Colegio Mayor de Cundinamarca
- Idioma:
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- OAI Identifier:
- oai:repositorio.unicolmayor.edu.co:unicolmayor/3771
- Acceso en línea:
- https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/3771
- Palabra clave:
- Ambiente comunitario
Ambientes hospitalarios,
SARM-GC
Islas genómicas
Staphylococcus aureus
Genotipo comunitario
Resistencia a meticilina
Reacción en cadena de la polimerasa
Genotipo comunitario
USA300-VL
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- Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2018
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Staphylococcus aureus resistentes a meticilina de genotipo comunitario (SARM-GC) son un grupo de aislamientos de gran importancia clínica y epidemiológica debido a su emergencia en el ambiente comunitario y rápida diseminación en ambientes hospitalarios, gracias a su gran capacidad de adquirir mecanismos de virulencia y resistencia a antibióticos por medio de material genético foráneo. En Colombia, desde las últimas décadas, se ha identificado el incremento de infecciones generadas por SARM-GC; asociados únicamente a los clones USA300- variante Latinoamericana (USA300-VL) y COL923. Estos clones difieren entre sí en sus características genéticas y moleculares, debido a la presencia de diferentes subtipos de SCCmec, variaciones en la estructura de islas genómicas, perfil de resistencia y virulencia. Lo cual hace necesario realizar una adecuada identificación y caracterización de estos clones, lo que permitirá entender mejor su patogénesis, frecuencia y dinámicas de diseminación. Por esta razón el presente trabajo tuvo como objetivo estandarizar una PCR múltiple como herramienta para la identificación y diferenciación de aislamientos pertenecientes a los clones USA 300VL y COL923 de circulación nacional, en la cual se amplifican genes marcadores presentes en los elementos genéticos móviles de cada clon. Una vez estandarizado esta metodología se verificó su poder discriminatorio en una cohorte de 106 aislamientos provenientes de diferentes fuentes clínicas, previamente clasificadas como SARM-GC. Los resultados mostraron que si existen características moleculares que difieren a los clones USA 300VL y COL923 en la Isla de patogenicidad 5 de Staphylococcus aureus (SaPI5), Prografo 3 (ϕ3), Isla genómica beta y yqiL que permitieron su identificación y diferenciación por medio de PCR. Se logró identificar que el 68% de aislamientos, de los 12 evaluados en el estudio, se encuentran genéticamente relacionados con el clon USA 300VL; y que el 32% restante se asocian al clon COL923. Con los resultados obtenidos se pudo concluir que esta herramienta es rápida, menos costosa y dispendiosa a comparación de otras herramientas de identificación molecular tales como PFGE y MLST y que a su vez, brinda la posibilidad a que haya un mayor control epidemiológico de estos aislamientos teniendo en cuenta que tan variante es la epidemiologia de este microorganismo. |
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Luján Roca DA. Staphylococcus aureus resistente a meticilina asociado a la comunidad: aspectos epidemiológicos y moleculares. An la Fac Med la Fac Med [Internet]. 2013;74(1):57–62. Disponible en: http://revistasinvestigacion.unmsm.edu.pe/index.php/anales/article/view/2053 Cruz C, Castañeda E. Staphylococcus aureus , su éxito como patógeno y las implicaciones de la resistencia a los antimicrobianos. Médicas uis [Internet]. 2006;19:27–39. Disponible en: http://revistas.uis.edu.co/index.php/revistamedicasuis/article/viewFile/2231/2590 Malachowa N, Kobayashi SD, Sturdevant DE, Scott DP, DeLeo FR. Insights into the Staphylococcus aureus-host interface: Global changes in host and pathogen gene expression in a rabbit skin infection model. PLoS One. 2015;10(2):1–15. Esparza-mantilla M. CARACTERIZACIÓN DE Staphylococcus aureus OBTENIDO DEL AMBIENTE HOSPITALARIO Y DEL PERSONAL DE SALUD EN UN CHARACTERIZATION OF Staphylococcus aureus OBTAINED FROM THE HOSPITAL ENVIRONMENT AND HEALTH CARE STAFF AT A HOSPITAL IN THE CITY OF CALI. 2017;16(2):22–33. Grupo para el control de la resistencia bacteriana de Bogota. Análisis de la vigilancia de la resistencia bacteriana año 2013. Componente pediátrico y adulto. Bol Inf GREBO [Internet]. 2014;(6):40. Disponible en: http://www.grebo.org/documentos/Boletin_Grebo_2014.pdf Carmen BO. Epidemiologia de la resistencia a meticilina en cepas de Staphylococcus aureus aisladas en hospitales españoles. Bienio. Universidad de Bacelona; 2006. Ricardo-caldera DM, Buelvas-doria FA, Escobar-pérez JA, Tovar-acero C. Colonizacion y factores de virulencia de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en una población infantil de Montería. IATREIA. 2015;28(3):259–68. Escobar-Perez J, Reyes N, Marquez-Ortiz RA, Rebollo J, Pinzón H, Tovar C, et al. Emergence and spread of a new community-genotype methicillin-resistant Staphylococcus aureus clone in Colombia. BMC Infect Dis [Internet]. 2017;17(1):108. Disponible en: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28143440%0Ahttp://bmcinfectdis.biomedcent ral.com/articles/10.1186/s12879-017-2193-3 Zendejas-manzo GS, Avalos-flores H, Soto-padilla MY. Microbiología general de Staphylococcus aureus : Generalidades , patogenicidad y métodos de identificación. 2014;25(3):129–43. Cervantes-García E, García-González R, Salazar-Schettino PM. Características generales del Staphylococcus aureus. Rev Latinoam Patol Clin Med Lab [Internet]. 2014;61(1):28–40. Disponible en: www.medigraphic.com/patologiaclinica%5Cnwww.medigraphic.org.mx Cervantes-García E, García-González R, Salazar-Schettino PM. Características generales del Staphylococcus aureus. Rev Latinoam Patol Clin Med Lab [Internet]. 85 2014;61(1):28–40. Disponible en: www.medigraphic.com/patologiaclinica%5Cnwww.medigraphic.org.mx Review ADER. Interacciones farmacológicas relacionadas con la administración de antibióticos betalactámicos. 2016;73(5):227–34. Sopena N, Sabri M. Staphylococcus aureus resistente a la meticilina. Enferm Infecc Microbiol Clin. 2002;118(17):671–6. García-vázquez E, Hernández-torres A, Medicina S De, Clínico IH, Virgen U, Arrixaca D. Los betalactámicos en la práctica clínica. Rev española Quimioter. 2015;28(1):1–9 Rice LB. Mechanisms of Resistance and Clinical Relevance of Resistance to βLactams, Glycopeptides, and Fluoroquinolones. JMCP [Internet]. 2012;87(2):198– 208. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1016/j.mayocp.2011.12.003 Marín M. Antibióticos betalactámicos. Enfermedades Infecc Microbiol Clin. 2003;21(1):42–55. Suarez C. Antibioticos betalactámicos. Enferm Infecc Microbiol Clin. 2009;27(2):116–29. Camarena JJ, Microbiología D De, Universitario H, Peset D. INFECCIÓN POR Staphylococcus aureus RESISTENTE A METICILINA. Control Calid SEIMC. 1997; González C, Maribel J, Armindo J, General DB, Bioanálisis E De. Mecanismos de resistencia a antibióticos b -lactámicos en Staphylococcus aureus Mechanisms of Resistance To b -Lactam Antibiotics in Staphylococcus aureus. kasmera. 2010;38(1):18–35 Luis J, Ángel J. Detección de mecanismos de resistencia. Enferm Infecc Microbiol Clin. 2003;21:72–4. Chávez M, Erazo NC, Reina DA, Esparza M. Métodos de tipificación y epidemiología molecular de Staphylococcus aureus con resistencia a la meticilina. Biosalud [Internet]. 2015;14(2):81–90. Disponible en: http://200.21.104.25/biosalud/downloads/Biosalud14(2)_8.pdf Bustos-Martínez JA, Hamdan-Partida A, Gutiérrez-Cárdenas M. Staphylococcus aureus : la reemergencia de un patógeno. Rev biomed. 2006;17(4):287–305. Community-acquired methicillin-resistant staphylococcus aureus carrying panton- valentine leukocidin genes: Worldwide emergence. Emerg Infect Dis. 2003;9(8):978–84. Ma J. Tipo de cas set te cro mo só mi co es ta fi lo có ci co en ce pas clí ni cas de Staphylo coccus au reus re sis ten tes a me ti ci li na Staphylococcal Chromosomal Cassette Type in Clinical Strains of Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus. 2014;42(2):116–30. Cervantes-garcía E, García-gonzález R, Salazar-schettino PM. Importancia de Staphylococcus aureus meticilina resistente intrahospitalario y adquirido en la comunidad. Rev Latinoam Patol Clin Med Lab. 2014;61(4):196–204 Ito T, Katayama Y, Asada K, Mori N, Tsutsumimoto K. Structural Comparison of Three Types of Staphylococcal Cassette Chromosome mec Integrated in the Chromosome in Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus. Antimicrob Agents Chemother. 2001;45(5):1323–36 Ito T, Kuwahara-arai K, Katayama Y, Uehara Y, Han X, Kondo Y, et al. Staphylococcal Cassette Chromosome mec (SCC mec ) Analysis of MRSA. Springer Sci Media. 2014;1085:131–48. Francis Alonzo III VJT. A Lesson in Survival: S. aureus versus the Skin. Cell Host Microbe. 2013;3–5. St-mrsa-iv G, Shore AC, Rossney AS, Brennan OM, Kinnevey PM, Humphreys H, et al. Characterization of a Novel Arginine Catabolic Mobile Element ( ACME ) and Staphylococcal Chromosomal Cassette mec Composite Island with Significant Homology to Staphylococcus epidermidis ACME Type II in Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus. Antimicrob Agents Chemother. 2011;55(5):1896–905. Quiceno JNJ, Ochoa MMC. Staphylococcus aureus resistente a meticilina : bases moleculares de la resistencia , epidemiología y tipificación. LATREIA. 2009;22:147–58. Deurenberg RH, Nieuwenhuis RF, Driessen C, London N, Stassen FR, Tiel FH Van, et al. The prevalence of the Staphylococcus aureus tst gene among community- and hospital-acquired strains and isolates from Wegener Õ s Granulomatosis patients. FEMS Microbiol Lett. 2017;245(September):185–9. Pinchuk I V, Beswick EJ, Reyes VE. Staphylococcal Enterotoxins. MDPI Toxins. 2010;2:2177–97. Novick RP, Schlievert P, Ruzin A. Pathogenicity and resistance islands of staphylococci. Microbes Infect. 2001;3:585–94. Papageorgiou AC, Tranter HS, Acharya KR. Crystal Structure of Microbial Superantigen Ê Resolution : Staphylococcal Enterotoxin B at 1 . 5 A Implications for Superantigen Recognition by MHC Class II Molecules and T-cell Receptors. JMB. 1998;61–79. Chiang Y, Liao W, Fan C, Pai W. PCR detection of Staphylococcal enterotoxins ( SEs ) N , O , P , Q , R , U , and survey of SE types in Staphylococcus aureus isolates from food-poisoning cases in Taiwan. Int J Food Microbiol. 2008;121:66–73. Argudín MÁ, Mendoza MC, Rodicio MR. Food Poisoning and Staphylococcus aureus Enterotoxins. MDPI Toxins. 2010;1751–73. D.-L. Hu, H.K. Ono, S. Isayama , R. Okada , M. Okamura , L.C. Lei, Z.S. Liu, X.-C. Zhang, M.Y. Liu , J.C. Cui AN. Biological characteristics of staphylococcal enterotoxin Q and its potential risk for food poisoning. J Appl Microbiol. 2017;1672–9 Orwin PM, Leung DYM, Donahue HL, Novick RP, Schlievert PM. Biochemical and Biological Properties of Staphylococcal Enterotoxin K. Am Soc Microbiol Infect INMUNITY. 2001;69(1):360–6. Jodi A. Lindsay . Matthew T. G. Holden. Understanding the rise of the superbug: investigation of the evolution and genomic variation of Staphylococcus aureus. Funct Integr Genomics. 2006;6:186–201. Olarte NM, Valderrama IA, Reyes KR, Garzón MI, Escobar JA, Castro BE, et al. Colonización por Staphylococcus aureus resistente a la meticilina en una unidad de cuidados intensivos de adultos de un hospital colombiano : caracterización fenotípica y molecular con detección de un clon de circulación en la comunidad. Biomédica. 2010;182(3):353–61. María Ángeles Domínguez Luzóna y Miquel Pujol Rojo. Cambios en la epidemiología de. Control Calid SEIMC [Internet]. 1991; Disponible en: www.seimc.org Usa MS, Arias C a, Sc M, D P, Universitario H. NIH Public Access. English J. 2009;359(20):2177–9. Machuca MA, Sosa LM, González CI. Molecular Typing and Virulence Characteristic of Methicillin-Resistant Staphylococcus Aureus Isolates from Pediatric Patients in Bucaramanga, Colombia. PLoS One. 2013;8(8). David MZ, Daum RS. Community-associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus: Epidemiology and clinical consequences of an emerging epidemic. Clin Microbiol Rev. 2010;23(3):616–87. Chaves F. Emergencia de infecciones peditricas por Staphylococcus aureus resistente a meticilina asociadas a la comunidad: ??debemos dar la alerta? Enferm Infecc Microbiol Clin. 2010;28(10):672–4 Acuña M, Benadof D, Jadue C, Hormazábal JC, Alarcón P, Contreras J, et al. Staphylococcus aureus resistente a meticilina asociado a la comunidad (SARM-AC): comunicación de los primeros cuatro casos pediátricos descritos en Hospital de Niños Roberto del Río. Rev Chil infectología. 2015;32(3):350–6. Ocampo AM, Vélez L a, Robledo J, Jiménez JN. Cambios a lo largo del tiempo en la distribución de los complejos de clones dominantes de Staphylococcus aureus resistente a la meticilina en Medellín , Colombia. Biomédica. 2014;34(Supl 1):34– 40. Rincón S, Panesso D, Díaz L, Carvajal LP, Reyes J, Munita JM, et al. [Resistance to "last resort" antibiotics in Gram-positive cocci: The post-vancomycin era]. Biomedica. 2014;34 Suppl 1(0 1):191–208. Escobar-Perez J a, Castro BE, Marquez-Ortiz R a, Gaines S, Chavarro B, Moreno J, et al. Aislamientos de Staphylococcus aureus sensibles a meticilina relacionados genéticamente con el clon USA300, ¿origen de los aislamientos SARM de genotipo comunitario en Colombia? Biomedica. 2014;34(3):124–36 Alvarez CA, Yomayusa N, Leal AL, Moreno J, Mendez-Alvarez S, Ibañez M, et al. Nosocomial infections caused by community-associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus in Colombia. Am J Infect Control. 2010;38(4):315–8. Jiménez JN, Ocampo AM, Vanegas JM, Rodriguez EA, Mediavilla JR, Chen L, et al. CC8 MRSA strains harboring SCCmec type IVc are predominant in Colombian hospitals. PLoS One. 2012;7(6):1–10. Escobar JA, Marquez-Ortiz RA, Alvarez-Olmos MI, Leal AL, Castro BE, Vanegas N. Detection of a new community genotype methicillin-resistant staphylococcus aureus clone that is unrelated to the USA300 clone and that causes pediatric infections in colombia. J Clin Microbiol. 2013;51(2):661–4. Leal Ana Lucía, Álvarez Carlos Arturo, Cortes Jorge Alberto OMV. Coproducciones de carbapenemasas un fenómeno en aumento y de difícil detección en el laboratorio de microbiología con pruebas fenotípicas [Internet]. 2016. Disponible en: http://www.grebo.org/grebo_site/jgrebo/documentos/Boletin_Informativo_2015_201 6.pdf Escobar JA, Gómez IT, Murillo MJ, Castro BE, Chavarro B, Márquez RA, et al. Design of two molecular methodologies for the rapid identification of Colombian community-acquired methicillin-resistant Staphylococcus aureus isolates. Biomedica [Internet]. 2012;32(2):214–23. Disponible en: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23242295 Rodríguez EA, Correa MM, Ospina S, Atehortúa SL, Jiménez JN. Differences in epidemiological and molecular characteristics of nasal colonization with Staphylococcus aureus (MSSA-MRSA) in children from a university hospital and day care centers. PLoS One. 2014;9(7). Planet PJ, Diaz L, Kolokotronis SO, Narechania A, Reyes J, Xing G, et al. Parallel epidemics of community-associated methicillin-resistant staphylococcus aureus USA300 infection in North and South America. J Infect Dis. 2015;212(12):1874–82. |
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Castro Cardozo, Betsy Esperanza0de5701ab97d7efe11a689ebbb62abc8Muñoz, Liliana Constanza569b4346b2e40695a9274fa9336f123dAnchico Godoy, James Alexander2de456b4b09f956ead609b69e6b49250Laurens Hernández, Mario Albertof40732053e4b23c42b78159c386905382021-12-06T19:58:07Z2021-12-06T19:58:07Z2018-05-31https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/377158417Staphylococcus aureus resistentes a meticilina de genotipo comunitario (SARM-GC) son un grupo de aislamientos de gran importancia clínica y epidemiológica debido a su emergencia en el ambiente comunitario y rápida diseminación en ambientes hospitalarios, gracias a su gran capacidad de adquirir mecanismos de virulencia y resistencia a antibióticos por medio de material genético foráneo. En Colombia, desde las últimas décadas, se ha identificado el incremento de infecciones generadas por SARM-GC; asociados únicamente a los clones USA300- variante Latinoamericana (USA300-VL) y COL923. Estos clones difieren entre sí en sus características genéticas y moleculares, debido a la presencia de diferentes subtipos de SCCmec, variaciones en la estructura de islas genómicas, perfil de resistencia y virulencia. Lo cual hace necesario realizar una adecuada identificación y caracterización de estos clones, lo que permitirá entender mejor su patogénesis, frecuencia y dinámicas de diseminación. Por esta razón el presente trabajo tuvo como objetivo estandarizar una PCR múltiple como herramienta para la identificación y diferenciación de aislamientos pertenecientes a los clones USA 300VL y COL923 de circulación nacional, en la cual se amplifican genes marcadores presentes en los elementos genéticos móviles de cada clon. Una vez estandarizado esta metodología se verificó su poder discriminatorio en una cohorte de 106 aislamientos provenientes de diferentes fuentes clínicas, previamente clasificadas como SARM-GC. Los resultados mostraron que si existen características moleculares que difieren a los clones USA 300VL y COL923 en la Isla de patogenicidad 5 de Staphylococcus aureus (SaPI5), Prografo 3 (ϕ3), Isla genómica beta y yqiL que permitieron su identificación y diferenciación por medio de PCR. Se logró identificar que el 68% de aislamientos, de los 12 evaluados en el estudio, se encuentran genéticamente relacionados con el clon USA 300VL; y que el 32% restante se asocian al clon COL923. Con los resultados obtenidos se pudo concluir que esta herramienta es rápida, menos costosa y dispendiosa a comparación de otras herramientas de identificación molecular tales como PFGE y MLST y que a su vez, brinda la posibilidad a que haya un mayor control epidemiológico de estos aislamientos teniendo en cuenta que tan variante es la epidemiologia de este microorganismo.RESUMEN EJECUTIVO 11 1. INTRODUCCION 13 2. ANTECEDENTES 16 3. MARCO TEORICO 22 3.1. Generalidades de Staphylococcus aureus 22 3.2. Factores de patogenicidad y virulencia 23 3.3. Mecanismo de acción de los B- lactamicos 25 3.4. Mecanismo de resistencia a la meticilina 27 3.5. Clasificación de los aislamientos Staphylococcus aureus resistentes a meticilina (SARM 28 3.6. Características moleculares de SARM. Tipo y subtipo de Casete Estafilocóccico Cromosomal SCCmec 31 3.7. Elementos genéticos móviles presentes en Staphylococcus aureus 33 3.7.1. Elemento móvil del catabolismo de la arginina (ACME).33 3.7.2. Islas de patogenicidad 34 3.7.3. Islas genómicas vSaα y vSaβ 37 3.8. Características moleculares asociadas al clon COL 923 y al clon USA300 VL 38 3.9. Epidemiologia de SARM en Colombia 44 4. PREGUNTA PROBLEMA 46 5. OBJETIVOS 47 5.1. Objetivo General 47 5.2. Objetivos específicos 47 6. METODOLOGIA 48 6.1. Tipo de estudio 48 6.2. Técnicas y procedimientos 50 6.2.1. Extracción y cuantificación de ADN 50 6.2.2. Descripción de los aislamientos 51 6.2.3. Amplificación de los elementos genéticos móviles de los aislamientos clínicos por PCR individual 52 6.2.4. Diseño de PCR múltiple 55 7. RESULTADOS 59 7.1. Caracterización de los aislamientos 59 7.1.1. Fuente de los aislamientos pertenecientes al estudio 59 7.1.2. Clasificación por resistencia a meticilina 60 7.2. Estandarización de PCR múltiple para la identificación de SARM-GC de circulación en Colombia 61 7.3. Condiciones para la digestión del gen Acetil coenzima A Acetil Transferasa (yqil 65 7.4. Evaluación de la frecuencia de los EGM en todos los aislamientos 67 7.5. Digestión del gen yqil 74 8. DISCUSION 76 9. CONCLUSIONES 80 ANEXOS 81 REFERENCIAS 83PregradoBacteriólogo(a) y Laboratorista Clínico88p.application/pdfspaUniversidad Colegio Mayor de CundinamarcaFacultad de Ciencias de la SaludBogotá D.CBacteriología y Laboratorio ClínicoUniversidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2018https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/info:eu-repo/semantics/closedAccessAtribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0)http://purl.org/coar/access_right/c_14cbEstandarización de una herramienta molecular para la identificación y diferenciación de dos clones de Staphylococcus Aureus resistentes a Meticilina de genotipo comunitario (Sarmgc) de circulación en ColombiaTrabajo de grado - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fhttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85Textinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesishttps://purl.org/redcol/resource_type/TPinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionLuján Roca DA. Staphylococcus aureus resistente a meticilina asociado a la comunidad: aspectos epidemiológicos y moleculares. An la Fac Med la Fac Med [Internet]. 2013;74(1):57–62. Disponible en: http://revistasinvestigacion.unmsm.edu.pe/index.php/anales/article/view/2053Cruz C, Castañeda E. Staphylococcus aureus , su éxito como patógeno y las implicaciones de la resistencia a los antimicrobianos. Médicas uis [Internet]. 2006;19:27–39. Disponible en: http://revistas.uis.edu.co/index.php/revistamedicasuis/article/viewFile/2231/2590Malachowa N, Kobayashi SD, Sturdevant DE, Scott DP, DeLeo FR. Insights into the Staphylococcus aureus-host interface: Global changes in host and pathogen gene expression in a rabbit skin infection model. PLoS One. 2015;10(2):1–15.Esparza-mantilla M. CARACTERIZACIÓN DE Staphylococcus aureus OBTENIDO DEL AMBIENTE HOSPITALARIO Y DEL PERSONAL DE SALUD EN UN CHARACTERIZATION OF Staphylococcus aureus OBTAINED FROM THE HOSPITAL ENVIRONMENT AND HEALTH CARE STAFF AT A HOSPITAL IN THE CITY OF CALI. 2017;16(2):22–33.Grupo para el control de la resistencia bacteriana de Bogota. Análisis de la vigilancia de la resistencia bacteriana año 2013. Componente pediátrico y adulto. Bol Inf GREBO [Internet]. 2014;(6):40. Disponible en: http://www.grebo.org/documentos/Boletin_Grebo_2014.pdfCarmen BO. Epidemiologia de la resistencia a meticilina en cepas de Staphylococcus aureus aisladas en hospitales españoles. Bienio. Universidad de Bacelona; 2006.Ricardo-caldera DM, Buelvas-doria FA, Escobar-pérez JA, Tovar-acero C. Colonizacion y factores de virulencia de Staphylococcus aureus resistente a meticilina en una población infantil de Montería. IATREIA. 2015;28(3):259–68.Escobar-Perez J, Reyes N, Marquez-Ortiz RA, Rebollo J, Pinzón H, Tovar C, et al. Emergence and spread of a new community-genotype methicillin-resistant Staphylococcus aureus clone in Colombia. BMC Infect Dis [Internet]. 2017;17(1):108. Disponible en: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28143440%0Ahttp://bmcinfectdis.biomedcent ral.com/articles/10.1186/s12879-017-2193-3Zendejas-manzo GS, Avalos-flores H, Soto-padilla MY. Microbiología general de Staphylococcus aureus : Generalidades , patogenicidad y métodos de identificación. 2014;25(3):129–43.Cervantes-García E, García-González R, Salazar-Schettino PM. Características generales del Staphylococcus aureus. Rev Latinoam Patol Clin Med Lab [Internet]. 2014;61(1):28–40. Disponible en: www.medigraphic.com/patologiaclinica%5Cnwww.medigraphic.org.mxCervantes-García E, García-González R, Salazar-Schettino PM. Características generales del Staphylococcus aureus. Rev Latinoam Patol Clin Med Lab [Internet]. 85 2014;61(1):28–40. Disponible en: www.medigraphic.com/patologiaclinica%5Cnwww.medigraphic.org.mxReview ADER. Interacciones farmacológicas relacionadas con la administración de antibióticos betalactámicos. 2016;73(5):227–34.Sopena N, Sabri M. Staphylococcus aureus resistente a la meticilina. Enferm Infecc Microbiol Clin. 2002;118(17):671–6.García-vázquez E, Hernández-torres A, Medicina S De, Clínico IH, Virgen U, Arrixaca D. Los betalactámicos en la práctica clínica. Rev española Quimioter. 2015;28(1):1–9Rice LB. Mechanisms of Resistance and Clinical Relevance of Resistance to βLactams, Glycopeptides, and Fluoroquinolones. JMCP [Internet]. 2012;87(2):198– 208. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1016/j.mayocp.2011.12.003Marín M. Antibióticos betalactámicos. Enfermedades Infecc Microbiol Clin. 2003;21(1):42–55.Suarez C. Antibioticos betalactámicos. Enferm Infecc Microbiol Clin. 2009;27(2):116–29.Camarena JJ, Microbiología D De, Universitario H, Peset D. INFECCIÓN POR Staphylococcus aureus RESISTENTE A METICILINA. Control Calid SEIMC. 1997;González C, Maribel J, Armindo J, General DB, Bioanálisis E De. Mecanismos de resistencia a antibióticos b -lactámicos en Staphylococcus aureus Mechanisms of Resistance To b -Lactam Antibiotics in Staphylococcus aureus. kasmera. 2010;38(1):18–35Luis J, Ángel J. Detección de mecanismos de resistencia. Enferm Infecc Microbiol Clin. 2003;21:72–4.Chávez M, Erazo NC, Reina DA, Esparza M. Métodos de tipificación y epidemiología molecular de Staphylococcus aureus con resistencia a la meticilina. Biosalud [Internet]. 2015;14(2):81–90. Disponible en: http://200.21.104.25/biosalud/downloads/Biosalud14(2)_8.pdfBustos-Martínez JA, Hamdan-Partida A, Gutiérrez-Cárdenas M. Staphylococcus aureus : la reemergencia de un patógeno. Rev biomed. 2006;17(4):287–305.Community-acquired methicillin-resistant staphylococcus aureus carrying panton- valentine leukocidin genes: Worldwide emergence. Emerg Infect Dis. 2003;9(8):978–84.Ma J. Tipo de cas set te cro mo só mi co es ta fi lo có ci co en ce pas clí ni cas de Staphylo coccus au reus re sis ten tes a me ti ci li na Staphylococcal Chromosomal Cassette Type in Clinical Strains of Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus. 2014;42(2):116–30.Cervantes-garcía E, García-gonzález R, Salazar-schettino PM. Importancia de Staphylococcus aureus meticilina resistente intrahospitalario y adquirido en la comunidad. Rev Latinoam Patol Clin Med Lab. 2014;61(4):196–204Ito T, Katayama Y, Asada K, Mori N, Tsutsumimoto K. Structural Comparison of Three Types of Staphylococcal Cassette Chromosome mec Integrated in the Chromosome in Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus. Antimicrob Agents Chemother. 2001;45(5):1323–36Ito T, Kuwahara-arai K, Katayama Y, Uehara Y, Han X, Kondo Y, et al. Staphylococcal Cassette Chromosome mec (SCC mec ) Analysis of MRSA. Springer Sci Media. 2014;1085:131–48.Francis Alonzo III VJT. A Lesson in Survival: S. aureus versus the Skin. Cell Host Microbe. 2013;3–5.St-mrsa-iv G, Shore AC, Rossney AS, Brennan OM, Kinnevey PM, Humphreys H, et al. Characterization of a Novel Arginine Catabolic Mobile Element ( ACME ) and Staphylococcal Chromosomal Cassette mec Composite Island with Significant Homology to Staphylococcus epidermidis ACME Type II in Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus. Antimicrob Agents Chemother. 2011;55(5):1896–905.Quiceno JNJ, Ochoa MMC. Staphylococcus aureus resistente a meticilina : bases moleculares de la resistencia , epidemiología y tipificación. LATREIA. 2009;22:147–58.Deurenberg RH, Nieuwenhuis RF, Driessen C, London N, Stassen FR, Tiel FH Van, et al. The prevalence of the Staphylococcus aureus tst gene among community- and hospital-acquired strains and isolates from Wegener Õ s Granulomatosis patients. FEMS Microbiol Lett. 2017;245(September):185–9.Pinchuk I V, Beswick EJ, Reyes VE. Staphylococcal Enterotoxins. MDPI Toxins. 2010;2:2177–97.Novick RP, Schlievert P, Ruzin A. Pathogenicity and resistance islands of staphylococci. Microbes Infect. 2001;3:585–94.Papageorgiou AC, Tranter HS, Acharya KR. Crystal Structure of Microbial Superantigen Ê Resolution : Staphylococcal Enterotoxin B at 1 . 5 A Implications for Superantigen Recognition by MHC Class II Molecules and T-cell Receptors. JMB. 1998;61–79.Chiang Y, Liao W, Fan C, Pai W. PCR detection of Staphylococcal enterotoxins ( SEs ) N , O , P , Q , R , U , and survey of SE types in Staphylococcus aureus isolates from food-poisoning cases in Taiwan. Int J Food Microbiol. 2008;121:66–73.Argudín MÁ, Mendoza MC, Rodicio MR. Food Poisoning and Staphylococcus aureus Enterotoxins. MDPI Toxins. 2010;1751–73.D.-L. Hu, H.K. Ono, S. Isayama , R. Okada , M. Okamura , L.C. Lei, Z.S. Liu, X.-C. Zhang, M.Y. Liu , J.C. Cui AN. Biological characteristics of staphylococcal enterotoxin Q and its potential risk for food poisoning. J Appl Microbiol. 2017;1672–9Orwin PM, Leung DYM, Donahue HL, Novick RP, Schlievert PM. Biochemical and Biological Properties of Staphylococcal Enterotoxin K. Am Soc Microbiol Infect INMUNITY. 2001;69(1):360–6.Jodi A. Lindsay . Matthew T. G. Holden. Understanding the rise of the superbug: investigation of the evolution and genomic variation of Staphylococcus aureus. Funct Integr Genomics. 2006;6:186–201.Olarte NM, Valderrama IA, Reyes KR, Garzón MI, Escobar JA, Castro BE, et al. Colonización por Staphylococcus aureus resistente a la meticilina en una unidad de cuidados intensivos de adultos de un hospital colombiano : caracterización fenotípica y molecular con detección de un clon de circulación en la comunidad. Biomédica. 2010;182(3):353–61.María Ángeles Domínguez Luzóna y Miquel Pujol Rojo. Cambios en la epidemiología de. Control Calid SEIMC [Internet]. 1991; Disponible en: www.seimc.orgUsa MS, Arias C a, Sc M, D P, Universitario H. NIH Public Access. English J. 2009;359(20):2177–9.Machuca MA, Sosa LM, González CI. Molecular Typing and Virulence Characteristic of Methicillin-Resistant Staphylococcus Aureus Isolates from Pediatric Patients in Bucaramanga, Colombia. PLoS One. 2013;8(8).David MZ, Daum RS. Community-associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus: Epidemiology and clinical consequences of an emerging epidemic. Clin Microbiol Rev. 2010;23(3):616–87.Chaves F. Emergencia de infecciones peditricas por Staphylococcus aureus resistente a meticilina asociadas a la comunidad: ??debemos dar la alerta? Enferm Infecc Microbiol Clin. 2010;28(10):672–4Acuña M, Benadof D, Jadue C, Hormazábal JC, Alarcón P, Contreras J, et al. Staphylococcus aureus resistente a meticilina asociado a la comunidad (SARM-AC): comunicación de los primeros cuatro casos pediátricos descritos en Hospital de Niños Roberto del Río. Rev Chil infectología. 2015;32(3):350–6.Ocampo AM, Vélez L a, Robledo J, Jiménez JN. Cambios a lo largo del tiempo en la distribución de los complejos de clones dominantes de Staphylococcus aureus resistente a la meticilina en Medellín , Colombia. Biomédica. 2014;34(Supl 1):34– 40.Rincón S, Panesso D, Díaz L, Carvajal LP, Reyes J, Munita JM, et al. [Resistance to "last resort" antibiotics in Gram-positive cocci: The post-vancomycin era]. Biomedica. 2014;34 Suppl 1(0 1):191–208.Escobar-Perez J a, Castro BE, Marquez-Ortiz R a, Gaines S, Chavarro B, Moreno J, et al. Aislamientos de Staphylococcus aureus sensibles a meticilina relacionados genéticamente con el clon USA300, ¿origen de los aislamientos SARM de genotipo comunitario en Colombia? Biomedica. 2014;34(3):124–36Alvarez CA, Yomayusa N, Leal AL, Moreno J, Mendez-Alvarez S, Ibañez M, et al. Nosocomial infections caused by community-associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus in Colombia. Am J Infect Control. 2010;38(4):315–8.Jiménez JN, Ocampo AM, Vanegas JM, Rodriguez EA, Mediavilla JR, Chen L, et al. CC8 MRSA strains harboring SCCmec type IVc are predominant in Colombian hospitals. PLoS One. 2012;7(6):1–10.Escobar JA, Marquez-Ortiz RA, Alvarez-Olmos MI, Leal AL, Castro BE, Vanegas N. Detection of a new community genotype methicillin-resistant staphylococcus aureus clone that is unrelated to the USA300 clone and that causes pediatric infections in colombia. J Clin Microbiol. 2013;51(2):661–4.Leal Ana Lucía, Álvarez Carlos Arturo, Cortes Jorge Alberto OMV. Coproducciones de carbapenemasas un fenómeno en aumento y de difícil detección en el laboratorio de microbiología con pruebas fenotípicas [Internet]. 2016. Disponible en: http://www.grebo.org/grebo_site/jgrebo/documentos/Boletin_Informativo_2015_201 6.pdfEscobar JA, Gómez IT, Murillo MJ, Castro BE, Chavarro B, Márquez RA, et al. Design of two molecular methodologies for the rapid identification of Colombian community-acquired methicillin-resistant Staphylococcus aureus isolates. Biomedica [Internet]. 2012;32(2):214–23. Disponible en: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23242295Rodríguez EA, Correa MM, Ospina S, Atehortúa SL, Jiménez JN. Differences in epidemiological and molecular characteristics of nasal colonization with Staphylococcus aureus (MSSA-MRSA) in children from a university hospital and day care centers. PLoS One. 2014;9(7).Planet PJ, Diaz L, Kolokotronis SO, Narechania A, Reyes J, Xing G, et al. Parallel epidemics of community-associated methicillin-resistant staphylococcus aureus USA300 infection in North and South America. J Infect Dis. 2015;212(12):1874–82.Ambiente comunitarioAmbientes hospitalarios,SARM-GCIslas genómicasStaphylococcus aureusGenotipo comunitarioResistencia a meticilinaReacción en cadena de la polimerasaGenotipo comunitarioUSA300-VLCOL923TEXTsustentacionn final.pdf.txtsustentacionn final.pdf.txtExtracted texttext/plain14644https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3771/5/sustentacionn%20final.pdf.txt16a7e801486d61d9fce2fed13b9e38d5MD55open accessTrabajo de grado - James Anchico y Mario Laurens.pdf.txtTrabajo de grado - James Anchico y Mario Laurens.pdf.txtExtracted texttext/plain116768https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3771/7/Trabajo%20de%20grado%20-%20James%20Anchico%20y%20Mario%20Laurens.pdf.txt3469d985912b2ec25bd19953c468be85MD57open accessTrabajo de grado - James Anchico y Mario Laurens CARTAS.pdf.txtTrabajo de grado - James Anchico y Mario Laurens CARTAS.pdf.txtExtracted texttext/plain108https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3771/9/Trabajo%20de%20grado%20-%20James%20Anchico%20y%20Mario%20Laurens%20CARTAS.pdf.txtb0fc5e786d2dc84908a4c64d3da0ed3eMD59metadata only accessTHUMBNAILsustentacionn final.pdf.jpgsustentacionn final.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg10187https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3771/6/sustentacionn%20final.pdf.jpgad32d232f4c9955cc064afdac553bde9MD56open accessTrabajo de grado - James Anchico y Mario Laurens.pdf.jpgTrabajo de grado - James Anchico y Mario Laurens.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg7812https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3771/8/Trabajo%20de%20grado%20-%20James%20Anchico%20y%20Mario%20Laurens.pdf.jpg08eb5c9f33167075d3fde05f44670e55MD58open accessTrabajo de grado - James Anchico y Mario Laurens CARTAS.pdf.jpgTrabajo de grado - James Anchico y Mario Laurens CARTAS.pdf.jpgGenerated 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