Optimización del cultivo de linfocitos para obtención de cromosomas y análisis de fragilidad: importancia en x frágil y déficit cognitivo
La fragilidad cromosómica se refiere a aquellas regiones de ADN susceptibles a desarrollar fracturas debido al debilitamiento de la cromatina en un proceso de replicación tardía, estas regiones se denominan sitios frágiles, los cuales se presentan comúnmente y son restauradas gracias a un proceso de...
- Autores:
-
Galeano, Lorena Acosta
Bejarano Velandia, Daniel Sebastián
Benavides Hernández, Angy Johana
- Tipo de recurso:
- Trabajo de grado de pregrado
- Fecha de publicación:
- 2019
- Institución:
- Colegio Mayor de Cundinamarca
- Repositorio:
- Repositorio Colegio Mayor de Cundinamarca
- Idioma:
- spa
- OAI Identifier:
- oai:repositorio.unicolmayor.edu.co:unicolmayor/3706
- Acceso en línea:
- https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/3706
- Palabra clave:
- Déficit cognitivo
Cultivo de linfocitos
Optimización
Síndrome de X Frágil
Fragilidad cromosómica
- Rights
- closedAccess
- License
- Derechos Reservados - Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2019
| id |
UCOLMAYOR2_2ad7ec05a53cc0f7e43fc5f262fff9b9 |
|---|---|
| oai_identifier_str |
oai:repositorio.unicolmayor.edu.co:unicolmayor/3706 |
| network_acronym_str |
UCOLMAYOR2 |
| network_name_str |
Repositorio Colegio Mayor de Cundinamarca |
| repository_id_str |
|
| dc.title.spa.fl_str_mv |
Optimización del cultivo de linfocitos para obtención de cromosomas y análisis de fragilidad: importancia en x frágil y déficit cognitivo |
| title |
Optimización del cultivo de linfocitos para obtención de cromosomas y análisis de fragilidad: importancia en x frágil y déficit cognitivo |
| spellingShingle |
Optimización del cultivo de linfocitos para obtención de cromosomas y análisis de fragilidad: importancia en x frágil y déficit cognitivo Déficit cognitivo Cultivo de linfocitos Optimización Síndrome de X Frágil Fragilidad cromosómica |
| title_short |
Optimización del cultivo de linfocitos para obtención de cromosomas y análisis de fragilidad: importancia en x frágil y déficit cognitivo |
| title_full |
Optimización del cultivo de linfocitos para obtención de cromosomas y análisis de fragilidad: importancia en x frágil y déficit cognitivo |
| title_fullStr |
Optimización del cultivo de linfocitos para obtención de cromosomas y análisis de fragilidad: importancia en x frágil y déficit cognitivo |
| title_full_unstemmed |
Optimización del cultivo de linfocitos para obtención de cromosomas y análisis de fragilidad: importancia en x frágil y déficit cognitivo |
| title_sort |
Optimización del cultivo de linfocitos para obtención de cromosomas y análisis de fragilidad: importancia en x frágil y déficit cognitivo |
| dc.creator.fl_str_mv |
Galeano, Lorena Acosta Bejarano Velandia, Daniel Sebastián Benavides Hernández, Angy Johana |
| dc.contributor.advisor.none.fl_str_mv |
Sanchez Mora, Ruth Melida |
| dc.contributor.author.none.fl_str_mv |
Galeano, Lorena Acosta Bejarano Velandia, Daniel Sebastián Benavides Hernández, Angy Johana |
| dc.subject.lemb.none.fl_str_mv |
Déficit cognitivo Cultivo de linfocitos Optimización |
| topic |
Déficit cognitivo Cultivo de linfocitos Optimización Síndrome de X Frágil Fragilidad cromosómica |
| dc.subject.proposal.spa.fl_str_mv |
Síndrome de X Frágil Fragilidad cromosómica |
| description |
La fragilidad cromosómica se refiere a aquellas regiones de ADN susceptibles a desarrollar fracturas debido al debilitamiento de la cromatina en un proceso de replicación tardía, estas regiones se denominan sitios frágiles, los cuales se presentan comúnmente y son restauradas gracias a un proceso de reparación nucleotídica, sin embargo algunas de estas regiones evaden el sistema de reparación y se manifiestan en alteraciones asociadas a enfermedades genéticas como lo es el Síndrome de X Frágil. El síndrome de X Frágil es un trastorno genético hereditario ligado al cromosoma X, región Xq27.3, causado por un defecto molecular en la región 5' no traducida (5'UTR) del gen FMR1, debido al incremento en el número de repeticiones del trinucleótido CGG que ocasiona la inactivación del gen y por lo tanto, la falta de síntesis de la proteína FMRP necesaria para el desarrollo normal del cerebro, siendo considerado una de las principales causas de deficiencia cognitiva; entre las técnicas de diagnóstico se encuentra el cultivo de linfocitos con inducción de fragilidad para la obtención de metafases y visualización de sitios frágiles en el cromosoma X. En el presente trabajo de investigación se realizó la optimización del cultivo convencional de linfocitos así como del cultivo para evaluación de fragilidad cromosómica en la universidad Colegio Mayor de Cundinamarca siendo éste un aporte al proceso académico para el programa de bacteriología y laboratorio clínico, con impacto en estudios de fragilidad cromosómica en poblaciones con deficiencia cognitiva, como es el caso de niños pertenecientes al programa de inclusión de un Colegio ubicado en la localidad de Tunjuelito al sur de Bogotá, a quienes se les realizó un proceso de Tamizaje basado en características y antecedentes familiares compatibles con el Síndrome de X Frágil. |
| publishDate |
2019 |
| dc.date.issued.none.fl_str_mv |
2019 |
| dc.date.accessioned.none.fl_str_mv |
2021-11-23T03:01:30Z |
| dc.date.available.none.fl_str_mv |
2021-11-23T03:01:30Z |
| dc.type.spa.fl_str_mv |
Trabajo de grado - Pregrado |
| dc.type.coar.spa.fl_str_mv |
http://purl.org/coar/resource_type/c_7a1f |
| dc.type.coarversion.spa.fl_str_mv |
http://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85 |
| dc.type.content.spa.fl_str_mv |
Text |
| dc.type.driver.spa.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/bachelorThesis |
| dc.type.redcol.spa.fl_str_mv |
https://purl.org/redcol/resource_type/TP |
| dc.type.version.spa.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
| format |
http://purl.org/coar/resource_type/c_7a1f |
| status_str |
publishedVersion |
| dc.identifier.uri.none.fl_str_mv |
https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/3706 |
| dc.identifier.barcode.none.fl_str_mv |
60035 |
| url |
https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/3706 |
| identifier_str_mv |
60035 |
| dc.language.iso.spa.fl_str_mv |
spa |
| language |
spa |
| dc.relation.references.spa.fl_str_mv |
Lukusa T, Fryns JP. Human chromosome fragility. Biochim Biophys Acta - Gene Regul Mech. 2008; 1779(1):3–16. Debacker K, Kooy RF. Fragile sites and human disease. Hum Mol Genet. 2007;16(2):150– 158. Lyons JI, Kerr GR, Mueller PW. Fragile X Syndrome: Scientific Background and Screening Technologies. J Mol Diagn. 2015; 17(5):463–471. Departamento Administrativo Nacional de Estadistica (DANE). Censo General [Internet]. Bogotá: DANE; 2005. Disponible en: http://www.dane.gov.co/files/censos/discapacidad/preva_indices.pdf. Espinosa E, Jefe G, Hmc-Umng N, Velasco H, Hmc G, Metodologico A, et al. Etiología del retardo mental en la población pediátrica que asiste a consulta de neuropediatría en el Hospital Militar Central e Instituto de Ortopedia Infantil Roosevelt Bogotá, Colombia, 1 agosto 2009 - 31 de enero de 2011 [Trabajo de grado]. Bogotá 2011. Giraldo A, Silva E, Bueno ML, Crane C, Pedraza X, Bermúdez A, et al. Retardo mental ligado al sexo. Presencia y ausencia de X frágil. Biomédica. 1985;5(3–4):62-73. Castro I, Cuenca P. Tamizaje de sitio frágil en el cromosoma X en una población de retardados mentales hallazgos preliminares. Rev medica Hosp Nal Niños Costa Rica. 1987;1(22):1–14. Silva E, Crane C, Bermudez AJ, Bueno ML, Pedraza X, Giraldo A. Citogenética Humana - Manual de Procedimientos [pdf]. Bogotá: Toro González G, Osorio Fonseca E, 1991. Castro Volio I, Cuenca Berger P. Frecuencia del Síndrome del Cromosoma X Frágil en la Escuela de Enseñanza Especial “Fernando Centeno Güell.” Acta Pediltrica Costarricense.1996;10(3):99-105. Fernández Carvajal I, Blanco Quirós A, Fernández Toral J, Tellería Orriolsa J.J, Alonso Ramosa M.J, Sanz Cantalapiedra A, Martín Rodríguez J.F. Eficacia de un test clínico como preselección de niños con sospecha de síndrome X frágil. An Pediatría. 2001;54:326–30. Payán C, Saldarriaga W, Isaza C, Alzate A. Estudio de foco endémico de retardo mental en Ricaurte.Valle. Acta biológica Colombiana.2001;6(2):88. Alliende R. MA, Aravena C. T, Valiente G. A, Curotto L. B, Santa María V. L, Cortés M. F. Tamizaje clínico y análisis de mutaciones en el gen FMR1 en 99 varones con características clínicas del síndrome de X-frágil. Rev Chil Pediatr. 2006;77(1):34–42. Fernández L MP, Puente F A, Ferrando L MT. Síndrome X frágil: Desarrollo e intervención del lenguaje escrito. Rev Chil Neuropsiquiatr. 2010;48(3):219–31. Mercedes M, Castillo M, Ejarque I, García A. Síndrome del cromosoma X frágil. 2017;10(1):54–7. Saldarriaga-Gil W, Hagerman R, Salcedo MJ, Tassone F, Ramirez-Cheyne J, Silva M. Fragile x syndrome in a Colombian family. Iatreia. 2018;31(1):76–85. Solari AJ. Genética humana : fundamentos y aplicaciones en medicina. 4a ed. Bogotá: Médica Panamericana; 2004. Sigma. RPMI-1640 media [Internet]. Saint Louis, Missouri, 2011. Disponible en: http://www.sigmaaldrich.com/etc/medialib/docs/Sigma/Formulation/r8758for.Par.0001.Fil e.tmp/r8758for.pdf Lane BP, Miller SL. Preparation of large numbers of uniform tracheal organ cultures for long term studies. In Vitro Cellular & Developmental Biology. 1976;12(2):147–148. von Seefried A, MacMorine HG. The use of foetal, calf and adult bovine sera for the growth of serially subcultivated diploid cells. Dev Biol Stand. 1976;37:83–89. Ruiz Álvarez V, Hernández Triana M. Aspectos bioquímicos de la fitohemaglutinina. Aplicaciones en terapéutica médica. ReasearchGate.2004. Perlman D. Use of antibiotics in cell culture media. Methods Enzymol. 1979;58:110–116. Oliva Virgili R, Vidal Taboada JM. Genoma humano: nuevos avances en investigación, diagnóstico y tratamiento. Barcelona, España: Publicacions i Edicions, Universitat de Barcelona; 2006. Bueno Zaragüeta O. La estructura del dominio de Colchicina como base para el diseño y síntesis de compuestos con propiedades antimitóticas y antivasculares [Tesis Doctoral]. Madrid; 2018 Montalvo C. Técnica Histológica [Internet]. 2010. Disponible en: http://www.facmed.unam.mx/deptos/biocetis/PDF/Portal de Recursos en Linea/Apuntes/3_tecnica_histologica.pdf Barch MJ. The ACT cytogenetics laboratory manual. 4a ed. USA: Wiley Blackwell; 2017 Perea Sasiaín J. Cien años del colorante de Giemsa. Biomédica. 2003;23(1):5-18 Durkin SG, Glover TW. Chromosome Fragile Sites. Annu Rev Genet. 2007;41(1):169–192. Escribano G, Castillo S, Daher V, Salazar S, Tobella L. Principales factores que producen fragilidad cromosómica transitoria en los pacientes referidos para estudio citogenético. Rev Hosp Clín Univ Chile. 2009;20: 20–27. Bueno M, Rengifo L, Vergara A. Laboratorio Clínico de Citogenética. Rev Fac Med. 2013;61(1) Purdon Martin J, Bell J. A pedigree of mental defect showing sex-linkage. J Neurol Psychiatry. 1943;6(3–4):154–7. Saldarriaga W, Tassone F, González-Teshima LY, Forero-Forero JV, Ayala-Zapata S HR. Fragile Syndrome. Colomb Med. 2014;45(4):190–8. Talise M. Síndrome de X frágil [Internet]. Madrid: Rivas P.;2017. Disponible: https://www.webconsultas.com/salud-al-dia/sindrome-de-x-fragil/sindrome-de-x-fragil- 7204 Castro-Volio I, Cuenca-Berger P. Trastornos del neurodesarrollo (síndrome X frágil) y neurodegenerativos (síndrome de temblor/ataxia) asociados al “crecimiento” de un gen. Rev neurol. 2005;40(7):431-437. Hagerman RJ, Berry-Kravis E, Hazlett HC, Bailey DB, Moine H, Kooy RF, et al. Fragile X syndrome. Nat Rev Dis Prim. 2017;3(17065):1-19. Medina Gómez B, García Alonso I. Síndrome X frágil: detección e intervención en el fenotipo conductual. Int J Dev Educ Psychol. 2014;2(1):145–154. Salgado Cedillo I, Durán Gutiérrez A. Aspectos estomatológicos en el síndrome del X frágil. Revisión de la literatura y presentación de un caso clínico. Rev Odontológica Mex. 2014 ;18(4):236–240. Pugin A, Faundes V, Santa María L, Curotto B, Aliaga S, Salas I, et al. Aspectos clínicos, moleculares y farmacológicos en los trastornos asociados a gen 1 del retraso mental del X frágil. Neurologia. 2017;32(4):241–52. Ribate Molina M, Pié Juste J, Ramos Fuentes F, Pediatría D, Molina RM, Juste PJ, et al. Síndrome De X Frágil. Protoc diagn ter pediatr. 2010;1(1):85–90. Pintado E. El gen del X frágil y sus patologías [Internet].Sevilla, España, 2014 Disponible en: http://www.sebbm.es/ES/divulgacion-ciencia-para-todos_10/acercate-a-nuestros- cientificos_107 Calvo Medina R. Síndrome X frágil: eficacia en el ensayo experimental con antioxidantes de un trastorno genético del neurodesarrollo infantil [Tesis Doctoral]. Málaga; 2016 Artigas J, Brun C, Gabau; E. Aspectos Clínicos y Neuropsicológicos del Síndrome X Frágil. Rev Neurol Clin. 2001;2:42–54. García Lorente L. Síndrome X frágil: fisiopatología y posibilidades actuales de diagnóstico y tratamiento. Madrid, España; 2017 Sherman SL, Jacobs PA, Morton NE, Froster-Iskenius U, Howard-Peebles PN, Nielsen KB, et al. Further segregation analysis of the fragile X syndrome with special reference to transmitting males. Hum Genet. 1985;69(4):289–299. Ministerio de educación nacional (MEN). Orientaciones pedagógicas para la atención a estudiantes con discapacidad cognitiva. [Internet]. Bogotá; 2006. Disponible en: http://portalapp.mineducacion.gov.co/drupal/files/nee/docs/orientaciones_cognitiva1.pdf Fernández Rego FJ. Efecto de los factores de riesgo biológico perinatales en el neurodesarrollo de los niños prematuros [Internet]. Lorca, España, 2017. Disponible en: https://www.fundacionsaludinfantil.org/wp- content/uploads/2017/12/FernandezRego2017.pdf Anonimo. Factores de riesgo perinatales [Internet]. 2016. Disponible en: https://www.bebesymas.com/salud-infantil/factores-de-riesgo-perinatales Gallagher A, Hallahan B. Fragile X-associated disorders: A clinical overview. J Neurol. 2012;259(3):401–413. Milá M, Ramos F, Tejada MI, Aegh G, Ciberer /, Blesa L, et al. Guía clínica de las enfermedades asociadas al gen FMR1: síndrome X frágil, insuficiencia ovárica primaria y síndrome de temblor-ataxia. Med Clin (Barc).2014;142:219–225. Berman RF, Am Buijsen R, Usdin K, Pintado E, Kooy F, Pretto D, et al. Mouse models of the fragile X premutation and fragile X-associated tremor/ataxia syndrome. J Neurodev Disord. 2014;6(25):1–16. Lozano R, Rosero CA, Hagerman RJ. Fragile X spectrum disorders. Intractable rare Dis Res. 2014;3(4):134–146. Milà Recasens M. El Síndrome X frágil. Ed Cont Lab Clín. 2015;20:32–40. Lugones Botell M, Miyar Pieiga E, Ramírez Bermúdez M, Martínez La Fuente A. Síndrome frágil X. Rev Cuba Med Gen. 2006;22(3). Domingo R. Líneas de investigación en el tratamiento del síndrome X frágil [Internet]. Murcia, España, 2016. Disponible en: http://www.dgenes.es/wp-content/uploads/3895s- lineas-investigacion-tratamiento-xf.pdf Rodríguez-Arnaiz R, Becerra Bracho A. Manual de prácticas de genética y cuaderno de trabajo. 1a ed. Ciudad de México: Universidad Autónoma de México; 2005. Arcturus Biosciense Inc. Application C. Molecular Analysis of Individual Chromosomes Enabled through Microdissection [Internet]. USA, 2008. Disponible en: https://research.missouri.edu/mcc/files/chromosome_protocol_6.pdf Kuhlmann WD. Buffer solutions. Division of Radiooncology. 2006;(5):1–9. Bennington JL. Diccionario enciclopédico del laboratorio clínico. Madrid, España: Editorial Médica Panamericana; 2000. Janet O. Técnica de Tinción Selectiva por Bandeo C y G. Mexico; 2016. Anónimo. Introducción al cultivo celular [Internet]. Disponible en: http://www.ehu.eus/biofisica/juanma/mbb/pdf/cultivo_celular.pdf Kragh-Hansen U. Molecular aspects of ligand binding to serum albumin. Pharmacol Rev. 1981; 33(1):17-53. Saitoh Y, Laemmli UK. Metaphase Chromosome Structure : Bands Arise from a Differential Folding Path of the Highly AT-Rich Scaffold. Cell. 1994;76:609–622. Sutherland GR. Heritable Fragile Sites on Human Chromosomes I. Factors Affecting Expression in Lymphocyte Culture. Am JHum Genet. 1979; 31:125-135. |
| dc.rights.spa.fl_str_mv |
Derechos Reservados - Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2019 |
| dc.rights.uri.spa.fl_str_mv |
https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/ |
| dc.rights.accessrights.spa.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/closedAccess |
| dc.rights.creativecommons.spa.fl_str_mv |
Atribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0) |
| dc.rights.coar.spa.fl_str_mv |
http://purl.org/coar/access_right/c_14cb |
| rights_invalid_str_mv |
Derechos Reservados - Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2019 https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/ Atribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0) http://purl.org/coar/access_right/c_14cb |
| eu_rights_str_mv |
closedAccess |
| dc.format.extent.spa.fl_str_mv |
77p. |
| dc.format.mimetype.spa.fl_str_mv |
application/pdf |
| dc.publisher.spa.fl_str_mv |
Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca |
| dc.publisher.faculty.spa.fl_str_mv |
Facultad de Ciencias de la Salud |
| dc.publisher.place.spa.fl_str_mv |
Bogotá DC |
| dc.publisher.program.spa.fl_str_mv |
Bacteriología y Laboratorio Clínico |
| institution |
Colegio Mayor de Cundinamarca |
| bitstream.url.fl_str_mv |
https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3706/1/SUSTENTACI%c3%93N.pdf https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3706/2/IDENTIFICACION%20TRABAJO%20DE%20GRADO.pdf https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3706/3/INFORME%20FINAL-3-77.pdf https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3706/4/license.txt https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3706/5/SUSTENTACI%c3%93N.pdf.txt https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3706/7/IDENTIFICACION%20TRABAJO%20DE%20GRADO.pdf.txt https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3706/9/INFORME%20FINAL-3-77.pdf.txt https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3706/6/SUSTENTACI%c3%93N.pdf.jpg https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3706/8/IDENTIFICACION%20TRABAJO%20DE%20GRADO.pdf.jpg https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3706/10/INFORME%20FINAL-3-77.pdf.jpg |
| bitstream.checksum.fl_str_mv |
e260ecbc756ca36b6bb5e12a6dc8ffcb 86424b5443a94bdcd8ba94882d8ca37c 1d256e881ba5ee08b418fb6574efdf09 2f9959eaf5b71fae44bbf9ec84150c7a b2f65b69112896512de2c2ac38c2080f e1c06d85ae7b8b032bef47e42e4c08f9 55b9457a866ebd337a2673bbcac919d7 23e1b1f99a40f830d5d59fd34a380ddb 97a2a0c134ada65b4f4c29f53731696c 246044b28c8bcf949b2962b363e2d4d8 |
| bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv |
MD5 MD5 MD5 MD5 MD5 MD5 MD5 MD5 MD5 MD5 |
| repository.name.fl_str_mv |
Biblioteca Digital Unicolmayor |
| repository.mail.fl_str_mv |
repositorio@unicolmayor.edu.co |
| _version_ |
1812210118307086336 |
| spelling |
Sanchez Mora, Ruth Melidabe3ae628f6f2f827bc668423000fd207Galeano, Lorena Acosta75ecf5b519f61f24632a095cb9411e25Bejarano Velandia, Daniel Sebastián6281e20e6ca83906fbd9ded74569dde1Benavides Hernández, Angy Johanad382fdb961b5a4d08d7c7a010d0061a22021-11-23T03:01:30Z2021-11-23T03:01:30Z2019https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/370660035La fragilidad cromosómica se refiere a aquellas regiones de ADN susceptibles a desarrollar fracturas debido al debilitamiento de la cromatina en un proceso de replicación tardía, estas regiones se denominan sitios frágiles, los cuales se presentan comúnmente y son restauradas gracias a un proceso de reparación nucleotídica, sin embargo algunas de estas regiones evaden el sistema de reparación y se manifiestan en alteraciones asociadas a enfermedades genéticas como lo es el Síndrome de X Frágil. El síndrome de X Frágil es un trastorno genético hereditario ligado al cromosoma X, región Xq27.3, causado por un defecto molecular en la región 5' no traducida (5'UTR) del gen FMR1, debido al incremento en el número de repeticiones del trinucleótido CGG que ocasiona la inactivación del gen y por lo tanto, la falta de síntesis de la proteína FMRP necesaria para el desarrollo normal del cerebro, siendo considerado una de las principales causas de deficiencia cognitiva; entre las técnicas de diagnóstico se encuentra el cultivo de linfocitos con inducción de fragilidad para la obtención de metafases y visualización de sitios frágiles en el cromosoma X. En el presente trabajo de investigación se realizó la optimización del cultivo convencional de linfocitos así como del cultivo para evaluación de fragilidad cromosómica en la universidad Colegio Mayor de Cundinamarca siendo éste un aporte al proceso académico para el programa de bacteriología y laboratorio clínico, con impacto en estudios de fragilidad cromosómica en poblaciones con deficiencia cognitiva, como es el caso de niños pertenecientes al programa de inclusión de un Colegio ubicado en la localidad de Tunjuelito al sur de Bogotá, a quienes se les realizó un proceso de Tamizaje basado en características y antecedentes familiares compatibles con el Síndrome de X Frágil.RESUMEN EJECUTIVO 10 OBJETIVOS 12 INTRODUCCIÓN 13 1. ANTECEDENTES 15 2. MARCO TEÓRICO 18 2.1. CULTIVO DE LINFOCITOS 18 2.1.1. Técnicas de coloración de cromosomas 20 2.1.2. Sitios frágiles en los cromosomas 21 2.2. SÍNDROME DE X FRÁGIL 22 2.2.1. Etiología 22 2.2.2. Características 23 2.2.3. Patrón de herencia 24 2.2.4. Paradoja de Sherman 26 2.3. SÍNDROME X FRÁGIL Y DÉFICIT COGNITIVO 27 2.3.1. Prevalencia 28 2.3.2. Gen FMR1 29 2.3.3. Tipos de alelos 30 2.3.4. Proteína FMRP 31 2.3.5. Actividad neuronal proteína FMRP 32 3. DISEÑO METODOLÓGICO 34 3.1. DETERMINACIÓN DE LA POBLACIÓN, MUESTRA, CRITERIOS DE INCLUSIÓN Y DE EXCLUSIÓN EN EL ESTUDIO 34 3.2. TÉCNICAS Y PROCEDIMIENTOS 36 3.2.1. Recolección de datos 36 3.2.2. Optimización de las técnicas de cultivo de linfocitos para obtención de cromosomas 37 3.2.2.1. Optimización de cultivo convencional de linfocitos a partir de Sangre periférica 37 3.2.2.2. Optimización del cultivo para análisis de fragilidad cromosómica 39 3.2.2.3. Tinción de Giemsa 40 3.2.4. Bandeo G 40 4. RESULTADOS 42 4.1. OPTIMIZACIÓN DE LA TÉCNICA DE CULTIVO DE LINFOCITOS PARA OBTENCION DE CROMOSOMAS 42 4.1.1. Optimización del Cultivo convencional de linfocitos 42 4.1.2. Optimización de la Tinción de Giemsa 48 4.2. OPTIMIZACIÓN DEL CULTIVO PARA EVALUACIÓN DE FRAGILIDAD CROMOSÓMICA 49 4.2.1. Inducción de fragilidad y resultados de la coloración con Giemsa 50 4.3. CARACTERIZACIÓN DE LA POBLACIÓN DE REFERENCIA PARA EL SXF 51 4.1.1. Análisis de la población de estudio 54 5. DISCUSION 61 CONCLUSIONES 66 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 67 ANEXOS 71 ANEXO 1. CONSENTIMIENTO INFORMADO 71 ANEXO 2. ENCUESTA 73 ANEXO 3. LISTA DE ABREVIATURAS 75PregradoBacteriólogo(a) y Laboratorista Clínico77p.application/pdfspaUniversidad Colegio Mayor de CundinamarcaFacultad de Ciencias de la SaludBogotá DCBacteriología y Laboratorio ClínicoDerechos Reservados - Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2019https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/info:eu-repo/semantics/closedAccessAtribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0)http://purl.org/coar/access_right/c_14cbOptimización del cultivo de linfocitos para obtención de cromosomas y análisis de fragilidad: importancia en x frágil y déficit cognitivoTrabajo de grado - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fhttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85Textinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesishttps://purl.org/redcol/resource_type/TPinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionLukusa T, Fryns JP. Human chromosome fragility. Biochim Biophys Acta - Gene Regul Mech. 2008; 1779(1):3–16.Debacker K, Kooy RF. Fragile sites and human disease. Hum Mol Genet. 2007;16(2):150– 158.Lyons JI, Kerr GR, Mueller PW. Fragile X Syndrome: Scientific Background and Screening Technologies. J Mol Diagn. 2015; 17(5):463–471.Departamento Administrativo Nacional de Estadistica (DANE). Censo General [Internet]. Bogotá: DANE; 2005. Disponible en: http://www.dane.gov.co/files/censos/discapacidad/preva_indices.pdf.Espinosa E, Jefe G, Hmc-Umng N, Velasco H, Hmc G, Metodologico A, et al. Etiología del retardo mental en la población pediátrica que asiste a consulta de neuropediatría en el Hospital Militar Central e Instituto de Ortopedia Infantil Roosevelt Bogotá, Colombia, 1 agosto 2009 - 31 de enero de 2011 [Trabajo de grado]. Bogotá 2011.Giraldo A, Silva E, Bueno ML, Crane C, Pedraza X, Bermúdez A, et al. Retardo mental ligado al sexo. Presencia y ausencia de X frágil. Biomédica. 1985;5(3–4):62-73.Castro I, Cuenca P. Tamizaje de sitio frágil en el cromosoma X en una población de retardados mentales hallazgos preliminares. Rev medica Hosp Nal Niños Costa Rica. 1987;1(22):1–14.Silva E, Crane C, Bermudez AJ, Bueno ML, Pedraza X, Giraldo A. Citogenética Humana - Manual de Procedimientos [pdf]. Bogotá: Toro González G, Osorio Fonseca E, 1991.Castro Volio I, Cuenca Berger P. Frecuencia del Síndrome del Cromosoma X Frágil en la Escuela de Enseñanza Especial “Fernando Centeno Güell.” Acta Pediltrica Costarricense.1996;10(3):99-105.Fernández Carvajal I, Blanco Quirós A, Fernández Toral J, Tellería Orriolsa J.J, Alonso Ramosa M.J, Sanz Cantalapiedra A, Martín Rodríguez J.F. Eficacia de un test clínico como preselección de niños con sospecha de síndrome X frágil. An Pediatría. 2001;54:326–30.Payán C, Saldarriaga W, Isaza C, Alzate A. Estudio de foco endémico de retardo mental en Ricaurte.Valle. Acta biológica Colombiana.2001;6(2):88.Alliende R. MA, Aravena C. T, Valiente G. A, Curotto L. B, Santa María V. L, Cortés M. F. Tamizaje clínico y análisis de mutaciones en el gen FMR1 en 99 varones con características clínicas del síndrome de X-frágil. Rev Chil Pediatr. 2006;77(1):34–42.Fernández L MP, Puente F A, Ferrando L MT. Síndrome X frágil: Desarrollo e intervención del lenguaje escrito. Rev Chil Neuropsiquiatr. 2010;48(3):219–31.Mercedes M, Castillo M, Ejarque I, García A. Síndrome del cromosoma X frágil. 2017;10(1):54–7.Saldarriaga-Gil W, Hagerman R, Salcedo MJ, Tassone F, Ramirez-Cheyne J, Silva M. Fragile x syndrome in a Colombian family. Iatreia. 2018;31(1):76–85.Solari AJ. Genética humana : fundamentos y aplicaciones en medicina. 4a ed. Bogotá: Médica Panamericana; 2004.Sigma. RPMI-1640 media [Internet]. Saint Louis, Missouri, 2011. Disponible en: http://www.sigmaaldrich.com/etc/medialib/docs/Sigma/Formulation/r8758for.Par.0001.Fil e.tmp/r8758for.pdfLane BP, Miller SL. Preparation of large numbers of uniform tracheal organ cultures for long term studies. In Vitro Cellular & Developmental Biology. 1976;12(2):147–148.von Seefried A, MacMorine HG. The use of foetal, calf and adult bovine sera for the growth of serially subcultivated diploid cells. Dev Biol Stand. 1976;37:83–89.Ruiz Álvarez V, Hernández Triana M. Aspectos bioquímicos de la fitohemaglutinina. Aplicaciones en terapéutica médica. ReasearchGate.2004.Perlman D. Use of antibiotics in cell culture media. Methods Enzymol. 1979;58:110–116.Oliva Virgili R, Vidal Taboada JM. Genoma humano: nuevos avances en investigación, diagnóstico y tratamiento. Barcelona, España: Publicacions i Edicions, Universitat de Barcelona; 2006.Bueno Zaragüeta O. La estructura del dominio de Colchicina como base para el diseño y síntesis de compuestos con propiedades antimitóticas y antivasculares [Tesis Doctoral]. Madrid; 2018Montalvo C. Técnica Histológica [Internet]. 2010. Disponible en: http://www.facmed.unam.mx/deptos/biocetis/PDF/Portal de Recursos en Linea/Apuntes/3_tecnica_histologica.pdfBarch MJ. The ACT cytogenetics laboratory manual. 4a ed. USA: Wiley Blackwell; 2017Perea Sasiaín J. Cien años del colorante de Giemsa. Biomédica. 2003;23(1):5-18Durkin SG, Glover TW. Chromosome Fragile Sites. Annu Rev Genet. 2007;41(1):169–192.Escribano G, Castillo S, Daher V, Salazar S, Tobella L. Principales factores que producen fragilidad cromosómica transitoria en los pacientes referidos para estudio citogenético. Rev Hosp Clín Univ Chile. 2009;20: 20–27.Bueno M, Rengifo L, Vergara A. Laboratorio Clínico de Citogenética. Rev Fac Med. 2013;61(1)Purdon Martin J, Bell J. A pedigree of mental defect showing sex-linkage. J Neurol Psychiatry. 1943;6(3–4):154–7.Saldarriaga W, Tassone F, González-Teshima LY, Forero-Forero JV, Ayala-Zapata S HR. Fragile Syndrome. Colomb Med. 2014;45(4):190–8.Talise M. Síndrome de X frágil [Internet]. Madrid: Rivas P.;2017. Disponible: https://www.webconsultas.com/salud-al-dia/sindrome-de-x-fragil/sindrome-de-x-fragil- 7204Castro-Volio I, Cuenca-Berger P. Trastornos del neurodesarrollo (síndrome X frágil) y neurodegenerativos (síndrome de temblor/ataxia) asociados al “crecimiento” de un gen. Rev neurol. 2005;40(7):431-437.Hagerman RJ, Berry-Kravis E, Hazlett HC, Bailey DB, Moine H, Kooy RF, et al. Fragile X syndrome. Nat Rev Dis Prim. 2017;3(17065):1-19.Medina Gómez B, García Alonso I. Síndrome X frágil: detección e intervención en el fenotipo conductual. Int J Dev Educ Psychol. 2014;2(1):145–154.Salgado Cedillo I, Durán Gutiérrez A. Aspectos estomatológicos en el síndrome del X frágil. Revisión de la literatura y presentación de un caso clínico. Rev Odontológica Mex. 2014 ;18(4):236–240.Pugin A, Faundes V, Santa María L, Curotto B, Aliaga S, Salas I, et al. Aspectos clínicos, moleculares y farmacológicos en los trastornos asociados a gen 1 del retraso mental del X frágil. Neurologia. 2017;32(4):241–52.Ribate Molina M, Pié Juste J, Ramos Fuentes F, Pediatría D, Molina RM, Juste PJ, et al. Síndrome De X Frágil. Protoc diagn ter pediatr. 2010;1(1):85–90.Pintado E. El gen del X frágil y sus patologías [Internet].Sevilla, España, 2014 Disponible en: http://www.sebbm.es/ES/divulgacion-ciencia-para-todos_10/acercate-a-nuestros- cientificos_107Calvo Medina R. Síndrome X frágil: eficacia en el ensayo experimental con antioxidantes de un trastorno genético del neurodesarrollo infantil [Tesis Doctoral]. Málaga; 2016Artigas J, Brun C, Gabau; E. Aspectos Clínicos y Neuropsicológicos del Síndrome X Frágil. Rev Neurol Clin. 2001;2:42–54.García Lorente L. Síndrome X frágil: fisiopatología y posibilidades actuales de diagnóstico y tratamiento. Madrid, España; 2017Sherman SL, Jacobs PA, Morton NE, Froster-Iskenius U, Howard-Peebles PN, Nielsen KB, et al. Further segregation analysis of the fragile X syndrome with special reference to transmitting males. Hum Genet. 1985;69(4):289–299.Ministerio de educación nacional (MEN). Orientaciones pedagógicas para la atención a estudiantes con discapacidad cognitiva. [Internet]. Bogotá; 2006. Disponible en: http://portalapp.mineducacion.gov.co/drupal/files/nee/docs/orientaciones_cognitiva1.pdfFernández Rego FJ. Efecto de los factores de riesgo biológico perinatales en el neurodesarrollo de los niños prematuros [Internet]. Lorca, España, 2017. Disponible en: https://www.fundacionsaludinfantil.org/wp- content/uploads/2017/12/FernandezRego2017.pdfAnonimo. Factores de riesgo perinatales [Internet]. 2016. Disponible en: https://www.bebesymas.com/salud-infantil/factores-de-riesgo-perinatalesGallagher A, Hallahan B. Fragile X-associated disorders: A clinical overview. J Neurol. 2012;259(3):401–413.Milá M, Ramos F, Tejada MI, Aegh G, Ciberer /, Blesa L, et al. Guía clínica de las enfermedades asociadas al gen FMR1: síndrome X frágil, insuficiencia ovárica primaria y síndrome de temblor-ataxia. Med Clin (Barc).2014;142:219–225.Berman RF, Am Buijsen R, Usdin K, Pintado E, Kooy F, Pretto D, et al. Mouse models of the fragile X premutation and fragile X-associated tremor/ataxia syndrome. J Neurodev Disord. 2014;6(25):1–16.Lozano R, Rosero CA, Hagerman RJ. Fragile X spectrum disorders. Intractable rare Dis Res. 2014;3(4):134–146.Milà Recasens M. El Síndrome X frágil. Ed Cont Lab Clín. 2015;20:32–40.Lugones Botell M, Miyar Pieiga E, Ramírez Bermúdez M, Martínez La Fuente A. Síndrome frágil X. Rev Cuba Med Gen. 2006;22(3).Domingo R. Líneas de investigación en el tratamiento del síndrome X frágil [Internet]. Murcia, España, 2016. Disponible en: http://www.dgenes.es/wp-content/uploads/3895s- lineas-investigacion-tratamiento-xf.pdfRodríguez-Arnaiz R, Becerra Bracho A. Manual de prácticas de genética y cuaderno de trabajo. 1a ed. Ciudad de México: Universidad Autónoma de México; 2005.Arcturus Biosciense Inc. Application C. Molecular Analysis of Individual Chromosomes Enabled through Microdissection [Internet]. USA, 2008. Disponible en: https://research.missouri.edu/mcc/files/chromosome_protocol_6.pdfKuhlmann WD. Buffer solutions. Division of Radiooncology. 2006;(5):1–9.Bennington JL. Diccionario enciclopédico del laboratorio clínico. Madrid, España: Editorial Médica Panamericana; 2000.Janet O. Técnica de Tinción Selectiva por Bandeo C y G. Mexico; 2016.Anónimo. Introducción al cultivo celular [Internet]. Disponible en: http://www.ehu.eus/biofisica/juanma/mbb/pdf/cultivo_celular.pdfKragh-Hansen U. Molecular aspects of ligand binding to serum albumin. Pharmacol Rev. 1981; 33(1):17-53.Saitoh Y, Laemmli UK. Metaphase Chromosome Structure : Bands Arise from a Differential Folding Path of the Highly AT-Rich Scaffold. Cell. 1994;76:609–622.Sutherland GR. Heritable Fragile Sites on Human Chromosomes I. Factors Affecting Expression in Lymphocyte Culture. Am JHum Genet. 1979; 31:125-135.Déficit cognitivoCultivo de linfocitosOptimizaciónSíndrome de X FrágilFragilidad cromosómicaORIGINALSUSTENTACIÓN.pdfSUSTENTACIÓN.pdfapplication/pdf1449165https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3706/1/SUSTENTACI%c3%93N.pdfe260ecbc756ca36b6bb5e12a6dc8ffcbMD51open accessIDENTIFICACION TRABAJO DE GRADO.pdfIDENTIFICACION TRABAJO DE GRADO.pdfapplication/pdf79144https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3706/2/IDENTIFICACION%20TRABAJO%20DE%20GRADO.pdf86424b5443a94bdcd8ba94882d8ca37cMD52metadata only accessINFORME FINAL-3-77.pdfINFORME FINAL-3-77.pdfapplication/pdf1832232https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3706/3/INFORME%20FINAL-3-77.pdf1d256e881ba5ee08b418fb6574efdf09MD53open accessLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-814828https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3706/4/license.txt2f9959eaf5b71fae44bbf9ec84150c7aMD54open accessTEXTSUSTENTACIÓN.pdf.txtSUSTENTACIÓN.pdf.txtExtracted texttext/plain7386https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3706/5/SUSTENTACI%c3%93N.pdf.txtb2f65b69112896512de2c2ac38c2080fMD55open accessIDENTIFICACION TRABAJO DE GRADO.pdf.txtIDENTIFICACION TRABAJO DE GRADO.pdf.txtExtracted texttext/plain2https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3706/7/IDENTIFICACION%20TRABAJO%20DE%20GRADO.pdf.txte1c06d85ae7b8b032bef47e42e4c08f9MD57metadata only accessINFORME FINAL-3-77.pdf.txtINFORME FINAL-3-77.pdf.txtExtracted texttext/plain132724https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3706/9/INFORME%20FINAL-3-77.pdf.txt55b9457a866ebd337a2673bbcac919d7MD59open accessTHUMBNAILSUSTENTACIÓN.pdf.jpgSUSTENTACIÓN.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg10712https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3706/6/SUSTENTACI%c3%93N.pdf.jpg23e1b1f99a40f830d5d59fd34a380ddbMD56open accessIDENTIFICACION TRABAJO DE GRADO.pdf.jpgIDENTIFICACION TRABAJO DE GRADO.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg7104https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3706/8/IDENTIFICACION%20TRABAJO%20DE%20GRADO.pdf.jpg97a2a0c134ada65b4f4c29f53731696cMD58metadata only accessINFORME FINAL-3-77.pdf.jpgINFORME FINAL-3-77.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg6709https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3706/10/INFORME%20FINAL-3-77.pdf.jpg246044b28c8bcf949b2962b363e2d4d8MD510open accessunicolmayor/3706oai:repositorio.unicolmayor.edu.co:unicolmayor/37062021-11-24 03:03:29.643An error occurred on the license name.|||https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/open accessBiblioteca Digital Unicolmayorrepositorio@unicolmayor.edu.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 |