Producción de anticuerpos monoclonales para la identificación de células presentadoras de antígeno de monos aotus spp
La Fundación Instituto de Inmunología de Colombia – FIDIC ha diseñado y producido candidatos a vacuna contra la malaria químicamente sintetizados, que han llegado a ser probados en monos Aotus vociferans; La COLFAVAC24 fue la última combinación de péptidos vacúnales que se probó, mostrando una prote...
- Autores:
-
Cruz Castro, Julián Mauricio
Díaz Barrera, María José
- Tipo de recurso:
- Trabajo de grado de pregrado
- Fecha de publicación:
- 2019
- Institución:
- Colegio Mayor de Cundinamarca
- Repositorio:
- Repositorio Colegio Mayor de Cundinamarca
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- Acceso en línea:
- https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/310
- Palabra clave:
- Antígenos
Bacteriología
Tolerancia inmunológica
Sistema inmunitario
Agentes infecciosos
Respuesta inmune
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- Derechos Reservados -Universidad Colegio Myor de Cundinamarca ,2019
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La Fundación Instituto de Inmunología de Colombia – FIDIC ha diseñado y producido candidatos a vacuna contra la malaria químicamente sintetizados, que han llegado a ser probados en monos Aotus vociferans; La COLFAVAC24 fue la última combinación de péptidos vacúnales que se probó, mostrando una protección del 81,7% en los primates inmunizados y posteriormente retados con la cepa FVO de Plasmodium falciparum. Sin embargo, con el objetivo de lograr un índice de protección mayor, se requiere aún más entendimiento sobre la activación de Linfocitos T por las células presentadoras de antígeno; ya que dependiendo de la subpoblación que fagocita el péptido sintético, la respuesta generada variará; por ejemplo, las células dendríticas de tipo mieloide tienen la capacidad de secretar citoquinas que logran potenciar la activación de células T ayudadoras, bien sea de tipo 1 y tipo 2, mientras que las células dendríticas foliculares y plasmocitoides presentan el péptido a las células B para diferenciarlas en células plasmáticas productoras de anticuerpos. Se establece entonces la necesidad de entender los mecanismos inmunológicos que ocurren en la presentación y procesamiento de antígeno a cargo de las células especializadas presentadoras de antígeno, especialmente las células dendríticas para posteriormente lograr caracterizar la activación de las células T vírgenes, hasta llegar a células T efectoras y de memoria de larga vida. |
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1. Mendis KN, David PH, Carter R. Human immune responses against sexual stages of malaria parasites: Considerations for malaria vaccines. Int J Parasitol. 1990;20(4):497–502. 2. Piper KP, Hayward RE, Cox MJ, Day KP. Malaria transmission and naturally acquired immunity to PfEMP-1. Infect Immun. 1999;67(12):6369–74. 3. Taylor-robinson AW. Vaccination against malaria: targets, strategies and potentiation of immunity to blood stage parasites. Front Biosci. 2000;(2):16–29. 4. Vega Robledo GB. La respuesta Inmune. Medigraphic [Internet]. 2008;51(3):128–9. Available from: http://www.medigraphic.com/pdfs/facmed/un-2008/un083j.pdf 5. Castillo LV. Producción de aticuerpos monoclonales. Univ Alcala. 2015;1–12. 6. Amorim KNS, Chagas DCG, Sulczewski FB, Boscardin SB. Dendritic Cells and Their Multiple Roles during Malaria Infection. J Immunol Res. 2016;2016:1–11. 7. Machado, N.P., Téllez, G.A. , Castaño J. Anticuerpos monoclonales: desarrollo físico y perspectivas terapéuticas Monoclonal. Asoc Colomb infectología. 2006;10(3):186–97. 8. de Almeida R, Nakamura CN, de Lima Fontes M, Deffune E, Felisbino SL, Kaneno R, et al. Enhanced immunization techniques to obtain highly specific monoclonal antibodies. MAbs. 2018;10(1):46–54. 9. Karpas A, Dremucheva A, Czepulkowski BH. A human myeloma cell line suitable for the generation of human monoclonal antibodies. Proc Natl Acad Sci. 2001;98(4):1799–804. 10. Lagrán ZM De, Díaz-pérez SPJL. Adalimumab : la molécula y el proceso de obtención. 2008;3–9. 11. Naranjo M. Respuesta Alogénica Inducida Por Células Dendriticas Plasmocitoides [Internet]. 2009. Available from: http://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/3834/mmng1de1.pdf?sequence=1 12. Rojas W, Anaya JM, Gomez LM, Aristizabal B, Cano E. Inmunología de Rojas. 2017. 106 p. 13. Matzinger P. Tolerance, danger, and the extended family. Annu Rev Immunol. 1994;12:991–104 14. Gately MK, Renzetti LM, Magram J, Stern AS, Adorini L, Gubler U, et al. The interleukin-12/interleukin-12-receptor system: Role in Normal and Pathologic Immune Responses. Annu Rev Immunol. 1998;16(1):495–521. 15. Nakanishi K, Yoshimoto T, Okamura H, Tsutsui H. Interleukin -18 regulates both Th1 and Th 2 responses. Annu Rev Immunol. 2001;19:14–6. 16. Makala LHC, Nishikawa Y, Suzuki N, Nagasawa H. Immunology: Antigen-Presenting Cells in the Gut. J Biomed Sci. 2004;11(2):130–41. 17. Rodríguez-Gómez, I. Gómez-Laguna, J. Amarilla, Sp. García-Nicolás O, Ramis, G. Pallarés, F.Carrasco L. Las Células Presentadoras De Antígeno Y Su Papel En El Síndrome Reproductivo Y Respiratorio Porcino. Anales. 2012;25(1):191–202. 18. Monserrat Sanz J, Martín M, Reyes E, Prieto Martín A. Células presentadoras de antígeno. Med [Internet]. 2013;11(28):1720–7. Available from: http://dx.doi.org/10.1016/S0304-5412(13)70548-1 19. G. Gallastegui, B. Bernárdez, A. Regueira, C. Dávila, B. Leboreiro. Farmacia Hospitalaria Inmunología Anticuerpos [Internet]. 2017. 1077–1099 p. Available from: https://www.sefh.es/bibliotecavirtual/fhtomo2/CAP11.pdf 20. Stagg AJ, Knight SC. Antigen-presenting Cells. Encycl life Sci. 2001;1–8. 21. Geissmann F, Manz MG, Jung S, Sieweke MH, Ley K. Development of monocytes, macrophages and dendritic cells. Science (80- ). 2010;327(5966):656–61. 22. Chen X, Jensen PE. The role of B lymphocytes as antigen-presenting cells. Arch Immunol Ther Exp (Warsz). 2008;56(2):77–83. 23. Rodríguez-Pinto D. B cells as antigen presenting cells. Cell Immunol. 2005;238(2):67–75. 24. Berkowska MA, Driessen GJA, Bikos V, Grosserichter-wagener C, Stamatopoulos K, Cerutti A, et al. Human memory B cells originate from three distinct germinal center-dependent and -independent maturation pathways. blood J. 2011;118(8):2150–9. 25. Murphy K, Travers P, Walport M. Inmunobiología de Janeway. 2009. 334–340 p. 26. Itano AA, McSorley SJ, Reinhardt RL, Ehst BD, Ingulli E, Rudensky AY, et al. Distinct dendritic cell populations sequentially present antigen to CD4 T cells and stimulate different aspects of cell-mediated immunity. Immunity. 2003;19(1):47–57. 27. Romani BN, Gruner S, Brang D, Eckhart K, Lenz A, Trockenbacher B, et al. Proliferating dendritic cell progenitors in human blood. J Exp Med. 1994;180:83–93. 28. Siegal FP, Kadowaki N, Shodell M, Fitzgerald-Bocarsly PA, Shah K, Ho S, et al. The nature of the principal Type 1 interferon-producing cells in human blood. Science (80- ). 1999;284(5421):1835–7. 29. Santini SM, Lapenta C, Logozzi M, Parlato S, Spada M, Di Pucchio T, et al. Type I Interferon as a Powerful Adjuvant for Monocyte-Derived Dendritic Cell Development and Activity in Vitro and in Hu-Pbl-Scid Mice. J Exp Med. 2000;191(10):1777–88. 30. Grouard G, Rissoan MC, Filgueira L, Durand I, Banchereau J, Liu YJ. The enigmatic plasmacytoid T cells develop into dendritic cells with interleukin (IL)-3 and CD40-ligand. J Exp Med [Internet]. 1997;185(6):1101–11. Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/9091583%0Ahttp://www.pubmedcentral.nih.gov/articlerender.fcgi?artid=PMC2196227 31. Dzionek A, Sohma Y, Nagafune J, Cella M, Colonna M, Facchetti F, et al. BDCA-2, a novel plasmacytoid dendritic cell-specific type II C-type lectin, mediates antigen capture and is a potent inhibitor of interferon alpha/beta induction. J Exp Med [Internet]. 2001;194(12):1823–34. Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11748283%0Ahttp://www.pubmedcentral.nih.gov/articlerender.fcgi?artid=PMC2193584 32. Figdor C, Van Kooyk Y, Adema G. C-type lectin receptors on dendritics cells and langerhans cells. Immunol Ski Basic Clin Sci Ski Immune Responses. 2002;2(February):77–84. 33. Rosales C, Uribe-Querol E. Phagocytosis: A Fundamental Process in Immunity. Biomed Res Int. 2017;2017:18–36. 34. Trombetta E soul, Mellman L. Cell biology of antigen processing in vitro and in vivo. Annu Rev Immunol. 2005;23:975–1028. 35. Banchereau J, Briere F, Caux C, Davoust J, Lebecque S, Liu Y, et al. Immunobiology of Dendritic Cells. Annu Rev Immunol. 2000;18(June 2014):767–811. 36. Guermonprez P, Valladeau J, Zitvogel L, Théry C, Amigorena S. Antigen presentation and T cell stimulation by dendritic cells. Annu Rev Immunol. 2002;20(1):621–67. 37. Vernot JP. Mecanismos de procesamiento y presentación de antígeno en el sistema inmune. Biomed. 1990;10:54–8. 38. Rock KL, Shen L. Cross-presentation: Underlying mechanisms and role in immune surveillance. Immunol Rev. 2005;207:166–83. 39. Inaba BK, Turley S, Iyoda T, Yamaide F, Shimoyama S, Reis C, et al. The Formation of Immunogenic Major Histocompatibility Complex Class II – Peptide Ligands in Lysosomal Compartments of Dendritic Cells Is Regulated by Inflammatory Stimuli. J Exp Med. 2000;191(6):927–36. 40. Delamarre L, Pack M, Chang H. Differential Lysosomal Proteolysis in Antigen-Presenting Cells Determines Antigen Fate. Science (80- ). 2014;1630(2005):1630–4. 41. Ã FRC, Heath WR. The role of dendritic cell subsets in immunity to viruses. Curr Opin Immunol. 2003;15:416–20. 42. Barral DC, Brenner MB. CD1 antigen presentation: how it works. Nat Rev Immunol. 2007;7:929–41. 43. 43. Porcelli SA, Modlin RL. The CD1 system : Antigen-Presenting Molecules for T Cell Recognition of Lipids and Glycolipids. Annu Rev Immunol. 1999;17:297–329. 44. Wel NN Van Der, Sugita M, Fluitsma DM, Cao X, Schreibelt G, Brenner MB, et al. CD1 and Major Histocompatibility Complex II Molecules Follow a Different Course during Dendritic Cell Maturation. Mol Biol Cell. 2003;14(August):3378–88. 45. Umaña J, Ramirez J, Espinal C, Sabogal E. Primates no humanos para investigación y mantenimiento de Aotus lemurinus griseimembra. Bol sanit panam. 1984;97(l):44–53. 46. Gómez A. De monos y humanos : la búsqueda de una estrategia de vacunación antipalúdica basada en péptidos sintéticos. Infect - Asoc Colomb infectología. 2011;15(2):75–83. 47. Liliana B, Bonelo A, Are M. Aotus monkeys : their great value for anti-malaria vaccines and drug testing. Int J Parasitol. 2002;32:1625–35. 48. Geskin LJ. Monoclonal Antibodies. Dermatol Clin [Internet]. 2015;33(4):777–86. Available from: http://dx.doi.org/10.1016/j.det.2015.05.015 49. Ryman JT, Meibohm B. Pharmacokinetics of Monoclonal Antibodies. Pharmacol. 2017;6(June):576–88. 50. Smith SA, Crowe JE. use of Human hybridoma technology to isolate human monoclonal antibodies. Microbiol Spectr. 2015;1–12. 51. Alicia C, Martínez C De. Ética en investigación con animales: una actitud responsable y respetuosa del investigador con rigor y calidad científica. Rev Latinoam Bioética. 2008; 52. Rodtriguez E. ética de la investigación en modelos animales de enfermedades humanas. Acta Bioeth. 2007;13(1):25–40. 53. Colombia C de. Ley 84 de 1989 [Internet]. 1989. Available from: https://www.alcaldiabogota.gov.co/sisjur/normas/Norma1.jsp?i=8242 54. Ministerio S. Resolución 8430 de 1993 [Internet]. 1993. Available from: https://www.minsalud.gov.co/sites/rid/Lists/BibliotecaDigital/RIDE/DE/DIJ/RESOLUCION-8430-DE-1993.PDF 55. Leary S, Underwood W, Lilly E, Anthony R, Cartner S, Corey D, et al. AVMA Guidelines for the Euthanasia of Animals : 2013 Edition. 2013. 56. UDCA U de ciencias ambientales y aplicadas-. Acuerdo 285 Función Sustantiva de la Investigación e Innovación. 2008. 57. Houghten RA. General method for the rapid solid-phase synthesis of large numbers of peptides: specificity of antigen-antibody interaction at the level of individual amino acids. Proc Natl Acad Sci U S A. 1985;82(15):5131–5. 58. Roccatano D, Colombo G, Fioroni M, Mark AE. Mechanism by which 2,2,2-trifluoroethanol watermixtures stabilize secondary-structure formation in peptides : A molecular dynamics study. Proc Natl Acad Sci U S A. 2002;99(19):12179–84. 59. Rivero IA, González T. Síntesis en paralelo de decapéptidos en fase sólida y sus afinidades a cationes de interés biológico. Rev Soc Quim Mex. 2004;48:310–4. 60. Cubibes R. Producción de anticuerpos monoclonales que reconozcan proteinas de membrana en celulas de memoria en Aotus spp. 2019. 61. Dillman BRO, Shawler DL, Dillman JB, Royston I. Lymphoma With T101 Monoclonal Antibody. Otago Univ. 2019; 62. Amin-blanco N, Reyes-lópez F, Camacho-casanova F, Otero-alfaro O, Cuello-pérez M, Núñez-martínez D, et al. Obtención de un anticuerpo monoclonal murino que reconoce al polisacárido capsular Vi de Salmonella Typhi. Vaccimonitor. 2015;24(2):57–63 63. Barnstable CJ, Bodmer WF, Brown G. Production of Monoclonal Antibodies to Group A Erythrocytes , HLA and Other Human Cell Surface Tools for Genetic Analysis. Cell Host Microbe. 1978;14(May):9–20. 64. Guerrero Y, Villarraga J. Elabración de un anticuerpo monoclonal contra Leptospira interrogans serovar pomono. Univ la Salle. 2010; 65. Vanasco NB, Lottersberger J. Development and validation of an ELISA for the detection of leptospire-specific antibodies in rodents. Vet Microbiol. 2001;82:321–30. 66. Dreyer AM, Beauchamp J, Matile H, Pluschke G. An efficient system to generate monoclonal antibodies against membrane-associated proteins by immunisation with antigen-expressing mammalian cells. BMC Biotechnol. 2010;10. 67. Taylor P, Zhan W, Wang Y, Fryer JL, Okubo K, Fukuda H. Production of Monoclonal Antibodies ( MAbs ) against White Spot Syndrome Virus ( WSSV ). J Aquat Anim Health. 2015;8–18. 68. Goding J. Monoclonales antobodies: principles and practice. 1993. 300–367 p. 69. Sugasawara RJ, Cahoon BE, Karu AE. The Influence of Murine Macrophage-Conditioned Medium on Cloning Efficiency , Antibody Synthesis , and Growth Rate of Hybridomas. J Inmunol methods. 1985;79:263–75. 70. Lesmes LP, Gallego GM, Carreño LF, Lozano JM. Actividad funcional de anticuerpos inducidos por péptido-miméticos derivados del antígeno MSP-2 del Plasmodium , como potenciales agentes inmunoterapéuticos en malaria causada por Plasmodium yoelii y Plasmodium berghei en ratones BALB / c. Rev Colomb ciencias, química y Farm. 2011;40(1):67–91. |
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Díaz Arévalo, Diana4b9a1ebb1633a8c2defe6148569778fcHernández Rojas, Edith Del Carmenbca0adf32f76bf23e6eef2dd4eaa979cCruz Castro, Julián Mauricio3dd3f44a6ca00c7d307c1df89b722a5fDíaz Barrera, María Joséee52bf89ad2b15bd243544d1c4b32df8Universidad Colegio Mayor de CundinamarcaTrabajo de grado2021-06-30T20:57:12Z2021-06-30T20:57:12Z2019-10https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/31060188La Fundación Instituto de Inmunología de Colombia – FIDIC ha diseñado y producido candidatos a vacuna contra la malaria químicamente sintetizados, que han llegado a ser probados en monos Aotus vociferans; La COLFAVAC24 fue la última combinación de péptidos vacúnales que se probó, mostrando una protección del 81,7% en los primates inmunizados y posteriormente retados con la cepa FVO de Plasmodium falciparum. Sin embargo, con el objetivo de lograr un índice de protección mayor, se requiere aún más entendimiento sobre la activación de Linfocitos T por las células presentadoras de antígeno; ya que dependiendo de la subpoblación que fagocita el péptido sintético, la respuesta generada variará; por ejemplo, las células dendríticas de tipo mieloide tienen la capacidad de secretar citoquinas que logran potenciar la activación de células T ayudadoras, bien sea de tipo 1 y tipo 2, mientras que las células dendríticas foliculares y plasmocitoides presentan el péptido a las células B para diferenciarlas en células plasmáticas productoras de anticuerpos. Se establece entonces la necesidad de entender los mecanismos inmunológicos que ocurren en la presentación y procesamiento de antígeno a cargo de las células especializadas presentadoras de antígeno, especialmente las células dendríticas para posteriormente lograr caracterizar la activación de las células T vírgenes, hasta llegar a células T efectoras y de memoria de larga vida.1. Introducción 10 2. Objetivos 12 2.1 General 12 2.2 Específicos 12 3. Antecedentes 13 4. Marco teórico 19 4.1 Sistema Inmunitario y respuesta inmune 19 4.2 Células presentadoras de antígeno 21 4.2.1 Tipos de células presentadoras de antígeno 23 4.2.1.1 Monocito 23 4.2.1.2 Células B 24 4.2.1.3 Células dendríticas (DCs) 25 4.2.1.3.1 Células dendríticas convencionales (cDCs) 27 4.2.1.3.2 Células dendríticas plasmocitoides (pDCs) 28 4.3 Captura y procesamiento del antígeno 29 4.3.1 Captura del antígeno 29 4.3.2 Procesamiento del antígeno 30 4.3.2.1 Presentación a través de la vía clásica 31 4.3.2.2 Presentación a través de la vía no clásica (familia CD1) 32 4.4 Aotus como modelo animal 32 4.5 Producción de anticuerpos monoclonales 34 4.6 Normatividad y condiciones éticas en murinos 36 4.6.1 Estamentos normativos y éticos 38 5. Diseño metodológico 38 5.1 Universo, población y muestra 38 5.2 Técnicas y procedimientos 39 5.2.1 Predicción in silico de secuencias peptídicas 40 5.2.2 Síntesis de las secuencias peptídicas 41 5.2.3 Protocolo de Inmunización de ratones 42 5.2.4 Obtención de los esplenocitos 43 5.2.5 Valoración de la inmunogenicidad por ELISA 44 5.2.6 Producción del hibridoma 45 5.2.7 Obtención de células dendríticas 46 5.2.8 Inmunofluorescencia indirecta 47 6. Resultados 49 6.1 Predicción “in silico” 49 6. 2 Evaluación de la inmunogenicidad de los ratones 55 6.3 Fusión celular 57 6.4 Evaluación de inmunogenicidad de los clonos 58 6.5 Cultivo de células dendríticas 60 6.6 Evaluación de la afinidad de los clonos frente a las células 62 7. Discusión 67 8. Conclusiones 73 9. Referencias 74 10. Anexos 81PregradoBacteriólogo(a) y Laboratorista ClínicoTrabajo de grado81p.application/pdfspaUniversidad Colegio Mayor de CundinamarcaFacultad de Ciencias de la SaludBogotá, Distrito CapitalBacteriología y Laboratorio ClínicoNo objeto asociado1. Mendis KN, David PH, Carter R. Human immune responses against sexual stages of malaria parasites: Considerations for malaria vaccines. Int J Parasitol. 1990;20(4):497–502.2. Piper KP, Hayward RE, Cox MJ, Day KP. Malaria transmission and naturally acquired immunity to PfEMP-1. Infect Immun. 1999;67(12):6369–74.3. Taylor-robinson AW. Vaccination against malaria: targets, strategies and potentiation of immunity to blood stage parasites. Front Biosci. 2000;(2):16–29.4. Vega Robledo GB. La respuesta Inmune. Medigraphic [Internet]. 2008;51(3):128–9. Available from: http://www.medigraphic.com/pdfs/facmed/un-2008/un083j.pdf5. Castillo LV. Producción de aticuerpos monoclonales. Univ Alcala. 2015;1–12.6. Amorim KNS, Chagas DCG, Sulczewski FB, Boscardin SB. Dendritic Cells and Their Multiple Roles during Malaria Infection. J Immunol Res. 2016;2016:1–11.7. Machado, N.P., Téllez, G.A. , Castaño J. Anticuerpos monoclonales: desarrollo físico y perspectivas terapéuticas Monoclonal. Asoc Colomb infectología. 2006;10(3):186–97.8. de Almeida R, Nakamura CN, de Lima Fontes M, Deffune E, Felisbino SL, Kaneno R, et al. Enhanced immunization techniques to obtain highly specific monoclonal antibodies. MAbs. 2018;10(1):46–54.9. Karpas A, Dremucheva A, Czepulkowski BH. A human myeloma cell line suitable for the generation of human monoclonal antibodies. Proc Natl Acad Sci. 2001;98(4):1799–804.10. Lagrán ZM De, Díaz-pérez SPJL. Adalimumab : la molécula y el proceso de obtención. 2008;3–9.11. Naranjo M. Respuesta Alogénica Inducida Por Células Dendriticas Plasmocitoides [Internet]. 2009. Available from: http://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/3834/mmng1de1.pdf?sequence=112. Rojas W, Anaya JM, Gomez LM, Aristizabal B, Cano E. Inmunología de Rojas. 2017. 106 p.13. Matzinger P. Tolerance, danger, and the extended family. Annu Rev Immunol. 1994;12:991–10414. Gately MK, Renzetti LM, Magram J, Stern AS, Adorini L, Gubler U, et al. The interleukin-12/interleukin-12-receptor system: Role in Normal and Pathologic Immune Responses. Annu Rev Immunol. 1998;16(1):495–521.15. Nakanishi K, Yoshimoto T, Okamura H, Tsutsui H. Interleukin -18 regulates both Th1 and Th 2 responses. Annu Rev Immunol. 2001;19:14–6.16. Makala LHC, Nishikawa Y, Suzuki N, Nagasawa H. Immunology: Antigen-Presenting Cells in the Gut. J Biomed Sci. 2004;11(2):130–41.17. Rodríguez-Gómez, I. Gómez-Laguna, J. Amarilla, Sp. García-Nicolás O, Ramis, G. Pallarés, F.Carrasco L. Las Células Presentadoras De Antígeno Y Su Papel En El Síndrome Reproductivo Y Respiratorio Porcino. Anales. 2012;25(1):191–202.18. Monserrat Sanz J, Martín M, Reyes E, Prieto Martín A. Células presentadoras de antígeno. Med [Internet]. 2013;11(28):1720–7. Available from: http://dx.doi.org/10.1016/S0304-5412(13)70548-119. G. Gallastegui, B. Bernárdez, A. Regueira, C. Dávila, B. Leboreiro. Farmacia Hospitalaria Inmunología Anticuerpos [Internet]. 2017. 1077–1099 p. Available from: https://www.sefh.es/bibliotecavirtual/fhtomo2/CAP11.pdf20. Stagg AJ, Knight SC. Antigen-presenting Cells. Encycl life Sci. 2001;1–8.21. Geissmann F, Manz MG, Jung S, Sieweke MH, Ley K. Development of monocytes, macrophages and dendritic cells. Science (80- ). 2010;327(5966):656–61.22. Chen X, Jensen PE. The role of B lymphocytes as antigen-presenting cells. Arch Immunol Ther Exp (Warsz). 2008;56(2):77–83.23. Rodríguez-Pinto D. B cells as antigen presenting cells. Cell Immunol. 2005;238(2):67–75.24. Berkowska MA, Driessen GJA, Bikos V, Grosserichter-wagener C, Stamatopoulos K, Cerutti A, et al. Human memory B cells originate from three distinct germinal center-dependent and -independent maturation pathways. blood J. 2011;118(8):2150–9.25. Murphy K, Travers P, Walport M. Inmunobiología de Janeway. 2009. 334–340 p.26. Itano AA, McSorley SJ, Reinhardt RL, Ehst BD, Ingulli E, Rudensky AY, et al. Distinct dendritic cell populations sequentially present antigen to CD4 T cells and stimulate different aspects of cell-mediated immunity. Immunity. 2003;19(1):47–57.27. Romani BN, Gruner S, Brang D, Eckhart K, Lenz A, Trockenbacher B, et al. Proliferating dendritic cell progenitors in human blood. J Exp Med. 1994;180:83–93.28. Siegal FP, Kadowaki N, Shodell M, Fitzgerald-Bocarsly PA, Shah K, Ho S, et al. The nature of the principal Type 1 interferon-producing cells in human blood. Science (80- ). 1999;284(5421):1835–7.29. Santini SM, Lapenta C, Logozzi M, Parlato S, Spada M, Di Pucchio T, et al. Type I Interferon as a Powerful Adjuvant for Monocyte-Derived Dendritic Cell Development and Activity in Vitro and in Hu-Pbl-Scid Mice. J Exp Med. 2000;191(10):1777–88.30. Grouard G, Rissoan MC, Filgueira L, Durand I, Banchereau J, Liu YJ. The enigmatic plasmacytoid T cells develop into dendritic cells with interleukin (IL)-3 and CD40-ligand. J Exp Med [Internet]. 1997;185(6):1101–11. Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/9091583%0Ahttp://www.pubmedcentral.nih.gov/articlerender.fcgi?artid=PMC219622731. Dzionek A, Sohma Y, Nagafune J, Cella M, Colonna M, Facchetti F, et al. BDCA-2, a novel plasmacytoid dendritic cell-specific type II C-type lectin, mediates antigen capture and is a potent inhibitor of interferon alpha/beta induction. J Exp Med [Internet]. 2001;194(12):1823–34. Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11748283%0Ahttp://www.pubmedcentral.nih.gov/articlerender.fcgi?artid=PMC219358432. Figdor C, Van Kooyk Y, Adema G. C-type lectin receptors on dendritics cells and langerhans cells. Immunol Ski Basic Clin Sci Ski Immune Responses. 2002;2(February):77–84.33. Rosales C, Uribe-Querol E. Phagocytosis: A Fundamental Process in Immunity. Biomed Res Int. 2017;2017:18–36.34. Trombetta E soul, Mellman L. Cell biology of antigen processing in vitro and in vivo. Annu Rev Immunol. 2005;23:975–1028.35. Banchereau J, Briere F, Caux C, Davoust J, Lebecque S, Liu Y, et al. Immunobiology of Dendritic Cells. Annu Rev Immunol. 2000;18(June 2014):767–811.36. Guermonprez P, Valladeau J, Zitvogel L, Théry C, Amigorena S. Antigen presentation and T cell stimulation by dendritic cells. Annu Rev Immunol. 2002;20(1):621–67.37. Vernot JP. Mecanismos de procesamiento y presentación de antígeno en el sistema inmune. Biomed. 1990;10:54–8.38. Rock KL, Shen L. Cross-presentation: Underlying mechanisms and role in immune surveillance. Immunol Rev. 2005;207:166–83.39. Inaba BK, Turley S, Iyoda T, Yamaide F, Shimoyama S, Reis C, et al. The Formation of Immunogenic Major Histocompatibility Complex Class II – Peptide Ligands in Lysosomal Compartments of Dendritic Cells Is Regulated by Inflammatory Stimuli. J Exp Med. 2000;191(6):927–36.40. Delamarre L, Pack M, Chang H. Differential Lysosomal Proteolysis in Antigen-Presenting Cells Determines Antigen Fate. Science (80- ). 2014;1630(2005):1630–4.41. Ã FRC, Heath WR. The role of dendritic cell subsets in immunity to viruses. Curr Opin Immunol. 2003;15:416–20.42. Barral DC, Brenner MB. CD1 antigen presentation: how it works. Nat Rev Immunol. 2007;7:929–41. 43.43. Porcelli SA, Modlin RL. The CD1 system : Antigen-Presenting Molecules for T Cell Recognition of Lipids and Glycolipids. Annu Rev Immunol. 1999;17:297–329.44. Wel NN Van Der, Sugita M, Fluitsma DM, Cao X, Schreibelt G, Brenner MB, et al. CD1 and Major Histocompatibility Complex II Molecules Follow a Different Course during Dendritic Cell Maturation. Mol Biol Cell. 2003;14(August):3378–88.45. Umaña J, Ramirez J, Espinal C, Sabogal E. Primates no humanos para investigación y mantenimiento de Aotus lemurinus griseimembra. Bol sanit panam. 1984;97(l):44–53.46. Gómez A. De monos y humanos : la búsqueda de una estrategia de vacunación antipalúdica basada en péptidos sintéticos. Infect - Asoc Colomb infectología. 2011;15(2):75–83.47. Liliana B, Bonelo A, Are M. Aotus monkeys : their great value for anti-malaria vaccines and drug testing. Int J Parasitol. 2002;32:1625–35.48. Geskin LJ. Monoclonal Antibodies. Dermatol Clin [Internet]. 2015;33(4):777–86. Available from: http://dx.doi.org/10.1016/j.det.2015.05.01549. Ryman JT, Meibohm B. Pharmacokinetics of Monoclonal Antibodies. Pharmacol. 2017;6(June):576–88.50. Smith SA, Crowe JE. use of Human hybridoma technology to isolate human monoclonal antibodies. Microbiol Spectr. 2015;1–12.51. Alicia C, Martínez C De. Ética en investigación con animales: una actitud responsable y respetuosa del investigador con rigor y calidad científica. Rev Latinoam Bioética. 2008;52. Rodtriguez E. ética de la investigación en modelos animales de enfermedades humanas. Acta Bioeth. 2007;13(1):25–40.53. Colombia C de. Ley 84 de 1989 [Internet]. 1989. Available from: https://www.alcaldiabogota.gov.co/sisjur/normas/Norma1.jsp?i=824254. Ministerio S. Resolución 8430 de 1993 [Internet]. 1993. Available from: https://www.minsalud.gov.co/sites/rid/Lists/BibliotecaDigital/RIDE/DE/DIJ/RESOLUCION-8430-DE-1993.PDF55. Leary S, Underwood W, Lilly E, Anthony R, Cartner S, Corey D, et al. AVMA Guidelines for the Euthanasia of Animals : 2013 Edition. 2013.56. UDCA U de ciencias ambientales y aplicadas-. Acuerdo 285 Función Sustantiva de la Investigación e Innovación. 2008.57. Houghten RA. General method for the rapid solid-phase synthesis of large numbers of peptides: specificity of antigen-antibody interaction at the level of individual amino acids. Proc Natl Acad Sci U S A. 1985;82(15):5131–5.58. Roccatano D, Colombo G, Fioroni M, Mark AE. Mechanism by which 2,2,2-trifluoroethanol watermixtures stabilize secondary-structure formation in peptides : A molecular dynamics study. Proc Natl Acad Sci U S A. 2002;99(19):12179–84.59. Rivero IA, González T. Síntesis en paralelo de decapéptidos en fase sólida y sus afinidades a cationes de interés biológico. Rev Soc Quim Mex. 2004;48:310–4.60. Cubibes R. Producción de anticuerpos monoclonales que reconozcan proteinas de membrana en celulas de memoria en Aotus spp. 2019.61. Dillman BRO, Shawler DL, Dillman JB, Royston I. Lymphoma With T101 Monoclonal Antibody. Otago Univ. 2019;62. Amin-blanco N, Reyes-lópez F, Camacho-casanova F, Otero-alfaro O, Cuello-pérez M, Núñez-martínez D, et al. Obtención de un anticuerpo monoclonal murino que reconoce al polisacárido capsular Vi de Salmonella Typhi. Vaccimonitor. 2015;24(2):57–6363. Barnstable CJ, Bodmer WF, Brown G. Production of Monoclonal Antibodies to Group A Erythrocytes , HLA and Other Human Cell Surface Tools for Genetic Analysis. Cell Host Microbe. 1978;14(May):9–20.64. Guerrero Y, Villarraga J. Elabración de un anticuerpo monoclonal contra Leptospira interrogans serovar pomono. Univ la Salle. 2010;65. Vanasco NB, Lottersberger J. Development and validation of an ELISA for the detection of leptospire-specific antibodies in rodents. Vet Microbiol. 2001;82:321–30.66. Dreyer AM, Beauchamp J, Matile H, Pluschke G. An efficient system to generate monoclonal antibodies against membrane-associated proteins by immunisation with antigen-expressing mammalian cells. BMC Biotechnol. 2010;10.67. Taylor P, Zhan W, Wang Y, Fryer JL, Okubo K, Fukuda H. Production of Monoclonal Antibodies ( MAbs ) against White Spot Syndrome Virus ( WSSV ). J Aquat Anim Health. 2015;8–18.68. Goding J. Monoclonales antobodies: principles and practice. 1993. 300–367 p.69. Sugasawara RJ, Cahoon BE, Karu AE. The Influence of Murine Macrophage-Conditioned Medium on Cloning Efficiency , Antibody Synthesis , and Growth Rate of Hybridomas. J Inmunol methods. 1985;79:263–75.70. Lesmes LP, Gallego GM, Carreño LF, Lozano JM. Actividad funcional de anticuerpos inducidos por péptido-miméticos derivados del antígeno MSP-2 del Plasmodium , como potenciales agentes inmunoterapéuticos en malaria causada por Plasmodium yoelii y Plasmodium berghei en ratones BALB / c. Rev Colomb ciencias, química y Farm. 2011;40(1):67–91.Derechos Reservados -Universidad Colegio Myor de Cundinamarca ,2019https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/info:eu-repo/semantics/openAccessAtribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0)http://purl.org/coar/access_right/c_abf2Producción de anticuerpos monoclonales para la identificación de células presentadoras de antígeno de monos aotus sppTrabajo de grado - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fhttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85Textinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesishttps://purl.org/redcol/resource_type/TPinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionColombiaAntígenosBacteriologíaTolerancia inmunológicaSistema inmunitarioAgentes infecciososRespuesta inmunePatógenoORIGINALSUSTENTACIÓN FINAL.pdfSUSTENTACIÓN FINAL.pdfapplication/pdf5342716https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/310/1/SUSTENTACI%c3%93N%20FINAL.pdf6079a3d14c9054bb498d0fc23a84ad8dMD51open 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