Caracterización y evaluación de perfil de seguridad e inducción de malignidad de células estromales mesenquimales aisladas de la gelatina de wharton del cordón umbilical humano: estudio piloto
La Gelatina de Wharton del Cordón Umbilical Humano se postula como fuente alternativa de Células Estromales Mesenquimales por ser menos invasiva su obtención y reportar mayor capacidad de duplicación celular in vitro. El objetivo de este trabajo piloto es obtener al menos un lote de células grado GM...
- Autores:
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Sierra Cruz, Laura Marcela
Torres Beltrán, Richar Duván
Triana, Yessica Alejandra
Vera Delgado, Heydy Dayana
- Tipo de recurso:
- Trabajo de grado de pregrado
- Fecha de publicación:
- 2019
- Institución:
- Colegio Mayor de Cundinamarca
- Repositorio:
- Repositorio Colegio Mayor de Cundinamarca
- Idioma:
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- OAI Identifier:
- oai:repositorio.unicolmayor.edu.co:unicolmayor/3609
- Acceso en línea:
- https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/3609
- Palabra clave:
- buenas prácticas de manufactura
perfil de seguridad
Inducción de maliginidad
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- Derechos Reservados - Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2019
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La Gelatina de Wharton del Cordón Umbilical Humano se postula como fuente alternativa de Células Estromales Mesenquimales por ser menos invasiva su obtención y reportar mayor capacidad de duplicación celular in vitro. El objetivo de este trabajo piloto es obtener al menos un lote de células grado GMP de MSC de Gelatina de Wharton con óptimo perfil de seguridad y calidad para futuras investigaciones de carácter clínico y/o básico. Para este estudio se recolectaron 11 muestras mediante donación altruista de gestantes sanas previa firma de consentimiento informado desde Octubre a Diciembre del 2018. Se realizó el aislamiento de las MSC por explante, citometría para marcadores CD34, CD45, CD90, CD105 y CD73, microbiología, diferenciación osteogénica, estabilidad cromosómica, propiedad inmunomoduladora, e inducción de malignidad in vivo. Del total de muestras, solo seis cumplieron con los criterios de inclusión iniciales. Al cultivo, solo dos muestras (Lotes 001 y 002) tuvieron un recuento >50x106 de MSC. Para estos dos lotes, la diferenciación osteogénica alcanzó el 100% además de mostrar un inmunofenotipo acorde a lo establecido por la ISCT. No se encontraron anormalidades genéticas y no se observó inducción de malignidad in vivo después de la administración intraperitoneal de éstas en ratones BALB/c. El ensayo de inmunomodulación de ambos lotes evidenció que únicamente el Lote 002 suprimió la proliferación de mononucleares en 37,9%. Con nuestro estudio piloto concluimos que el Lote 002 de Células Madre Mesenquimales derivadas de Gelatina de Wharton de Cordón Umbilical es seguro para ser usado en futuras investigaciones básicas y/o clínicas. |
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Ávila, Luz Mabelb463a6d2149cce76ba2f34f82ff1bf43Navarrete, Jeannette2bfe9791e2d8c31c0410e2f9a6455a9aSierra Cruz, Laura Marcela811f6c8cf86b4402c55ac255f75b6fb0Torres Beltrán, Richar Duvánded5b6bb3fa4a6d03c772edc8277d320Triana, Yessica Alejandra770c62f4f9aa19ab1a4bbdbe9f3f4507Vera Delgado, Heydy Dayana76baae2dd58789b9a39e337b903743ed2021-11-05T19:10:16Z2021-11-05T19:10:16Z2019-06https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/360960080La Gelatina de Wharton del Cordón Umbilical Humano se postula como fuente alternativa de Células Estromales Mesenquimales por ser menos invasiva su obtención y reportar mayor capacidad de duplicación celular in vitro. El objetivo de este trabajo piloto es obtener al menos un lote de células grado GMP de MSC de Gelatina de Wharton con óptimo perfil de seguridad y calidad para futuras investigaciones de carácter clínico y/o básico. Para este estudio se recolectaron 11 muestras mediante donación altruista de gestantes sanas previa firma de consentimiento informado desde Octubre a Diciembre del 2018. Se realizó el aislamiento de las MSC por explante, citometría para marcadores CD34, CD45, CD90, CD105 y CD73, microbiología, diferenciación osteogénica, estabilidad cromosómica, propiedad inmunomoduladora, e inducción de malignidad in vivo. Del total de muestras, solo seis cumplieron con los criterios de inclusión iniciales. Al cultivo, solo dos muestras (Lotes 001 y 002) tuvieron un recuento >50x106 de MSC. Para estos dos lotes, la diferenciación osteogénica alcanzó el 100% además de mostrar un inmunofenotipo acorde a lo establecido por la ISCT. No se encontraron anormalidades genéticas y no se observó inducción de malignidad in vivo después de la administración intraperitoneal de éstas en ratones BALB/c. El ensayo de inmunomodulación de ambos lotes evidenció que únicamente el Lote 002 suprimió la proliferación de mononucleares en 37,9%. Con nuestro estudio piloto concluimos que el Lote 002 de Células Madre Mesenquimales derivadas de Gelatina de Wharton de Cordón Umbilical es seguro para ser usado en futuras investigaciones básicas y/o clínicas.1. RESUMEN 13 2. INTRODUCCIÓN 14 3. ANTECEDENTES 16 4. OBJETIVOS 20 4.1. Objetivo General 20 4.2. Objetivos Específicos 20 5. MARCO TEÓRICO 21 5.1. Células madre: Generalidades 21 5.2. Clasificación de las Células Madre 21 5.2.1. Clasificación de las Células Madre según su potencial y capacidad de diferenciación 22 5.2.2. Células madre embrionarias (CME) 23 5.2.3. Células madre órgano-específicas (adultas) 24 5.3. Células Estromales Mesenquimales (MSC) 25 5.3.1. Generalidades 25 5.3.2. Fuente de Células Estromales Mesenquimales 25 5.3.3. Mecanismo de acción de las Células Estromales Mesenquimales 26 5.3.4. Aplicaciones clínicas de las MSC 27 5.4. El cordón umbilical como fuente de Células Estromales Mesenquimales 28 5.4.1. Estructura del cordón umbilical 28 5.4.2. Composición de la gelatina de Wharton 30 5.4.3. MSC de la gelatina de Wharton 31 5.5. Técnicas 32 5.6. Buenas Prácticas de Manufactura 35 6. DISEÑO METODOLÓGICO 36 6.1. Tipo de estudio 36 6.2. Población de estudio 36 6.2.1. Universo 36 6.2.2. Muestra 36 6.3. Metodología 37 6.3.1. Técnicas y procedimientos 37 7. RESULTADOS 47 7.1. Obtención y selección de las muestras 47 7.2. Caracterización morfológica de las MSC obtenidas de cultivo 51 7.3. Crio preservación de los lotes 52 7.4. Fenotipificación 53 7.5. Diferenciación osteogénica 54 7.6. HLA 56 7.7. Cariotipo 56 7.8. Pruebas microbiológicas 57 7.9. Inducción de malignidad 57 7.10. Ensayo de inmunomodulación 60 8. DISCUSIÓN 62 9. CONCLUSIONES 66 10. RECOMENDACIONES 67 11. CONSIDERACIONES ÉTICAS 68 11.5. Procedimientos para garantizar aspectos éticos en la investigación 68 12. REFERENCIAS 69 13. ANEXOS 75 13.1. Anexo 1.Consentimiento informado 75 13.2. Anexo 2. Hoja de seguridad del componente 78PregradoBacteriólogo(a) y Laboratorista Clínico79p.application/pdfspaUniversidad Colegio Mayor de CundinamarcaFacultad de Ciencias de la SaludBogotá DCBacteriología y Laboratorio ClínicoDerechos Reservados - Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2019https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/info:eu-repo/semantics/closedAccessAtribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0)http://purl.org/coar/access_right/c_14cbCaracterización y evaluación de perfil de seguridad e inducción de malignidad de células estromales mesenquimales aisladas de la gelatina de wharton del cordón umbilical humano: estudio pilotoTrabajo de grado - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fhttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85Textinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesishttps://purl.org/redcol/resource_type/TPinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionLeung ST, Overschmidt B, Allickson J, Atala A, Taghizadeh RR, Cetrulo K, et al. 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