Evaluación de la actividad antibacteriana de péptidos sintéticos análogos de la buforina II contra escherichia coli, pseudomonas aeruginosa y staphylococcus aureus

El uso indiscriminado de antibióticos convencionales usados en el tratamiento de infecciones causadas por microorganismos ha generado aumento en la tasa de resistencia bacteriana, esta problemática es considerada como una amenaza creciente para la salud pública a nivel mundial1. La resistencia a los...

Full description

Autores:
Hernández Cardona, Angie Katherine
Tipo de recurso:
Trabajo de grado de pregrado
Fecha de publicación:
2019
Institución:
Colegio Mayor de Cundinamarca
Repositorio:
Repositorio Colegio Mayor de Cundinamarca
Idioma:
spa
OAI Identifier:
oai:repositorio.unicolmayor.edu.co:unicolmayor/229
Acceso en línea:
https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/229
Palabra clave:
Microbiología médica
Virología médica
Bacterias
BFII
PAMs
Motivo mínimo
Actividad antibacteriana
Palíndromo
CMI
CMB
Rights
openAccess
License
Derechos Reservados -Universidad Colegio Myor de Cundinamarca ,2019
id UCOLMAYOR2_52d52d52e1ae1ae9213d85ee3f5b5d62
oai_identifier_str oai:repositorio.unicolmayor.edu.co:unicolmayor/229
network_acronym_str UCOLMAYOR2
network_name_str Repositorio Colegio Mayor de Cundinamarca
repository_id_str
dc.title.spa.fl_str_mv Evaluación de la actividad antibacteriana de péptidos sintéticos análogos de la buforina II contra escherichia coli, pseudomonas aeruginosa y staphylococcus aureus
title Evaluación de la actividad antibacteriana de péptidos sintéticos análogos de la buforina II contra escherichia coli, pseudomonas aeruginosa y staphylococcus aureus
spellingShingle Evaluación de la actividad antibacteriana de péptidos sintéticos análogos de la buforina II contra escherichia coli, pseudomonas aeruginosa y staphylococcus aureus
Microbiología médica
Virología médica
Bacterias
BFII
PAMs
Motivo mínimo
Actividad antibacteriana
Palíndromo
CMI
CMB
title_short Evaluación de la actividad antibacteriana de péptidos sintéticos análogos de la buforina II contra escherichia coli, pseudomonas aeruginosa y staphylococcus aureus
title_full Evaluación de la actividad antibacteriana de péptidos sintéticos análogos de la buforina II contra escherichia coli, pseudomonas aeruginosa y staphylococcus aureus
title_fullStr Evaluación de la actividad antibacteriana de péptidos sintéticos análogos de la buforina II contra escherichia coli, pseudomonas aeruginosa y staphylococcus aureus
title_full_unstemmed Evaluación de la actividad antibacteriana de péptidos sintéticos análogos de la buforina II contra escherichia coli, pseudomonas aeruginosa y staphylococcus aureus
title_sort Evaluación de la actividad antibacteriana de péptidos sintéticos análogos de la buforina II contra escherichia coli, pseudomonas aeruginosa y staphylococcus aureus
dc.creator.fl_str_mv Hernández Cardona, Angie Katherine
dc.contributor.advisor.none.fl_str_mv Estupiñán Torres, Sandra Mónica
dc.contributor.author.none.fl_str_mv Hernández Cardona, Angie Katherine
dc.contributor.researchgroup.spa.fl_str_mv Trabajo de investigación
dc.subject.lemb.none.fl_str_mv Microbiología médica
Virología médica
Bacterias
topic Microbiología médica
Virología médica
Bacterias
BFII
PAMs
Motivo mínimo
Actividad antibacteriana
Palíndromo
CMI
CMB
dc.subject.proposal.spa.fl_str_mv BFII
PAMs
Motivo mínimo
Actividad antibacteriana
Palíndromo
CMI
CMB
description El uso indiscriminado de antibióticos convencionales usados en el tratamiento de infecciones causadas por microorganismos ha generado aumento en la tasa de resistencia bacteriana, esta problemática es considerada como una amenaza creciente para la salud pública a nivel mundial1. La resistencia a los antibióticos (RA) se produce cuando las bacterias mutan en respuesta al uso inadecuado y/o innecesario de estos fármacos2. Dentro de este contexto, actualmente se buscan nuevas alternativas terapéuticas que mitiguen esta problemática. Entre estas opciones se encuentran los péptidos antimicrobianos (PAMs), los PAMs son importantes moléculas efectoras del sistema inmune innato, el cual es el principal mecanismo de defensa para la mayoría de los organismos vivos durante las etapas iniciales de infección bacteriana y han exhibido un amplio espectro de actividad antibacteriana que incluye bacterias Gram positivas como Gram negativas3. En la actualidad, hay más de 2000 secuencias peptídicas reportadas relacionadas a PAMs, son secuencias relativamente cortas, generalmente conformadas entre 10 a 50 aminoácidos3. Dentro de los PAMs, encontramos la Buforina II (BFII), péptido sintético derivado de la Buforina I (BFI), el cual se encuentra en el tejido estomacal del sapo asiático Bufo gargarizans. La BFII es un péptido de 21 aminoácidos, el cual ha exhibido mayor actividad antibacteriana que la BFI frente a cepas bacterias Gram positivas como Gram negativas4. En este trabajo se evaluó la actividad antibacteriana de 8 péptidos sintéticos lineales derivados del motivo mínimo antibacteriano de la BFII (32RLLR35), contra E. coli ATCC 25922, P. aeruginosa ATCC 27853 y S. aureus ATCC 25923. Nuestros resultados permitieron identificar secuencias peptídicas con amplio espectro de actividad cuyas concentraciones mínimas inhibitorias (CMIs) variaron en un rango de concentración de 38 μM a 259 μM. De manera general los péptidos palindrómicos presentaron mejor actividad frente a las cepas evaluadas. Los resultados de este trabajo sugieren que la incorporación de Cys y Ahx sobre secuencias palindrómicas derivadas de la BFII incrementan la actividad antibacteriana.
publishDate 2019
dc.date.issued.none.fl_str_mv 2019-09
dc.date.accessioned.none.fl_str_mv 2021-06-11T21:52:15Z
dc.date.available.none.fl_str_mv 2021-06-11T21:52:15Z
dc.type.spa.fl_str_mv Trabajo de grado - Pregrado
dc.type.coar.spa.fl_str_mv http://purl.org/coar/resource_type/c_7a1f
dc.type.coarversion.spa.fl_str_mv http://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85
dc.type.content.spa.fl_str_mv Text
dc.type.driver.spa.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/bachelorThesis
dc.type.redcol.spa.fl_str_mv https://purl.org/redcol/resource_type/TP
dc.type.version.spa.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
format http://purl.org/coar/resource_type/c_7a1f
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.none.fl_str_mv https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/229
dc.identifier.barcode.none.fl_str_mv 60151
url https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/229
identifier_str_mv 60151
dc.language.iso.spa.fl_str_mv spa
language spa
dc.relation.ispartof.none.fl_str_mv No objeto asociado
dc.relation.references.spa.fl_str_mv 1. OMS | Importancia de la resistencia a los antimicrobianos para la salud pública. WHO [Internet]. 2016 [citado 26 de febrero de 2019]; Disponible en: https://www.who.int/drugresistance/AMR_Importance/es/
2. Huertas Méndez NDJ, Vargas Casanova Y, Gómez Chimbi AK, Hernández E, Leal Castro AL, Melo Diaz JM, et al. Synthetic Peptides Derived from Bovine Lactoferricin Exhibit Antimicrobial Activity against E. coli ATCC 11775, S. maltophilia ATCC 13636 and S. enteritidis ATCC 13076. Molecules [Internet]. 2017;22(3):1-10. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28287494
3. Mahlapuu M, Håkansson J, Ringstad L, Björn C. Antimicrobial Peptides: An Emerging Category of Therapeutic Agents. Front Cell Infect Microbiol [Internet]. 2016;6:1-12. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5186781/
4. Uyterhoeven ET, Butler CH, Ko D, Elmore DE. Investigating the nucleic acid interactions and antimicrobial mechanism of buforin II. FEBS Lett [Internet]. 2008;582(12):1-6. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1016/j.bbamem.2008.10.025
5. Alós J-I. Resistencia bacteriana a los antibióticos: una crisis global. Enferm Infecc Microbiol Clin [Internet]. 2014;33(10):1-9. Disponible en: http://www.elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas-microbiologia-clinica-28-articulo-resistencia-bacteriana-los-antibioticos-una-S0213005X14003413
6. OMS. Datos recientes revelan los altos niveles de resistencia a los antibióticos en todo el mundo. WHO [Internet]. 2018 [citado 25 de febrero de 2019]; Disponible en: https://www.who.int/mediacentre/news/releases/2018/antibiotic-resistance-found/es/
7. OMS. La OMS publica la lista de las bacterias para las que se necesitan urgentemente nuevos antibióticos [Internet]. WHO. 2017 [citado 26 de febrero de 2019]. Disponible en: https://www.who.int/es/news-room/detail/27-02-2017-who-publishes-list-of-bacteria-for-which-new-antibiotics-are-urgently-needed
8. SAMP. Síntesis y Aplicación de Moléculas Peptídicas [Internet]. Universidad nacional de Colombia. [citado 26 de febrero de 2019]. Disponible en: http://ciencias.bogota.unal.edu.co/gruposdeinvestigacion/sintesis-y-aplicacion-de-moleculas-peptidicas/informacion-general/?L=1
9. Sanchez ML. Mecanismos de acción de péptidos antimicrobianos y mecanismos de resistencia de los patógenos. Bioquímica y Patol Clínica [Internet]. 2016;1-6. Disponible en: https://www.researchgate.net/publication/292962665_Mecanismos_de_accion_de_peptidos_antimicrobianos_y_mecanismos_de_resistencia_de_los_patogenos
10. Hyun J, Hyun B, Chang S. Buforins : Histone H2A-derived antimicrobial peptides from toad stomach. BBA - Biomembr [Internet]. 2009;1788(8):1-9. Disponible en:http://dx.doi.org/10.1016/j.bbamem.2008.10.025
11. S.L DD. Palindromos: Secuencias Especiales del DNA. DNA Didact [Internet]. :1-6. Disponible en: http://www.dnadidactic.com/docs/Palindromos de ADN y Enzimas de restriccion_ DNA didactic.pdf
12. Vargas Casanova Y, Rodríguez Guerra JA, Umaña Pérez YA, Leal Castro AL, Almanzar Reina G, García Castañeda JE, et al. Antibacterial Synthetic Peptides Derived from Bovine Lactoferricin Exhibit Cytotoxic Effect against MDA-MB-468 and MDA-MB-231 Breast Cancer Cell Lines. Molecules [Internet]. 2017;22(10):1-11. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28961215
13. Yang ST, Shin SY, Lee CW, Kim YC, Hahm KS, Kim J Il. Selective cytotoxicity following Arg-to-Lys substitution in tritrpticin adopting a unique amphipathic turn structure. FEBS Lett. 2003;540(1-3):229-33.
14. Kim HS, Park CB, Kim MS, Kim SC. cDNA Cloning and Characterization of Buforin I , an Antimicrobial Peptide : A Cleavage Product of Histone H2A pathogenic microorganisms , are widely distributed in nature and often show marked inter- species diversity in structure and spectrum of activity. Biochem Biophys Res Commun [Internet]. 1996;387:1-7. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8954908
15. Park CB, Kim HS, Kim SC. Mechanism of Action of the Antimicrobial Peptide Buforin II : Buforin II Kills Microorganisms by Penetrating the Cell Membrane and Inhibiting Cellular Functions. Biochem Biophys Res Commun [Internet]. 1998;257:1-7. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/9514864
16. Kobayashi S, Takeshima K, Park CB, Kim SC, Matsuzaki K. Interactions of the Novel Antimicrobial Peptide Buforin 2 with Lipid Bilayers : Proline as a Translocation Promoting Factor. Biochemistry [Internet]. 2000;39:1-6. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10913273
17. Park CB, Yi K, Matsuzaki K, Kim MS, Kim SC. Structure – activity analysis of buforin II , a histone H2A-derived antimicrobial peptide : The proline hinge is responsible for the cell-penetrating ability of buforin II. PNAS [Internet]. 2000;97(15):1-6. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10890923
18. Soo H, Bae C, Min J, Jang SA, Yup I, Sun M, et al. Mechanism of anticancer activity of buforin IIb , a histone H2A-derived peptide. ScienceDirect [Internet]. 2008;271:1-9. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18617323
19. Hao G, Shi Y, Tang Y, Le G. Peptides The membrane action mechanism of analogs of the antimicrobial peptide Buforin 2. ELSEVIER [Internet]. 2009;30:1-7. Disponible en: ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19467281
20. Donald E. Insights into Buforin II Membrane Translocation from Molecular Dynamics Simulations. NIH [Internet]. 2012;38(2):1-16. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23022591
Cutrona KJ, Kaufman BA, Figueroa DM, Elmore DE. Role of arginine and lysine in the antimicrobial mechanism of histone-derived antimicrobial peptides. FEBS Lett[Internet]. 2015;589(24):3915-20. Disponible en: ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4713009/pdf/nihms-742563.pdf
22. Agarwal S, Sharma G, Dang S, Gupta S. Antimicrobial Peptides as anti-Infectives against Staphylococcus epidermidis. Med pric Pr [Internet]. 2016;25:1-8. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5588407/
23. Tonarelli G, Simonetta A. Péptidos antimicrobianos de organismos procariotas y eucariotas como agentes terapéuticos y conservantes de alimentos. Fabicib [Internet]. 2014;17:1-6. Disponible en: http://bibliotecavirtual.unl.edu.ar/publicaciones/index.php/FABICIB/article/view/4316
24. Hancock REW, Chapple DS. Peptide Antibiotics. Antimicrob Agents Chemother [Internet]. 1999;43(6):1-6. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10348745
25. Téllez GA CJ. Péptidos antimicrobianos. Infectio [Internet]. 2010;14(1):1-13. Disponible en: http://www.scielo.org.co/pdf/inf/v14n1/v14n1a07.pdf
26. Fosgerau K, Hoffmann T. Peptide therapeutics: Current status and future directions. Drug Discov Today [Internet]. 2015;20(1):2-8. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1016/j.drudis.2014.10.003
27. Ministerio de salud. Proceso De Investigación, Desarrollo Y Aprobación De Un Fármaco. MSDsalud [Internet]. 2016;1-9. Disponible en: https://www.msdsalud.es/recursos-de-salud/guias-para-pacientes/proceso-investigacion-desarrollo-aprobacion-farmaco.html
28. Ventola CL. The Antibiotic Resistance Crisis. Pharm Ther [Internet]. 2015;40(4):1-7. Disponible en: https://www.jstage.jst.go.jp/article/electrochemistry/82/9/82_14-5-E2639/_pdf
29. Pasteran F, Corso A, Monsalvo M, Frenkel J, Lazovski J. Resistencia a los antimicrobianos : causas , consecuencias y perspectivas en Argentina. Whonet-Argentina [Internet]. 2013;4:1-4. Disponible en: http://antimicrobianos.com.ar/ATB/wp-content/uploads/2015/06/Article1.pdf
30. Barcelona I de salud global de. Informe: La batalla contra las resistencias [Internet]. ISGLOBAL. 2016 [citado 26 de febrero de 2019]. Disponible en: https://www.isglobal.org/informe-la-batalla-contra-las-resistencias
31. Sánchez Merino JM, Guillán Maquieira C, Fuster Foz C, Madrid García FJ, Jiménez Rodríguez M, García Alonso J. Sensibilidad microbiana de escherichia coli en infecciones urinarias extrahospitalarias. Actas Urológicas Españolas [Internet]. 2003;27(10):3-7. Disponible en: http://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0210480603730149
32. Gómez CA, Leal AL, Pérez M de J, Navarrete ML. Resistance mechanisms in Pseudomonas aeruginosa: understanding a dangerous enemy. Rev la Fac Med [Internet]. 2005;53(1):27-34. Disponible en: http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0120-
33. Pérez N, Pavas N, Rodríguez EI. Resistencia de Staphylococcus aureus a los antibióticos en un hospital de la orinoquia colombiana. Infectio [Internet]. 2014;15(3):1-6. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1016/S0123-9392(10)70108-9
34. Medell M, Hart M, Batista ML. Sensibilidad antimicrobiana in vitro en aislamientos de Enterococcus faecalis y Enterococcus faecium obtenidos de pacientes hospitalizados. Biomédica [Internet]. 2013;34(0):1-8. Disponible en: https://www.revistabiomedica.org/index.php/biomedica/article/view/2122
35. López-Segura V, Muñoz-Camargo C, Groot H. El secreto antimicrobiano de las histonas. Apunt Cient uniandinos [Internet]. 2014;16:14-6. Disponible en: https://www.researchgate.net/publication/319315802_El_secreto_antimicrobiano_de_las_histonas
35. López-Segura V, Muñoz-Camargo C, Groot H. El secreto antimicrobiano de las histonas. Apunt Cient uniandinos [Internet]. 2014;16:14-6. Disponible en: https://www.researchgate.net/publication/319315802_El_secreto_antimicrobiano_de_las_histonas
37. Cecilia MG. El poder de la cisteína. Inst Bioquim Veg y Fotosint [Internet]. 2005;1:15-8. Disponible en: http://digital.csic.es/bitstream/10261/41022/1/Páginas de EVENTOS310014%5B1%5D.pdf
38. Huertas N de J, Monroy ZJR, Medina RF, Castañeda JEG. Antimicrobial Activity of Truncated and Polyvalent Peptides Derived from the FKCRRQWQWRMKKGLA Sequence against Escherichia coli ATCC 25922 and Staphylococcus aureus ATCC 25923. Molecules [Internet]. 2017;22(6):1-11. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28613262
39. Jiang Z, Vasil AI, Vasil ML, Hodges RS. «Specificity determinants» improve therapeutic indices of two antimicrobial peptides piscidin 1 and dermaseptin S4 against the gram-negative pathogens Acinetobacter baumannii and Pseudomonas aeruginosa. Pharmaceuticals [Internet]. 2014;7(4):1-26. Disponible en: doi:10.3390/ph7040366
40. Castañeda HM. PÉPTIDOS QUIMÉRICOS DERIVADOS DE LA LACTOFERRICINA BOVINA Y LA BUFORINA: SÍNTESIS, CARACTERIZACIÓN Y EVALUACIÓN DE SU ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA. Tesis Maest. 2019;34.
41. Introducción Escherichia. DePa [Internet]. :1-24. Disponible en: http://depa.fquim.unam.mx/bacteriologia/pdfs/ART%CDC-ECEH.pdf
42. AGUILAR R, OLARTE J. Escherichia coli como causa de diarrea infantil. Rev Cubana Pediatr [Internet]. 2003 [citado 15 de agosto de 2019];22(6):334-33448. Disponible en: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0034-75312003000300010
43. BETELGEUX. Escherichia Coli: características, patogenicidad y prevención (I) - 53 Referencias bibliográficas [Internet]. BETELGEUX. 2016 [citado 26 de febrero de 2019]. Disponible en: https://www.betelgeux.es/blog/escherichia-coli-caracteristicas-patogenicidad-y-prevencion-i/ . 2011;28(4):9-11.
45. Pavia AT, Nichols CR, Green DP, Tauxe R V., Mottice S, Greene KD, et al. Hemolytic-uremic syndrome during an outbreak of Escherichia coli O157:H7 infections in institutions for mentally retarded persons: Clinical and epidemiologic observations. J Pediatr. 1990;116(4):544-51.
46. ATCC. Escherichia coli (Migula) Castellani and Chalmers ATCC ® 25922 [Internet]. ATCC. 2017 [citado 26 de febrero de 2019]. Disponible en: https://www.atcc.org/products/all/25922.aspx#documentation
47. INTRODUCCIÓN Pseudomonas. 2008;1-16. Disponible en: http://catarina.udlap.mx/u_dl_a/tales/documentos/lbc/guzman_perez_s/capitulo3.pdf
48. INSeHT. Pseudomonas aeuroginosa. DATABio [Internet]. 2016;1:1-5. Disponible en: http://www.insht.es/RiesgosBiologicos/Contenidos/Fichas de agentes biologicos/Fichas/Pseudomonas aeruginosa 2017.pdf
49. Ruiz-Martinez L. Pseudomonas aeruginosa : aportacion al conocimiento de su estructura y al de los mecanismos que contribuyen a su resistencia a los antimicrobianos. Univ Barcelona [Internet]. 2007;Tesis doct:12. Disponible en: https://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/2521/LRM_TESIS.pdf?sequence=1&isAllowed=y
50. Casal M del M, Causse M, Rodríguez-López F, Casal M. Resistencia antimicrobiana en aislados clínicos de pseudomonas aeruginosa. Rev Esp Quimioter. 2012;25(1):37-41.
51. ATCC. Pseudomonas aeruginosa (Schroeter) Migula ATCC ® 27853TM [Internet]. ATCC. 2017 [citado 26 de febrero de 2019]. Disponible en: https://www.atcc.org/products/all/27853.aspx#documentation
52. Chans GR. Estafilococos. Temas Bacteriol y Virol para CEFA [Internet]. 2015;1-12. Disponible en: http://www.higiene.edu.uy/cefa/Libro2002/Cap 17.pdf
53. Akanbi OE, Njom HA, Fri J, Otigbu AC, Clarke AM. Antimicrobial susceptibility of Staphylococcus aureus isolated from recreational waters and beach sand in Eastern Cape Province of South Africa. Int J Environ Res Public Health [Internet]. 2017;14(9):1-15. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28862669
54. Taylor TA, Unakal CG. Staphylococcus Aureus [Internet]. StatPearls. StatPearls Publishing; 2018 [citado 26 de febrero de 2019]. Disponible en: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28722898
55. Robinson FPA, Shalit M. Características generales del Staphylococcus aureus. Anti-Corrosion Methods Mater [Internet]. 2014;1(4):11-4. Disponible en: https://www.medigraphic.com/pdfs/patol/pt-2014/pt141e.pdf
56. Camarena, J; Roberto R. INFECCIÓN POR Staphylococcus aureus RESISTENTE A METICILINA. Control Calid SEIMC [Internet]. 2000;1-5. Disponible en: https://seimc.org/contenidos/ccs/revisionestematicas/bacteriologia/sarm.pdf
57. ATCC. Staphylococcus aureus subsp. aureus Rosenbach ATCC ® 25923TM [Internet]. ATCC. 2017 [citado 26 de febrero de 2019]. Disponible en: https://www.atcc.org/Products/All/25923.aspx#history
58. Use I. Instructions for Use Content : Instructions for Use. Microbiologics [Internet]. 2017;1-7. Disponible en: https://v3.globalcube.net/clients/beldico/content/medias/images/producten/imp/quality_control/english_lyfo_disk__kwik-stik__kwik-stik_plus_instructions_for_use.pdf
59. Rodríguez V, Pineda H, Ardila N, Insuasty D, Cárdenas K, Román J, et al. Efficient Fmoc Group Removal Using Diluted 4-Methylpiperidine: An Alternative for a Less-Polluting SPPS-Fmoc/tBu Protocol. Int J Pept Res Ther [Internet]. 2019;(0123456789):4-6. Disponible en: https://doi.org/10.1007/s10989-019-09865-9
60. CLSI. Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That Grow Aerobically ; Approved Standard — Ninth Edition. CLSI document M07-A9. [Internet]. Vol. 32, Clinical and Laboratory Standars Institute. 2012. 18 p. Disponible en: https://www.researchgate.net/file.PostFileLoader.html?id=564ceedf5e9d97daf08b45a2&assetKey=AS%3A297254750572544%401447882463055
61. Arthur L. Barry, Ph.D. William A. Craig, M.D. Harriette Nadler, Ph.D. L. Barth Reller MDCCS. M26-A: Methods for Determining Bactericidal Activity of Antimicrobial Agents; Approved Guideline. Clin Lab Stand Inst [Internet]. 1999;19(1):56-78. Disponible en: https://clsi.org/media/1462/m26a_sample.pdf
62. Arango-Rodríguez ML, Vernot J-P, Solarte VA, García JE, Rivera ZJ, Rosas JE. A Tetrameric Peptide Derived from Bovine Lactoferricin Exhibits Specific Cytotoxic Effects against Oral Squamous-Cell Carcinoma Cell Lines. Biomed Res Int [Internet]. 2015;2015:1-13. Disponible en: //dx.doi.org/10.1155/2015/630179
63. Beristain-Bauza S., Palou E, Lopez-Malo A. Bacteriocinas : antimicrobianos naturales y su aplicación en los alimentos. Temas Sel Ing Aliment [Internet]. 2012;2:64-78. Disponible en: https://www.usfx.bo/nueva/vicerrectorado/citas/TECNOLOGICAS_20/Ingenieria de Alimentos/Beristain-Bauza-et-al-2012.pdf
64. Pírez M. Morfologia Y Estructura Bacteriana. 2002;1-10. Disponible en: http://www.higiene.edu.uy/cefa/Libro2002/Cap 9.pdf
65. Gloria Soberón. Pseudomonas aeruginosa. Inst Biotecnol [Internet]. :14. Disponible en: http://www.biblioweb.tic.unam.mx/libros/microbios/Cap3/
66. Pane K, Durante L, Crescenzi O, Cafaro V, Pizzo E, Varcamonti M, et al. Antimicrobial Potency of Cationic Antimicrobial Peptides can be Predicted from their Amino Acid Composition: Application to the Detection of «Cryptic» Antimicrobial Peptides.
dc.rights.eng.fl_str_mv Derechos Reservados -Universidad Colegio Myor de Cundinamarca ,2019
dc.rights.uri.spa.fl_str_mv https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/
dc.rights.accessrights.spa.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
dc.rights.creativecommons.spa.fl_str_mv Atribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0)
dc.rights.coar.spa.fl_str_mv http://purl.org/coar/access_right/c_abf2
rights_invalid_str_mv Derechos Reservados -Universidad Colegio Myor de Cundinamarca ,2019
https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/
Atribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0)
http://purl.org/coar/access_right/c_abf2
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.extent.spa.fl_str_mv 63p.
dc.format.mimetype.spa.fl_str_mv application/pdf
dc.coverage.city.none.fl_str_mv Bogotá D.C.
dc.publisher.spa.fl_str_mv Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca
dc.publisher.faculty.spa.fl_str_mv Facultad de Ciencias de la Salud
dc.publisher.place.spa.fl_str_mv Bogotá, Distrito Capital
dc.publisher.program.spa.fl_str_mv Bacteriología y Laboratorio Clínico
institution Colegio Mayor de Cundinamarca
bitstream.url.fl_str_mv https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/229/1/SEMINARIO%20BUFORINA.pdf
https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/229/2/1%20para%20subir%20TESIS%20PvTRAP%20%281%29.pdf
https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/229/3/2%20para%20subir%20TESIS%20PvTRAP.pdf
https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/229/4/license.txt
https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/229/5/SEMINARIO%20BUFORINA.pdf.txt
https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/229/7/1%20para%20subir%20TESIS%20PvTRAP%20%281%29.pdf.txt
https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/229/9/2%20para%20subir%20TESIS%20PvTRAP.pdf.txt
https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/229/6/SEMINARIO%20BUFORINA.pdf.jpg
https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/229/8/1%20para%20subir%20TESIS%20PvTRAP%20%281%29.pdf.jpg
https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/229/10/2%20para%20subir%20TESIS%20PvTRAP.pdf.jpg
bitstream.checksum.fl_str_mv eda832ad7d0966a590cdae2e187f0b93
31ed078585bd63912246e74b206e01fb
4109089c103ac2baf9c240f3cdaa47df
2f9959eaf5b71fae44bbf9ec84150c7a
5799b9a1100af576e885f94f9f0be913
ecff46a018592760c68d00109f875f84
2a4bd999eeaacaba368a7d702a818e66
92ee271ee18193dd14895429a6dbb578
9a6e5f6d21357170a0d08c068c847052
cfd5ecc3941266a36b0cd9f69e7f4c69
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv MD5
MD5
MD5
MD5
MD5
MD5
MD5
MD5
MD5
MD5
repository.name.fl_str_mv Biblioteca Digital Unicolmayor
repository.mail.fl_str_mv repositorio@unicolmayor.edu.co
_version_ 1812210073095634944
spelling Estupiñán Torres, Sandra Mónica8d331ab61abbbcf10a2861cc4541caaaHernández Cardona, Angie Katherineae8f024a39d0c4458cd87d21b6d73703Trabajo de investigación2021-06-11T21:52:15Z2021-06-11T21:52:15Z2019-09https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/22960151El uso indiscriminado de antibióticos convencionales usados en el tratamiento de infecciones causadas por microorganismos ha generado aumento en la tasa de resistencia bacteriana, esta problemática es considerada como una amenaza creciente para la salud pública a nivel mundial1. La resistencia a los antibióticos (RA) se produce cuando las bacterias mutan en respuesta al uso inadecuado y/o innecesario de estos fármacos2. Dentro de este contexto, actualmente se buscan nuevas alternativas terapéuticas que mitiguen esta problemática. Entre estas opciones se encuentran los péptidos antimicrobianos (PAMs), los PAMs son importantes moléculas efectoras del sistema inmune innato, el cual es el principal mecanismo de defensa para la mayoría de los organismos vivos durante las etapas iniciales de infección bacteriana y han exhibido un amplio espectro de actividad antibacteriana que incluye bacterias Gram positivas como Gram negativas3. En la actualidad, hay más de 2000 secuencias peptídicas reportadas relacionadas a PAMs, son secuencias relativamente cortas, generalmente conformadas entre 10 a 50 aminoácidos3. Dentro de los PAMs, encontramos la Buforina II (BFII), péptido sintético derivado de la Buforina I (BFI), el cual se encuentra en el tejido estomacal del sapo asiático Bufo gargarizans. La BFII es un péptido de 21 aminoácidos, el cual ha exhibido mayor actividad antibacteriana que la BFI frente a cepas bacterias Gram positivas como Gram negativas4. En este trabajo se evaluó la actividad antibacteriana de 8 péptidos sintéticos lineales derivados del motivo mínimo antibacteriano de la BFII (32RLLR35), contra E. coli ATCC 25922, P. aeruginosa ATCC 27853 y S. aureus ATCC 25923. Nuestros resultados permitieron identificar secuencias peptídicas con amplio espectro de actividad cuyas concentraciones mínimas inhibitorias (CMIs) variaron en un rango de concentración de 38 μM a 259 μM. De manera general los péptidos palindrómicos presentaron mejor actividad frente a las cepas evaluadas. Los resultados de este trabajo sugieren que la incorporación de Cys y Ahx sobre secuencias palindrómicas derivadas de la BFII incrementan la actividad antibacteriana.1. Antecedentes 13 2. Marco referencial 19 2.1 Péptidos antimicrobianos 19 2.1.1 Generalidades 19 2.1.2 Alcance clínico 20 2.4 Resistencia antibacteriana 21 2.4.1 Antecedentes 21 2.4.2 Causas 22 2.4.3 Listado de cepas de mayor importancia actualmente 22 2.3 Buforina 23 2.4 Estructuras empleadas para potenciar la actividad antibacteriana de los PAMs 25 2.4.1 Estructuras con presentación multiple del motivo activo (Péptidos polivalentes) 25 2.4.2 Estructuras palindrómicas 25 2.4.3 Sustitución de residios de Arginina (Arg) por Lisina (Lys) 26 2.4.4 Incorporación de aminoácidos no naturales 27 2.5 Bacterias Gram negativas 27 2.5.1 Escherichia 27 2.5.1.1 Escherichia coli 28 2.5.1.1.1 Escherichia coli (Migula) Castellani y Chalmers (ATCC ® 43827 ™ 29 2.5.2Pseudomonas 29 2.5.2.1 Pseudomonas aeruginosa 30 2.5.2.1.1 Pseudomonas aeruginosa (Schroeter) Migula (ATCC® 27853™) 31 2.6 ...... Bacterias Gram positivas 31 2.6.1 Staphylococcus 31 2.6.1.1 Staphylococcus aureus 32 2.6.1.1 . Staphylococcus aureus subsp. aureus Rosenbach (ATCC ® 25923 ™) 33 3. Diseño metodologico 34 3.1 Constantes 34 3.1.1 Universo 34 3.1.2 Población 34 3.1.3 Muestra 34 3.2 Hipótesis 34 3.3 Variables 34 3.3.1 Dependiente 34 3.3.2 Independiente 34 3.4 Indicadores 35 3.5 Técnicas y procedimientos 35 3.5.1 Reactivos y materiales 33 3.5.1.1 Cepas bacterianas 34 3.5.1.2 Péptidos sintéticos evaluados derivados de la BFII 34 3.5.2 Procedimientos 35 3.5.2.1 Activación y almacenamiento de las cepas bacterianas ATCC 35 3.5.2.2 Obtención de péptidos de BFII 37 3.5.2.3 Concentración mínima inhibitoria 38 3.5.2.4 Concentración mínima bactericida 38 3.5.2.5 Actividad hemolítica 38 3.5.2.6 Curvas de letalidad-muerte 39 4. Resultados y discusión 40 4.1 Concentración mínima inhibitoria y concentración minima bactericida 40 4.2 Porcentaje de hemólisis de péptidos derivados de la BFII 43 4.3 Cinética de la actividad antibacteriana de los péptidos derivados de BFII 45 6. Conclusiones 47 7. Referencias bibliograficas 48 ANEXO A. Absorbancias de las CMI y CMB 54 ANEXO B. Porcentaje de hemólisis 60 ANEXO C. Curvas de letalidad 61PregradoBacteriólogo(a) y Laboratorista ClínicoTrabajo de investigación63p.application/pdfspaUniversidad Colegio Mayor de CundinamarcaFacultad de Ciencias de la SaludBogotá, Distrito CapitalBacteriología y Laboratorio ClínicoNo objeto asociado1. OMS | Importancia de la resistencia a los antimicrobianos para la salud pública. WHO [Internet]. 2016 [citado 26 de febrero de 2019]; Disponible en: https://www.who.int/drugresistance/AMR_Importance/es/2. Huertas Méndez NDJ, Vargas Casanova Y, Gómez Chimbi AK, Hernández E, Leal Castro AL, Melo Diaz JM, et al. Synthetic Peptides Derived from Bovine Lactoferricin Exhibit Antimicrobial Activity against E. coli ATCC 11775, S. maltophilia ATCC 13636 and S. enteritidis ATCC 13076. Molecules [Internet]. 2017;22(3):1-10. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/282874943. Mahlapuu M, Håkansson J, Ringstad L, Björn C. Antimicrobial Peptides: An Emerging Category of Therapeutic Agents. Front Cell Infect Microbiol [Internet]. 2016;6:1-12. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5186781/4. Uyterhoeven ET, Butler CH, Ko D, Elmore DE. Investigating the nucleic acid interactions and antimicrobial mechanism of buforin II. FEBS Lett [Internet]. 2008;582(12):1-6. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1016/j.bbamem.2008.10.0255. Alós J-I. Resistencia bacteriana a los antibióticos: una crisis global. Enferm Infecc Microbiol Clin [Internet]. 2014;33(10):1-9. Disponible en: http://www.elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas-microbiologia-clinica-28-articulo-resistencia-bacteriana-los-antibioticos-una-S0213005X140034136. OMS. Datos recientes revelan los altos niveles de resistencia a los antibióticos en todo el mundo. WHO [Internet]. 2018 [citado 25 de febrero de 2019]; Disponible en: https://www.who.int/mediacentre/news/releases/2018/antibiotic-resistance-found/es/7. OMS. La OMS publica la lista de las bacterias para las que se necesitan urgentemente nuevos antibióticos [Internet]. WHO. 2017 [citado 26 de febrero de 2019]. Disponible en: https://www.who.int/es/news-room/detail/27-02-2017-who-publishes-list-of-bacteria-for-which-new-antibiotics-are-urgently-needed8. SAMP. Síntesis y Aplicación de Moléculas Peptídicas [Internet]. Universidad nacional de Colombia. [citado 26 de febrero de 2019]. Disponible en: http://ciencias.bogota.unal.edu.co/gruposdeinvestigacion/sintesis-y-aplicacion-de-moleculas-peptidicas/informacion-general/?L=19. Sanchez ML. Mecanismos de acción de péptidos antimicrobianos y mecanismos de resistencia de los patógenos. Bioquímica y Patol Clínica [Internet]. 2016;1-6. Disponible en: https://www.researchgate.net/publication/292962665_Mecanismos_de_accion_de_peptidos_antimicrobianos_y_mecanismos_de_resistencia_de_los_patogenos10. Hyun J, Hyun B, Chang S. Buforins : Histone H2A-derived antimicrobial peptides from toad stomach. BBA - Biomembr [Internet]. 2009;1788(8):1-9. Disponible en:http://dx.doi.org/10.1016/j.bbamem.2008.10.02511. S.L DD. Palindromos: Secuencias Especiales del DNA. DNA Didact [Internet]. :1-6. Disponible en: http://www.dnadidactic.com/docs/Palindromos de ADN y Enzimas de restriccion_ DNA didactic.pdf12. Vargas Casanova Y, Rodríguez Guerra JA, Umaña Pérez YA, Leal Castro AL, Almanzar Reina G, García Castañeda JE, et al. Antibacterial Synthetic Peptides Derived from Bovine Lactoferricin Exhibit Cytotoxic Effect against MDA-MB-468 and MDA-MB-231 Breast Cancer Cell Lines. Molecules [Internet]. 2017;22(10):1-11. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/2896121513. Yang ST, Shin SY, Lee CW, Kim YC, Hahm KS, Kim J Il. Selective cytotoxicity following Arg-to-Lys substitution in tritrpticin adopting a unique amphipathic turn structure. FEBS Lett. 2003;540(1-3):229-33.14. Kim HS, Park CB, Kim MS, Kim SC. cDNA Cloning and Characterization of Buforin I , an Antimicrobial Peptide : A Cleavage Product of Histone H2A pathogenic microorganisms , are widely distributed in nature and often show marked inter- species diversity in structure and spectrum of activity. Biochem Biophys Res Commun [Internet]. 1996;387:1-7. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/895490815. Park CB, Kim HS, Kim SC. Mechanism of Action of the Antimicrobial Peptide Buforin II : Buforin II Kills Microorganisms by Penetrating the Cell Membrane and Inhibiting Cellular Functions. Biochem Biophys Res Commun [Internet]. 1998;257:1-7. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/951486416. Kobayashi S, Takeshima K, Park CB, Kim SC, Matsuzaki K. Interactions of the Novel Antimicrobial Peptide Buforin 2 with Lipid Bilayers : Proline as a Translocation Promoting Factor. Biochemistry [Internet]. 2000;39:1-6. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/1091327317. Park CB, Yi K, Matsuzaki K, Kim MS, Kim SC. Structure – activity analysis of buforin II , a histone H2A-derived antimicrobial peptide : The proline hinge is responsible for the cell-penetrating ability of buforin II. PNAS [Internet]. 2000;97(15):1-6. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/1089092318. Soo H, Bae C, Min J, Jang SA, Yup I, Sun M, et al. Mechanism of anticancer activity of buforin IIb , a histone H2A-derived peptide. ScienceDirect [Internet]. 2008;271:1-9. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/1861732319. Hao G, Shi Y, Tang Y, Le G. Peptides The membrane action mechanism of analogs of the antimicrobial peptide Buforin 2. ELSEVIER [Internet]. 2009;30:1-7. Disponible en: ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/1946728120. Donald E. Insights into Buforin II Membrane Translocation from Molecular Dynamics Simulations. NIH [Internet]. 2012;38(2):1-16. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23022591Cutrona KJ, Kaufman BA, Figueroa DM, Elmore DE. Role of arginine and lysine in the antimicrobial mechanism of histone-derived antimicrobial peptides. FEBS Lett[Internet]. 2015;589(24):3915-20. Disponible en: ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4713009/pdf/nihms-742563.pdf22. Agarwal S, Sharma G, Dang S, Gupta S. Antimicrobial Peptides as anti-Infectives against Staphylococcus epidermidis. Med pric Pr [Internet]. 2016;25:1-8. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5588407/23. Tonarelli G, Simonetta A. Péptidos antimicrobianos de organismos procariotas y eucariotas como agentes terapéuticos y conservantes de alimentos. Fabicib [Internet]. 2014;17:1-6. Disponible en: http://bibliotecavirtual.unl.edu.ar/publicaciones/index.php/FABICIB/article/view/431624. Hancock REW, Chapple DS. Peptide Antibiotics. Antimicrob Agents Chemother [Internet]. 1999;43(6):1-6. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/1034874525. Téllez GA CJ. Péptidos antimicrobianos. Infectio [Internet]. 2010;14(1):1-13. Disponible en: http://www.scielo.org.co/pdf/inf/v14n1/v14n1a07.pdf26. Fosgerau K, Hoffmann T. Peptide therapeutics: Current status and future directions. Drug Discov Today [Internet]. 2015;20(1):2-8. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1016/j.drudis.2014.10.00327. Ministerio de salud. Proceso De Investigación, Desarrollo Y Aprobación De Un Fármaco. MSDsalud [Internet]. 2016;1-9. Disponible en: https://www.msdsalud.es/recursos-de-salud/guias-para-pacientes/proceso-investigacion-desarrollo-aprobacion-farmaco.html28. Ventola CL. The Antibiotic Resistance Crisis. Pharm Ther [Internet]. 2015;40(4):1-7. Disponible en: https://www.jstage.jst.go.jp/article/electrochemistry/82/9/82_14-5-E2639/_pdf29. Pasteran F, Corso A, Monsalvo M, Frenkel J, Lazovski J. Resistencia a los antimicrobianos : causas , consecuencias y perspectivas en Argentina. Whonet-Argentina [Internet]. 2013;4:1-4. Disponible en: http://antimicrobianos.com.ar/ATB/wp-content/uploads/2015/06/Article1.pdf30. Barcelona I de salud global de. Informe: La batalla contra las resistencias [Internet]. ISGLOBAL. 2016 [citado 26 de febrero de 2019]. Disponible en: https://www.isglobal.org/informe-la-batalla-contra-las-resistencias31. Sánchez Merino JM, Guillán Maquieira C, Fuster Foz C, Madrid García FJ, Jiménez Rodríguez M, García Alonso J. Sensibilidad microbiana de escherichia coli en infecciones urinarias extrahospitalarias. Actas Urológicas Españolas [Internet]. 2003;27(10):3-7. Disponible en: http://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S021048060373014932. Gómez CA, Leal AL, Pérez M de J, Navarrete ML. Resistance mechanisms in Pseudomonas aeruginosa: understanding a dangerous enemy. Rev la Fac Med [Internet]. 2005;53(1):27-34. Disponible en: http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0120-33. Pérez N, Pavas N, Rodríguez EI. Resistencia de Staphylococcus aureus a los antibióticos en un hospital de la orinoquia colombiana. Infectio [Internet]. 2014;15(3):1-6. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1016/S0123-9392(10)70108-934. Medell M, Hart M, Batista ML. Sensibilidad antimicrobiana in vitro en aislamientos de Enterococcus faecalis y Enterococcus faecium obtenidos de pacientes hospitalizados. Biomédica [Internet]. 2013;34(0):1-8. Disponible en: https://www.revistabiomedica.org/index.php/biomedica/article/view/212235. López-Segura V, Muñoz-Camargo C, Groot H. El secreto antimicrobiano de las histonas. Apunt Cient uniandinos [Internet]. 2014;16:14-6. Disponible en: https://www.researchgate.net/publication/319315802_El_secreto_antimicrobiano_de_las_histonas35. López-Segura V, Muñoz-Camargo C, Groot H. El secreto antimicrobiano de las histonas. Apunt Cient uniandinos [Internet]. 2014;16:14-6. Disponible en: https://www.researchgate.net/publication/319315802_El_secreto_antimicrobiano_de_las_histonas37. Cecilia MG. El poder de la cisteína. Inst Bioquim Veg y Fotosint [Internet]. 2005;1:15-8. Disponible en: http://digital.csic.es/bitstream/10261/41022/1/Páginas de EVENTOS310014%5B1%5D.pdf38. Huertas N de J, Monroy ZJR, Medina RF, Castañeda JEG. Antimicrobial Activity of Truncated and Polyvalent Peptides Derived from the FKCRRQWQWRMKKGLA Sequence against Escherichia coli ATCC 25922 and Staphylococcus aureus ATCC 25923. Molecules [Internet]. 2017;22(6):1-11. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/2861326239. Jiang Z, Vasil AI, Vasil ML, Hodges RS. «Specificity determinants» improve therapeutic indices of two antimicrobial peptides piscidin 1 and dermaseptin S4 against the gram-negative pathogens Acinetobacter baumannii and Pseudomonas aeruginosa. Pharmaceuticals [Internet]. 2014;7(4):1-26. Disponible en: doi:10.3390/ph704036640. Castañeda HM. PÉPTIDOS QUIMÉRICOS DERIVADOS DE LA LACTOFERRICINA BOVINA Y LA BUFORINA: SÍNTESIS, CARACTERIZACIÓN Y EVALUACIÓN DE SU ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA. Tesis Maest. 2019;34.41. Introducción Escherichia. DePa [Internet]. :1-24. Disponible en: http://depa.fquim.unam.mx/bacteriologia/pdfs/ART%CDC-ECEH.pdf42. AGUILAR R, OLARTE J. Escherichia coli como causa de diarrea infantil. Rev Cubana Pediatr [Internet]. 2003 [citado 15 de agosto de 2019];22(6):334-33448. Disponible en: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0034-7531200300030001043. BETELGEUX. Escherichia Coli: características, patogenicidad y prevención (I) - 53 Referencias bibliográficas [Internet]. BETELGEUX. 2016 [citado 26 de febrero de 2019]. Disponible en: https://www.betelgeux.es/blog/escherichia-coli-caracteristicas-patogenicidad-y-prevencion-i/ . 2011;28(4):9-11.45. Pavia AT, Nichols CR, Green DP, Tauxe R V., Mottice S, Greene KD, et al. Hemolytic-uremic syndrome during an outbreak of Escherichia coli O157:H7 infections in institutions for mentally retarded persons: Clinical and epidemiologic observations. J Pediatr. 1990;116(4):544-51.46. ATCC. Escherichia coli (Migula) Castellani and Chalmers ATCC ® 25922 [Internet]. ATCC. 2017 [citado 26 de febrero de 2019]. Disponible en: https://www.atcc.org/products/all/25922.aspx#documentation47. INTRODUCCIÓN Pseudomonas. 2008;1-16. Disponible en: http://catarina.udlap.mx/u_dl_a/tales/documentos/lbc/guzman_perez_s/capitulo3.pdf48. INSeHT. Pseudomonas aeuroginosa. DATABio [Internet]. 2016;1:1-5. Disponible en: http://www.insht.es/RiesgosBiologicos/Contenidos/Fichas de agentes biologicos/Fichas/Pseudomonas aeruginosa 2017.pdf49. Ruiz-Martinez L. Pseudomonas aeruginosa : aportacion al conocimiento de su estructura y al de los mecanismos que contribuyen a su resistencia a los antimicrobianos. Univ Barcelona [Internet]. 2007;Tesis doct:12. Disponible en: https://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/2521/LRM_TESIS.pdf?sequence=1&isAllowed=y50. Casal M del M, Causse M, Rodríguez-López F, Casal M. Resistencia antimicrobiana en aislados clínicos de pseudomonas aeruginosa. Rev Esp Quimioter. 2012;25(1):37-41.51. ATCC. Pseudomonas aeruginosa (Schroeter) Migula ATCC ® 27853TM [Internet]. ATCC. 2017 [citado 26 de febrero de 2019]. Disponible en: https://www.atcc.org/products/all/27853.aspx#documentation52. Chans GR. Estafilococos. Temas Bacteriol y Virol para CEFA [Internet]. 2015;1-12. Disponible en: http://www.higiene.edu.uy/cefa/Libro2002/Cap 17.pdf53. Akanbi OE, Njom HA, Fri J, Otigbu AC, Clarke AM. Antimicrobial susceptibility of Staphylococcus aureus isolated from recreational waters and beach sand in Eastern Cape Province of South Africa. Int J Environ Res Public Health [Internet]. 2017;14(9):1-15. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/2886266954. Taylor TA, Unakal CG. Staphylococcus Aureus [Internet]. StatPearls. StatPearls Publishing; 2018 [citado 26 de febrero de 2019]. Disponible en: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/2872289855. Robinson FPA, Shalit M. Características generales del Staphylococcus aureus. Anti-Corrosion Methods Mater [Internet]. 2014;1(4):11-4. Disponible en: https://www.medigraphic.com/pdfs/patol/pt-2014/pt141e.pdf56. Camarena, J; Roberto R. INFECCIÓN POR Staphylococcus aureus RESISTENTE A METICILINA. Control Calid SEIMC [Internet]. 2000;1-5. Disponible en: https://seimc.org/contenidos/ccs/revisionestematicas/bacteriologia/sarm.pdf57. ATCC. Staphylococcus aureus subsp. aureus Rosenbach ATCC ® 25923TM [Internet]. ATCC. 2017 [citado 26 de febrero de 2019]. Disponible en: https://www.atcc.org/Products/All/25923.aspx#history58. Use I. Instructions for Use Content : Instructions for Use. Microbiologics [Internet]. 2017;1-7. Disponible en: https://v3.globalcube.net/clients/beldico/content/medias/images/producten/imp/quality_control/english_lyfo_disk__kwik-stik__kwik-stik_plus_instructions_for_use.pdf59. Rodríguez V, Pineda H, Ardila N, Insuasty D, Cárdenas K, Román J, et al. Efficient Fmoc Group Removal Using Diluted 4-Methylpiperidine: An Alternative for a Less-Polluting SPPS-Fmoc/tBu Protocol. Int J Pept Res Ther [Internet]. 2019;(0123456789):4-6. Disponible en: https://doi.org/10.1007/s10989-019-09865-960. CLSI. Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That Grow Aerobically ; Approved Standard — Ninth Edition. CLSI document M07-A9. [Internet]. Vol. 32, Clinical and Laboratory Standars Institute. 2012. 18 p. Disponible en: https://www.researchgate.net/file.PostFileLoader.html?id=564ceedf5e9d97daf08b45a2&assetKey=AS%3A297254750572544%40144788246305561. Arthur L. Barry, Ph.D. William A. Craig, M.D. Harriette Nadler, Ph.D. L. Barth Reller MDCCS. M26-A: Methods for Determining Bactericidal Activity of Antimicrobial Agents; Approved Guideline. Clin Lab Stand Inst [Internet]. 1999;19(1):56-78. Disponible en: https://clsi.org/media/1462/m26a_sample.pdf62. Arango-Rodríguez ML, Vernot J-P, Solarte VA, García JE, Rivera ZJ, Rosas JE. A Tetrameric Peptide Derived from Bovine Lactoferricin Exhibits Specific Cytotoxic Effects against Oral Squamous-Cell Carcinoma Cell Lines. Biomed Res Int [Internet]. 2015;2015:1-13. Disponible en: //dx.doi.org/10.1155/2015/63017963. Beristain-Bauza S., Palou E, Lopez-Malo A. Bacteriocinas : antimicrobianos naturales y su aplicación en los alimentos. Temas Sel Ing Aliment [Internet]. 2012;2:64-78. Disponible en: https://www.usfx.bo/nueva/vicerrectorado/citas/TECNOLOGICAS_20/Ingenieria de Alimentos/Beristain-Bauza-et-al-2012.pdf64. Pírez M. Morfologia Y Estructura Bacteriana. 2002;1-10. Disponible en: http://www.higiene.edu.uy/cefa/Libro2002/Cap 9.pdf65. Gloria Soberón. Pseudomonas aeruginosa. Inst Biotecnol [Internet]. :14. Disponible en: http://www.biblioweb.tic.unam.mx/libros/microbios/Cap3/66. Pane K, Durante L, Crescenzi O, Cafaro V, Pizzo E, Varcamonti M, et al. Antimicrobial Potency of Cationic Antimicrobial Peptides can be Predicted from their Amino Acid Composition: Application to the Detection of «Cryptic» Antimicrobial Peptides.Derechos Reservados -Universidad Colegio Myor de Cundinamarca ,2019https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/info:eu-repo/semantics/openAccessAtribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0)http://purl.org/coar/access_right/c_abf2Evaluación de la actividad antibacteriana de péptidos sintéticos análogos de la buforina II contra escherichia coli, pseudomonas aeruginosa y staphylococcus aureusTrabajo de grado - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fhttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85Textinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesishttps://purl.org/redcol/resource_type/TPinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionBogotá D.C.Microbiología médicaVirología médicaBacteriasBFIIPAMsMotivo mínimoActividad antibacterianaPalíndromoCMICMBORIGINALSEMINARIO BUFORINA.pdfSEMINARIO BUFORINA.pdfapplication/pdf5371042https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/229/1/SEMINARIO%20BUFORINA.pdfeda832ad7d0966a590cdae2e187f0b93MD51open access1 para subir TESIS PvTRAP (1).pdf1 para subir TESIS PvTRAP (1).pdfapplication/pdf1626561https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/229/2/1%20para%20subir%20TESIS%20PvTRAP%20%281%29.pdf31ed078585bd63912246e74b206e01fbMD52open access2 para subir TESIS PvTRAP.pdf2 para subir TESIS PvTRAP.pdfapplication/pdf322562https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/229/3/2%20para%20subir%20TESIS%20PvTRAP.pdf4109089c103ac2baf9c240f3cdaa47dfMD53metadata only accessLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-814828https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/229/4/license.txt2f9959eaf5b71fae44bbf9ec84150c7aMD54open accessTEXTSEMINARIO BUFORINA.pdf.txtSEMINARIO BUFORINA.pdf.txtExtracted texttext/plain17262https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/229/5/SEMINARIO%20BUFORINA.pdf.txt5799b9a1100af576e885f94f9f0be913MD55open access1 para subir TESIS PvTRAP (1).pdf.txt1 para subir TESIS PvTRAP (1).pdf.txtExtracted texttext/plain125165https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/229/7/1%20para%20subir%20TESIS%20PvTRAP%20%281%29.pdf.txtecff46a018592760c68d00109f875f84MD57open access2 para subir TESIS PvTRAP.pdf.txt2 para subir TESIS PvTRAP.pdf.txtExtracted texttext/plain36https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/229/9/2%20para%20subir%20TESIS%20PvTRAP.pdf.txt2a4bd999eeaacaba368a7d702a818e66MD59metadata only accessTHUMBNAILSEMINARIO BUFORINA.pdf.jpgSEMINARIO BUFORINA.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg8932https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/229/6/SEMINARIO%20BUFORINA.pdf.jpg92ee271ee18193dd14895429a6dbb578MD56open access1 para subir TESIS PvTRAP (1).pdf.jpg1 para subir TESIS PvTRAP (1).pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg6164https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/229/8/1%20para%20subir%20TESIS%20PvTRAP%20%281%29.pdf.jpg9a6e5f6d21357170a0d08c068c847052MD58open access2 para subir TESIS PvTRAP.pdf.jpg2 para subir TESIS PvTRAP.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg5826https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/229/10/2%20para%20subir%20TESIS%20PvTRAP.pdf.jpgcfd5ecc3941266a36b0cd9f69e7f4c69MD510metadata only accessunicolmayor/229oai:repositorio.unicolmayor.edu.co:unicolmayor/2292021-06-12 03:00:17.612An error occurred on the license name.|||https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/open accessBiblioteca Digital Unicolmayorrepositorio@unicolmayor.edu.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

Publicaciones similares