Modelo de infección de células hep-2 con Chlamydia Trachomatis Serovar l2 (eb’s/lgv vr-902b) y su aplicación en investigación.
Chlamydia trachomatis es una bacteria Gram negativa, intracelular obligada caracterizada por causar infección únicamente en humanos (tanto hombres como mujeres) y estar relacionada con enfermedades de transmisión sexual e infecciones oculares, por lo que puede conllevar a secuelas de interés si no s...
- Autores:
-
Caro Burgos, Paola Andrea
Castañeda Franco, Yessica Marcela
Castellanos Hernández, Natalia
- Tipo de recurso:
- Trabajo de grado de pregrado
- Fecha de publicación:
- 2018
- Institución:
- Colegio Mayor de Cundinamarca
- Repositorio:
- Repositorio Colegio Mayor de Cundinamarca
- Idioma:
- spa
- OAI Identifier:
- oai:repositorio.unicolmayor.edu.co:unicolmayor/3586
- Acceso en línea:
- https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/3586
- Palabra clave:
- Chlamydia Trachomatis
Enfermedades de Transmisión Sexual
Infecciones
Microorganismos
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- closedAccess
- License
- Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2019
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Chlamydia trachomatis es una bacteria Gram negativa, intracelular obligada caracterizada por causar infección únicamente en humanos (tanto hombres como mujeres) y estar relacionada con enfermedades de transmisión sexual e infecciones oculares, por lo que puede conllevar a secuelas de interés si no se da un tratamiento oportuno. Por lo anterior, Chlamydia trachomatis es un microorganismo importante de estudio; a través del siguiente proyecto se estableció el modelo de infección de células HEp-2 con cuerpos elementales (EB’s) de C. trachomatis serovar L2 por medio de cultivo celular, donde se instauró las condiciones para el crecimiento adecuado de las células en un tiempo y con una confluencia determinada, para ser empleadas en los diferentes ensayos, efectuándose un protocolo de infección y siendo demostrado a partir de la coloración de Giemsa permitiendo evaluar características morfológicas tanto de las células HEp-2 sin infectar e infectadas y así mismo de los cuerpos elementales de Chlamydia trachomatis y finalmente aplicando la técnica de Inmunofluorescencia Directa para la detección de la proteína de membrana MOMP de Chlamydia trachomatis. Tras los ensayos llevados a cabo se determinó la densidad celular necesaria para obtener una confluencia del 90% y poder realizar la infección, la cual se evidenció con presencia de cuerpos elementales próximos y dentro del citoplasma celular, vacuolas y además un notorio daño celular luego de la infección. Este proyecto servirá como modelo de investigación para ser aplicado en diferentes campos científicos. |
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Martínez TM. Diagnóstico microbiológico de Chlamydia trachomatis: Estado actual de un problema. Rev. chil. infectol. [Internet]. 2001 [citado 2018 Abr 19]; 18(4): 275-284. Disponible en: http://dx.doi.org/10.4067/S0716-10182001000400006. Shemer Y, Sarov I. Inhibition of growth of Chlamydia trachomatis by human gamma interferon: American Society for Microbiology. Journal Article [Internet]. May 1985 [Citado 2017 Ago 09]; 48(2): 592 – 596 Disponible en: http://iai.asm.org/content/48/2/592.abstract Hervé C., Whittum-Hudson J.A., H. Ralph Schumacher, Alan P. Differential expression of three Chlamydia trachomatis hsp60-encoding genes in active vs. persistent infections. ELSEIVER, [Internet]. 200. [Citado 2 nov. 2017]; Disponible en: http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S128645790900164 Huston WM, Gloeckl S, de Boer L, Beagley KW, Timms P. Apoptosis is Induced in Chlamydia trachomatis‐infected HEp‐2 Cells by the Addition of a Combination Innate Immune Activation Compounds and the Inhibitor Wedelolactone: American Journal of Reproductive Immunology [Internet]. 2011 [Citado 2018 Feb 27]; 65: 460-465. Disponible en: https://sci-hub.tw/10.1111/j.1600-0897.2010.00936. Kubo T, Ishida K, Matsuo J, Nakamura S, Hayashi Y, Sakai H, et al. Chlamydia trachomatis serovar L2 infection model using human lymphoid Jurkat cells. Microbial Pathogenesis [Internet]. 2012 [Citado 2018 Feb 04]; 53(1): 1-11. Disponible en: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0882401012000332?via%3Dihub Datta B., Njau F., Thalmann J., Haller H. and Wagner A. Differential infection outcome of Chlamydia trachomatis in human blood monocytes and monocyte-derived dendritic cells. BMC Microbiology, [Internet]. 2014. [Citado 1 nov. 2017]; 14(1). Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4236547/#__ffn_sectitle. Skipp P., Hughes C., McKenna T., Edwards R., Langridge J., Thomson N. and Clarke I. Quantitative Proteomics of the Infectious and Replicative Forms of Chlamydia trachomatis. PLOS ONE, [Internet] (2016); [Citado 2017 Nov 1]; 11(2), p. e0149011. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4752267/?report=reader. Weber MM, Lam JL, Dooley AC, Noriea NF, Hansen BT et al. Absence of Specific Chlamydia trachomatis Inclusion Membrane Proteins Triggers Premature Inclusion Membrane Lysis and Host Cell Death. Cell Reports [Internet]. 2017 [Citado 2017 Nov 1]; 19(7): 1406-1417. Disponible en: http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2211124717305697# Zora Profozic, Bosutska, Zagreb, Croatia, Dr Andrija Stampar, Zagreb, Croatia, Microbiology Department, School of Medicine, University of Zagreb. Molecular mechanisms of Chlamydia trachomatis resistance to antimicrobial drugs. Frontiers in Bioscience [Internet] January 1, 2018 [Citado jul 2018]: 23, 656-670. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28930567 G. Ramírez N, Vera A. L. C, Villamil J. Gloria Ramírez N, Víctor J, Vera A, Luis C, Villamil J, Cultivos Celulares, Elemento Fundamental para la Investigación; Universidad Nacional de Colombia Revista Acovez. [Internet]. [Citado march 2018 ]:(24)1 Disponible en: https://encolombia.com/veterinaria/publi/acovez/ac241/acovez24_cultivos14/ Libia H U, Roberto A A, Eugenia C, Laya H O, Procedimiento en virología medica; Editorial de la universidad de costa rica. [Internet]. 2004 [Citado March 2018]: 30-35 Disponible en: https://books.google.com.co/books?isbn=9977679134 Sarrión C S, Juan B C P, Manuel M C, Biología molecular y citogenética; Ediciones paraninfo. [Internet] 2016 [Citado Ago 2018]: 34-39 Disponible en: https://books.google.com.co/books?isbn=8428338310 Yeny P C, El ciclo celular y su papel en el desarrollo, crecimiento, restitución y reparación de tejidos. Propuesta de aula para los estudiantes de ciclo tres; Universidad Nacional de Colombia [Internet] 2013 [Citado jul 03] 101-107 Disponible en: http://www.bdigital.unal.edu.co/39571/1/yenyyubelype%C3%B1acruz.2013.pdf Toolan HW. Transplantable Human Neoplasms Maintained in Cortisonetreated Laboratory Animals: H.S. #1; H.Ep. #1; H.Ep. #2; H.Ep. #3; and H. Emb.Rh. #1. American Association for Cancer Research [Internet]. 1954 [Citado 2018 Ene 21]; 14:660-666. Disponible en: http://cancerres.aacrjournals.org/content/canres/14/9/660.full.pdf Moore AE., Sabachewsky L., and Toolan HW. Culture Characteristics of Four Permanent Lines of Human Cancer Cells. American Association for Cancer Research [Internet]. 1955 [Citado 2018 Feb 27]; 15:598-602.Disponible en: http://cancerres.aacrjournals.org/content/canres/14/9/660.full.pdf Lacroix M. Persistent use of “false” cell lines. International Journal of Cancer [Internet]. 2007 [Citado 2018 Feb 27]; 122 (1): 1-4. Disponible en: http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/ijc.23233/full Heneen WK. HeLa cells and their possible contamination of other cell lines: Karyotype studies. Hereditas [Internet]. 1976 [Citado 2018 Feb 27]; 82: 217-248 .Disponible en: http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1601-5223.1976.tb01560.x/pdf Javier C, Carlos N A, Anticuerpos antinucleares. Reumatologia clínica: Elsevier Doyma. Article [Internet]. Sep 2009 [Citado 2018 ene 22]; 6(4) :224–230 Disponible en: http://www.reumatologiaclinica.org/es/anticuerpos-Antinucleares/articulo/S1699258X09002435/ Vasilevsky S, Greub G, Nardelli D, Bauda D. Genital Chlamydia trachomatis: Understanding the Roles of Innate and Adaptive Immunity in Vaccine Research. Clinical Microbiology Reviews [Internet]. April 2014 [Citado 2017 Mar 13]; 27(2): 346 –370. Disponible en: http://cmr.asm.org/content/27/2/346.full.pdf+html Ostos OL, Sánchez RM. Chlamydia trachomatis: avances y perspectivas. NOVA [Internet]. 2003 [CItado 2017 Mar 13]; 1 (1); 81 - 93. Disponible en: http://www.unicolmayor.edu.co/invest_nova/NOVA/artorevi1_1.pdf Jutinico AP, Mantilla A., Sánchez RM. Regulación de la familia de proteínas BCL-2 en células infectadas con Chlamydia trachomatis. NOVA [Internet] (Citado 2018 Julio 10) 2015; 13 (24): 83-92. Disponible en: https://www.researchgate.net/publication/316654169_Regulacion_de_la_familia_de_proteinas_BCL-2_en_celulas_infectadas_con_Chlamydia_trachomatis Guerra F, Flores S. Factores de riesgo y secuelas reproductivas asociados a la infección por Chlamydia trachomatis en mujeres infértiles. Salud Pública Mex [Internet]. 2003 [Citado 2017 Abr 25]; 45 (5): 672-680. Disponible en: http://www.scielo.org.mx/pdf/spm/v45s5/v45s5a13.pdf WHO (World Health Organization). Who Guidelines for the Treatment of Chlamydia trachomatis [Internet]. [Citado 2017 Sep 18]. Disponible en: http://apps.who.int/iris/bitstream/handle/10665/246165/9789241549714-eng.pdfhttps:/www.atcc.org/products/all/CCL-23.aspx;jsessionid=CE25F31A094B032C92D4BC9E6534AD8E?sequence=1#characteristics O’Connell C, Ferone M. Chlamydia trachomatis Genital Infections. Microbial Cell [Internet]. 2016 [Citado 2017 Feb 19]. 3(9): 90-403. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5354567/?report=reader#!po=1.31579. Cardona JA, Gallego LH, Ríos LA. Infección por Chlamydia trachomatis en pacientes de una institución de salud de Bogotá y Medellín, 2012-2015. Revista Chilena Infectol [Internet]. 2016 [Citado 2017 May 9]; 33 (5): 513-518. Disponible en: https://www.dinamicaips.com.co/files/investigaciones/2015_investigacionesdinamica_gallego_lh_chlamydia.pdf. Paavonen J, Eggert-Kruse W. Chlamydia trachomatis: Impact on humanreproduction. Hum Reprod Update [Internet]. 1999 [Citado 2017 Mar 25]; 5:433-447. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/labs/articles/10582782/ Yasin B, Harwig SS, Lehrer RI, Wagar EA. Susceptibility of Chlamydia trachomatis to protegrins and defensins. Infection and Inmunity [Internet]. 1996 [Citado 2017 Mar 13]; 64(3): 709–713. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC173826/pdf/640709.pdf. Paredes MC, Gómez YM, Torres AM, Fernández M, Tovar MV. Prevalencia de infecciones por Chlamydia trachomatis y Neisseria gonorrhoeae en adolescentes de colegios de la provincia de Sabana Centro, Cundinamarca, Colombia. Biomédica [Internet]. 2015 [Citado 2017 May 9]; 35: 314-24. Disponible en: http://www.scielo.org.co/pdf/bio/v35n3/v35n3a05.pdf Ministerio de Salud y Protección Social. Situación de las infecciones de transmisión sexual diferentes al VIH. Colombia, 2009-2011. Disponible en: https://www.minsalud.gov.co/salud/Documents/observatorio_vih/documentos/monitoreo_evaluacion/1_vigilancia_salud_publica/a_situacion_epidimiologica/SITUACION%20DE%20LAS%20INFECCIONES%20DE%20TRANSMISION1.pdf Malhotra M, Sood S, Mukherjee A, Muralidhar S, Bala M. Genital Chlamydia trachomatis: An update. The Indian Journal of Medical Research [Internet]. 2013 [Citado 2017 Abr 8]; 138(3): 303-316. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3818592/ Bahar AA, Ren D. Antimicrobial Peptides. Pharmaceuticals [Internet]. 2013 [Citado 2017 Mar 13]; 6(12):1543-1575. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3873676/#__ffn_sectitle Guerra FM, López M, Villagrana R. Nuevas genovariantes del serovar L2 de Chlamydia trachomatis causantes de proctitis. Ginecología y Obstetricia de México [Internet]. 2012 [Citado 2017 Oct 25]; 80(3):208-217. Disponible en: http://www.medigraphic.com/pdfs/ginobsmex/gom-2012/gom123d.pdf ATCC. THE ESSENTIALS OF LIFE SCIENCE RESEARCH. GLOBALLY DELIVEREDTM [Internet]. USA. [Citado 2017 Sep 17]. Disponible en: https://www.atcc.org/en/Products/Cells_and_Microorganisms/Viruses/Chlamydia_and_Rickettsia/VR-902B.aspx Introducción al cultivo celular [Internet]. [Citado 2017 Abr 8]. Disponible en: https://www.atcc.org/en/Products/Cells_and_Microorganisms/Viruses/Chlamydia_and_Rickettsia/VR-902B.aspx. Sixt BS, Bastidas RJ, Finethy R, etl. The Chlamydia trachomatis inclusion membrane protein CpoS counteracts STING-mediated cellular surveillance and suicide programs. Cell Host & Microbe. 2017 [Internet]. [Citado 2018 Julio 20]; 21(1):113-121. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5233594/ Ibana JA, Sherchand SP, Fontanilla FL, Nagamatsu T, Schust DJ et al. Chlamydia trachomatis-infected cells and uninfected-bystander cells exhibit diametrically opposed responses to interferon gamma. Scientific Reports. 2018 [Internet]. [Citado 2018 Julio 15]; 8:1-15. Disponible en: https://www.nature.com/articles/s41598-018-26765-y Nogueira AT, Braun KM, Carabeo RA. Characterization of the Growth of Chlamydia trachomatis in In Vitro-Generated Stratified Epithelium. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 2017 [Internet]. [Citado 2018 Julio 14]; 7: 1-16. Disponible en: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fcimb.2017.00438/full Juntinico AP, Malagon J., Manrique Chacón N, Gómez M, RM Sánchez Mora, Sánchez RM. Cultivo de la línea celular HEp-2: doblaje poblacional y coloración con Giemsa. Perspectivas para el estudio de la infección con Chlamydia trachomatis . NOVA [Internet] (Citado 2018 Julio 10) 2015; 13 (24): 83-92. Disponible en http://unicolmayor.edu.co/publicaciones/index.php/nova/article/view/233. Blocker ME, Krysiak RG, Behets F, Cohen MS, Hobbs MM. Quantification of Chlamydia trachomatis Elementary Bodies in Urine by Ligase Chain Reaction. Journal of Clinical Microbiology. 2002 [Internet]. [Citado 2018 Feb 10]; 40(10):3631-3634. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC130883/ Giakoumelou S, Wheelhouse N, Brown J, Wade J, Simitsidellis I. Et al. Chlamydia trachomatis infection of human endometrial stromal cells induces defective decidualisation and chemokine release. Scientific Reports. 2017 [Internet]. [Citado 2018 Feb 12]; 7: 1-9. Disponible en: https://www.nature.com/articles/s41598-017-02223-z ABCAM [Internet]. USA. [Citado 2018 Jun 15]. Disponible en: https://www.abcam.com/chlamydia-trachomatis-antibody-fitc-ab21211.html Pajaniradje S, Mohankumar K, Pamidimukkala R, Subramanian S, Rajagopalan R. Antiproliferative and Apoptotic Effects of Sesbania grandiflora Leaves in Human Cancer Cells. BioMed Research International. 2014 [Internet]. [Citado 2018 Jul 1]. 2014: 474953. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4053233/#__ffn_sectitle Nakasone N, Ogura Y, Higa N, Toma C, Koizumi Y, Takaesu G, Suzuki T, Yamashiro T. Effects of Psidium guajava leaf extract on secretion systems of gram-negative enteropathogenic bacteria. Microbiology and Immunology. 2018 [intenet].[Citado 2018 Ago 02].62:7, pp.444-453 Disponible en https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Noboru+Nakasone++hep-2+espb Osaka I, Hefty PS. Lipopolysaccharide-Binding Alkylpolyamine DS-96 Inhibits Chlamydia trachomatis Infection by Blocking Attachment and Entry. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 2014 [intenet]. [Citado 2018 Ago 12];58:6.3245-3254.disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4068484/ Nans A, Saibil HR, Hayward RD. Pathogen–host reorganization during Chlamydia invasion revealed by cryo-electron tomography. Cellular Microbiology. 2014 [Internet]. [Citado 2018 Ago 15];16(10):1457-1472. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4336559/#b45 Da Cunha M, Pais SV, Bugalhão JN, Mota LJ. The Chlamydia trachomatis type III secretion substrates CT142, CT143, and CT144 are secreted into the lumen of the inclusion. Ojcius DM, ed. PLoS ONE. 2017 [internet].[Citado 2018 Jun 29];12:6. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5473537/ Derrick T, Last AR, Burr SE. Inverse relationship between microRNA-155 and 184 expression with increasing conjunctival inflammation during ocular Chlamydia trachomatis infection. 2016 [Citado 2017 May 13]. Disponible en: https://bmcinfectdis.biomedcentral.com/articles/10.1186/s12879-016-1367-8. Richard Coic. Current Protocols in Microbiology. Wiley InterScience. 2005. [Libro] [Citado 2017 May 5]. Engström P, Bergström M, Alfaro A, Syam Krishnan K, Bahnan W, Almqvist F, Bergström, S. Expansion of the Chlamydia trachomatis inclusion does not require bacterial replication. International Journal of Medical Microbiology. 2015 [internet]. [Citado 2018 Jul 27]; 305(3):378-382. Disponible en https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1438422115000181 Vicetti Miguel RD, Henschel KJ, Dueñas Lopez FC, Quispe Calla NE, Cherpes TL. Fluorescent labeling reliably identifies Chlamydia trachomatis in living human endometrial cells and rapidly and accurately quantifies chlamydial inclusion forming units. Journal of microbiological methods. 2015 [internet].[Citado 2018 Jul];119:79-82.Disponible en https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4993108/ Becker E, Hegemann JH. All subtypes of the Pmp adhesin family are implicated in chlamydial virulence and show species-specific function. Microbiology Open. 2014 [Internet]. [Citado Ago 2];3(4):544-556. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4287181/ . Snyder PJ, Bhasin S, Cunningham GR, et al. Effects of Testosterone Treatment in Older Men. The New England journal of medicine. 2016 [internet].[Citado 2018 Agos ];374:7.611-624 Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4287181/ Soysa P, Jayarthne P, Ranathunga I. Water extract of Semecarpus parvifolia The leaves inhibits cell proliferation and induces apoptosis on HEp-2 cells. BMC Complementary and Alternative Medicine. 2018 [Internet]. [Citado 2018 Ago 01]; 18-1. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/29506521 Lee JK et al. Replication dependent size reduction precedes differentiation in Chlamydia trachomatis. Nature COMMUNICATIONS. 2018 [Internet]. [Citado 2018 Ago 1]; 9(1):45. Disponible en: https://www.nature.com/articles/s41467-017-02432-0 Armitage CW, O'Meara CP, Beagley KW. Chlamydia pneumoniae and Chlamydia trachomatis Infection Differentially Modulates Human Dendritic Cell Line (MUTZ) Differentiation and Activation. Scandinavian Journal Immunology.[Internet]. 2015 [Citado 2018 Ago 15] 48-54. Disponible en: https://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1111/sji.12295 Carrera LC et al. Comparación del cultivo celular de HeLa y HEp-2: Perspectivasde estudios con Chlamydia trachomatis. NOVA [Internet]. 2015 [Citado 2017 May 2]; 12 (21): 17-29. Disponible en: http://www.scielo.org.co/pdf/nova/v13n23/v13n23a02.pdf Sherrid AM, Hybiske K. Chlamydia trachomatis Cellular Exit Alters Interactions with Host Dendritic Cells. Roy CR, ed. Infection and Immunity [Internet]. 2018 [Citado 2018 Ago 4]:285-5. Disponible en:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5400845/ Nguyen PH , Lutter EI, Hackstadt T. Chlamydia trachomatis inclusion membrane protein MrcA interacts with the inositol 1,4,5-trisphosphate receptor type 3 (ITPR3) to regulate extrusion formation. PLOS Pathogens. 2018 [Internet]. [Citado 2018 Ago 1]; 14(3):e1006911. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5854415/ |
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Sánchez Mora, Ruth Melida166f302591d01453f1d13fdfdfc6358aCaro Burgos, Paola Andrea301d285fd0fdde7d995ebb36f11b0003Castañeda Franco, Yessica Marcela015151d503de5664f389eea10b49bb4fCastellanos Hernández, Nataliaf99749a31cd06b63b90efbeefe4aed862021-10-29T19:32:52Z2021-10-29T19:32:52Z2018-11https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/358658656Chlamydia trachomatis es una bacteria Gram negativa, intracelular obligada caracterizada por causar infección únicamente en humanos (tanto hombres como mujeres) y estar relacionada con enfermedades de transmisión sexual e infecciones oculares, por lo que puede conllevar a secuelas de interés si no se da un tratamiento oportuno. Por lo anterior, Chlamydia trachomatis es un microorganismo importante de estudio; a través del siguiente proyecto se estableció el modelo de infección de células HEp-2 con cuerpos elementales (EB’s) de C. trachomatis serovar L2 por medio de cultivo celular, donde se instauró las condiciones para el crecimiento adecuado de las células en un tiempo y con una confluencia determinada, para ser empleadas en los diferentes ensayos, efectuándose un protocolo de infección y siendo demostrado a partir de la coloración de Giemsa permitiendo evaluar características morfológicas tanto de las células HEp-2 sin infectar e infectadas y así mismo de los cuerpos elementales de Chlamydia trachomatis y finalmente aplicando la técnica de Inmunofluorescencia Directa para la detección de la proteína de membrana MOMP de Chlamydia trachomatis. Tras los ensayos llevados a cabo se determinó la densidad celular necesaria para obtener una confluencia del 90% y poder realizar la infección, la cual se evidenció con presencia de cuerpos elementales próximos y dentro del citoplasma celular, vacuolas y además un notorio daño celular luego de la infección. Este proyecto servirá como modelo de investigación para ser aplicado en diferentes campos científicos.INTRODUCCIÓN 13 1. OBJETIVOS 15 1.1. Objetivo general. 15 1.2. Objetivos específicos. 15 2. ANTECEDENTES 16 3. MARCO TEORICO 20 3.1 Líneas celulares como modelo de investigación celular. 20 3.2 Cultivo celular 20 3.2.1 Ventajas del Cultivo Celular 21 3.2.2 Desventajas 22 3.3 Línea celular HEp-2. 23 3.4 Chlamydia trachomatis 24 3.4.1 Ciclo de Vida. 26 3.4.2 Interacción huésped – parásito. 27 3.4.3 Transmisión. 28 3.4.4 Factores de riesgo. 29 3.4.5 Enfermedades relacionadas 29 3.4.6 Presentación clínica. 30 3.4.7. Prevalencia en Colombia. 31 3.4.8 Diagnóstico y tratamiento convencional para Chlamydia trachomatis. 32 3.5. Chlamydia trachomatis serovar L2. 33 3.6 ATCC (EB’s/ LGV - L2 VR 902B) 34 3.7 Aplicaciones del modelo de investigación con Chlamydia trachomatis 34 4. DISEÑO METODOLÓGICO 39 4.1. Tipo y enfoque de la investigación. 39 4.2. Universo, población y muestra 4.3. Hipótesis 39 4.4 Procedimientos y técnicas. 39 4.4.1 Establecimiento del cultivo de la línea celular HEp-240 4.4.2 Infección de células HEp-2 con Chlamydia trachomatis. 45 4.4.3 Protocolo de la infección. 46 4.5 Evaluación estadística de los datos obtenidos52 5. RESULTADOS53 5.1 Cultivo de la línea celular HEp-2. 53 5.2 Coloración de Giemsa 58 8 5.3 Infección de células HEp-2 con Chlamydia trachomatis 61 5.3.1 Determinación de la concentración celular 61 5.3.2 Infección de las células Hep2 65 5.3.3 Inmunofluorescencia directa73 6. DISCUSIÓN 77 7. CONCLUSIONES 84 8. REFERENCIAS 85PregradoBacteriólogo(a) y Laboratorista Clínico97p.application/pdfspaUniversidad Colegio Mayor de CundinamarcaFacultad de Ciencias de la SaludBogotá D.CBacteriología y Laboratorio ClínicoUniversidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2019https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/info:eu-repo/semantics/closedAccessAtribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0)http://purl.org/coar/access_right/c_14cbModelo de infección de células hep-2 con Chlamydia Trachomatis Serovar l2 (eb’s/lgv vr-902b) y su aplicación en investigación.Trabajo de grado - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fhttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85Textinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesishttps://purl.org/redcol/resource_type/TPinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionMartínez TM. Diagnóstico microbiológico de Chlamydia trachomatis: Estado actual de un problema. Rev. chil. infectol. [Internet]. 2001 [citado 2018 Abr 19]; 18(4): 275-284. Disponible en: http://dx.doi.org/10.4067/S0716-10182001000400006.Shemer Y, Sarov I. Inhibition of growth of Chlamydia trachomatis by human gamma interferon: American Society for Microbiology. Journal Article [Internet]. May 1985 [Citado 2017 Ago 09]; 48(2): 592 – 596 Disponible en: http://iai.asm.org/content/48/2/592.abstractHervé C., Whittum-Hudson J.A., H. Ralph Schumacher, Alan P. Differential expression of three Chlamydia trachomatis hsp60-encoding genes in active vs. persistent infections. ELSEIVER, [Internet]. 200. [Citado 2 nov. 2017]; Disponible en: http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S128645790900164Huston WM, Gloeckl S, de Boer L, Beagley KW, Timms P. Apoptosis is Induced in Chlamydia trachomatis‐infected HEp‐2 Cells by the Addition of a Combination Innate Immune Activation Compounds and the Inhibitor Wedelolactone: American Journal of Reproductive Immunology [Internet]. 2011 [Citado 2018 Feb 27]; 65: 460-465. Disponible en: https://sci-hub.tw/10.1111/j.1600-0897.2010.00936.Kubo T, Ishida K, Matsuo J, Nakamura S, Hayashi Y, Sakai H, et al. Chlamydia trachomatis serovar L2 infection model using human lymphoid Jurkat cells. Microbial Pathogenesis [Internet]. 2012 [Citado 2018 Feb 04]; 53(1): 1-11. Disponible en: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0882401012000332?via%3DihubDatta B., Njau F., Thalmann J., Haller H. and Wagner A. Differential infection outcome of Chlamydia trachomatis in human blood monocytes and monocyte-derived dendritic cells. BMC Microbiology, [Internet]. 2014. [Citado 1 nov. 2017]; 14(1). Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4236547/#__ffn_sectitle.Skipp P., Hughes C., McKenna T., Edwards R., Langridge J., Thomson N. and Clarke I. Quantitative Proteomics of the Infectious and Replicative Forms of Chlamydia trachomatis. PLOS ONE, [Internet] (2016); [Citado 2017 Nov 1]; 11(2), p. e0149011. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4752267/?report=reader.Weber MM, Lam JL, Dooley AC, Noriea NF, Hansen BT et al. Absence of Specific Chlamydia trachomatis Inclusion Membrane Proteins Triggers Premature Inclusion Membrane Lysis and Host Cell Death. Cell Reports [Internet]. 2017 [Citado 2017 Nov 1]; 19(7): 1406-1417. Disponible en: http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2211124717305697#Zora Profozic, Bosutska, Zagreb, Croatia, Dr Andrija Stampar, Zagreb, Croatia, Microbiology Department, School of Medicine, University of Zagreb. Molecular mechanisms of Chlamydia trachomatis resistance to antimicrobial drugs. Frontiers in Bioscience [Internet] January 1, 2018 [Citado jul 2018]: 23, 656-670. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28930567G. Ramírez N, Vera A. L. C, Villamil J. Gloria Ramírez N, Víctor J, Vera A, Luis C, Villamil J, Cultivos Celulares, Elemento Fundamental para la Investigación; Universidad Nacional de Colombia Revista Acovez. [Internet]. [Citado march 2018 ]:(24)1 Disponible en: https://encolombia.com/veterinaria/publi/acovez/ac241/acovez24_cultivos14/Libia H U, Roberto A A, Eugenia C, Laya H O, Procedimiento en virología medica; Editorial de la universidad de costa rica. [Internet]. 2004 [Citado March 2018]: 30-35 Disponible en: https://books.google.com.co/books?isbn=9977679134Sarrión C S, Juan B C P, Manuel M C, Biología molecular y citogenética; Ediciones paraninfo. [Internet] 2016 [Citado Ago 2018]: 34-39 Disponible en: https://books.google.com.co/books?isbn=8428338310Yeny P C, El ciclo celular y su papel en el desarrollo, crecimiento, restitución y reparación de tejidos. Propuesta de aula para los estudiantes de ciclo tres; Universidad Nacional de Colombia [Internet] 2013 [Citado jul 03] 101-107 Disponible en: http://www.bdigital.unal.edu.co/39571/1/yenyyubelype%C3%B1acruz.2013.pdfToolan HW. Transplantable Human Neoplasms Maintained in Cortisonetreated Laboratory Animals: H.S. #1; H.Ep. #1; H.Ep. #2; H.Ep. #3; and H. Emb.Rh. #1. American Association for Cancer Research [Internet]. 1954 [Citado 2018 Ene 21]; 14:660-666. Disponible en: http://cancerres.aacrjournals.org/content/canres/14/9/660.full.pdfMoore AE., Sabachewsky L., and Toolan HW. Culture Characteristics of Four Permanent Lines of Human Cancer Cells. American Association for Cancer Research [Internet]. 1955 [Citado 2018 Feb 27]; 15:598-602.Disponible en: http://cancerres.aacrjournals.org/content/canres/14/9/660.full.pdfLacroix M. Persistent use of “false” cell lines. International Journal of Cancer [Internet]. 2007 [Citado 2018 Feb 27]; 122 (1): 1-4. Disponible en: http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/ijc.23233/fullHeneen WK. HeLa cells and their possible contamination of other cell lines: Karyotype studies. Hereditas [Internet]. 1976 [Citado 2018 Feb 27]; 82: 217-248 .Disponible en: http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1601-5223.1976.tb01560.x/pdfJavier C, Carlos N A, Anticuerpos antinucleares. Reumatologia clínica: Elsevier Doyma. Article [Internet]. Sep 2009 [Citado 2018 ene 22]; 6(4) :224–230 Disponible en: http://www.reumatologiaclinica.org/es/anticuerpos-Antinucleares/articulo/S1699258X09002435/Vasilevsky S, Greub G, Nardelli D, Bauda D. Genital Chlamydia trachomatis: Understanding the Roles of Innate and Adaptive Immunity in Vaccine Research. Clinical Microbiology Reviews [Internet]. April 2014 [Citado 2017 Mar 13]; 27(2): 346 –370. Disponible en: http://cmr.asm.org/content/27/2/346.full.pdf+htmlOstos OL, Sánchez RM. Chlamydia trachomatis: avances y perspectivas. NOVA [Internet]. 2003 [CItado 2017 Mar 13]; 1 (1); 81 - 93. Disponible en: http://www.unicolmayor.edu.co/invest_nova/NOVA/artorevi1_1.pdfJutinico AP, Mantilla A., Sánchez RM. Regulación de la familia de proteínas BCL-2 en células infectadas con Chlamydia trachomatis. NOVA [Internet] (Citado 2018 Julio 10) 2015; 13 (24): 83-92. Disponible en: https://www.researchgate.net/publication/316654169_Regulacion_de_la_familia_de_proteinas_BCL-2_en_celulas_infectadas_con_Chlamydia_trachomatisGuerra F, Flores S. Factores de riesgo y secuelas reproductivas asociados a la infección por Chlamydia trachomatis en mujeres infértiles. Salud Pública Mex [Internet]. 2003 [Citado 2017 Abr 25]; 45 (5): 672-680. Disponible en: http://www.scielo.org.mx/pdf/spm/v45s5/v45s5a13.pdfWHO (World Health Organization). Who Guidelines for the Treatment of Chlamydia trachomatis [Internet]. [Citado 2017 Sep 18]. Disponible en: http://apps.who.int/iris/bitstream/handle/10665/246165/9789241549714-eng.pdfhttps:/www.atcc.org/products/all/CCL-23.aspx;jsessionid=CE25F31A094B032C92D4BC9E6534AD8E?sequence=1#characteristicsO’Connell C, Ferone M. Chlamydia trachomatis Genital Infections. Microbial Cell [Internet]. 2016 [Citado 2017 Feb 19]. 3(9): 90-403. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5354567/?report=reader#!po=1.31579.Cardona JA, Gallego LH, Ríos LA. Infección por Chlamydia trachomatis en pacientes de una institución de salud de Bogotá y Medellín, 2012-2015. Revista Chilena Infectol [Internet]. 2016 [Citado 2017 May 9]; 33 (5): 513-518. Disponible en: https://www.dinamicaips.com.co/files/investigaciones/2015_investigacionesdinamica_gallego_lh_chlamydia.pdf.Paavonen J, Eggert-Kruse W. Chlamydia trachomatis: Impact on humanreproduction. Hum Reprod Update [Internet]. 1999 [Citado 2017 Mar 25]; 5:433-447. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/labs/articles/10582782/Yasin B, Harwig SS, Lehrer RI, Wagar EA. Susceptibility of Chlamydia trachomatis to protegrins and defensins. Infection and Inmunity [Internet]. 1996 [Citado 2017 Mar 13]; 64(3): 709–713. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC173826/pdf/640709.pdf.Paredes MC, Gómez YM, Torres AM, Fernández M, Tovar MV. Prevalencia de infecciones por Chlamydia trachomatis y Neisseria gonorrhoeae en adolescentes de colegios de la provincia de Sabana Centro, Cundinamarca, Colombia. Biomédica [Internet]. 2015 [Citado 2017 May 9]; 35: 314-24. Disponible en: http://www.scielo.org.co/pdf/bio/v35n3/v35n3a05.pdfMinisterio de Salud y Protección Social. Situación de las infecciones de transmisión sexual diferentes al VIH. Colombia, 2009-2011. Disponible en: https://www.minsalud.gov.co/salud/Documents/observatorio_vih/documentos/monitoreo_evaluacion/1_vigilancia_salud_publica/a_situacion_epidimiologica/SITUACION%20DE%20LAS%20INFECCIONES%20DE%20TRANSMISION1.pdfMalhotra M, Sood S, Mukherjee A, Muralidhar S, Bala M. Genital Chlamydia trachomatis: An update. The Indian Journal of Medical Research [Internet]. 2013 [Citado 2017 Abr 8]; 138(3): 303-316. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3818592/Bahar AA, Ren D. Antimicrobial Peptides. Pharmaceuticals [Internet]. 2013 [Citado 2017 Mar 13]; 6(12):1543-1575. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3873676/#__ffn_sectitleGuerra FM, López M, Villagrana R. Nuevas genovariantes del serovar L2 de Chlamydia trachomatis causantes de proctitis. Ginecología y Obstetricia de México [Internet]. 2012 [Citado 2017 Oct 25]; 80(3):208-217. Disponible en: http://www.medigraphic.com/pdfs/ginobsmex/gom-2012/gom123d.pdfATCC. THE ESSENTIALS OF LIFE SCIENCE RESEARCH. GLOBALLY DELIVEREDTM [Internet]. USA. [Citado 2017 Sep 17]. Disponible en: https://www.atcc.org/en/Products/Cells_and_Microorganisms/Viruses/Chlamydia_and_Rickettsia/VR-902B.aspxIntroducción al cultivo celular [Internet]. [Citado 2017 Abr 8]. Disponible en: https://www.atcc.org/en/Products/Cells_and_Microorganisms/Viruses/Chlamydia_and_Rickettsia/VR-902B.aspx.Sixt BS, Bastidas RJ, Finethy R, etl. The Chlamydia trachomatis inclusion membrane protein CpoS counteracts STING-mediated cellular surveillance and suicide programs. Cell Host & Microbe. 2017 [Internet]. [Citado 2018 Julio 20]; 21(1):113-121. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5233594/Ibana JA, Sherchand SP, Fontanilla FL, Nagamatsu T, Schust DJ et al. Chlamydia trachomatis-infected cells and uninfected-bystander cells exhibit diametrically opposed responses to interferon gamma. Scientific Reports. 2018 [Internet]. [Citado 2018 Julio 15]; 8:1-15. Disponible en: https://www.nature.com/articles/s41598-018-26765-yNogueira AT, Braun KM, Carabeo RA. Characterization of the Growth of Chlamydia trachomatis in In Vitro-Generated Stratified Epithelium. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 2017 [Internet]. [Citado 2018 Julio 14]; 7: 1-16. Disponible en: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fcimb.2017.00438/fullJuntinico AP, Malagon J., Manrique Chacón N, Gómez M, RM Sánchez Mora, Sánchez RM. Cultivo de la línea celular HEp-2: doblaje poblacional y coloración con Giemsa. Perspectivas para el estudio de la infección con Chlamydia trachomatis . NOVA [Internet] (Citado 2018 Julio 10) 2015; 13 (24): 83-92. Disponible en http://unicolmayor.edu.co/publicaciones/index.php/nova/article/view/233.Blocker ME, Krysiak RG, Behets F, Cohen MS, Hobbs MM. Quantification of Chlamydia trachomatis Elementary Bodies in Urine by Ligase Chain Reaction. Journal of Clinical Microbiology. 2002 [Internet]. [Citado 2018 Feb 10]; 40(10):3631-3634. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC130883/Giakoumelou S, Wheelhouse N, Brown J, Wade J, Simitsidellis I. Et al. Chlamydia trachomatis infection of human endometrial stromal cells induces defective decidualisation and chemokine release. Scientific Reports. 2017 [Internet]. [Citado 2018 Feb 12]; 7: 1-9. Disponible en: https://www.nature.com/articles/s41598-017-02223-zABCAM [Internet]. USA. [Citado 2018 Jun 15]. Disponible en: https://www.abcam.com/chlamydia-trachomatis-antibody-fitc-ab21211.htmlPajaniradje S, Mohankumar K, Pamidimukkala R, Subramanian S, Rajagopalan R. Antiproliferative and Apoptotic Effects of Sesbania grandiflora Leaves in Human Cancer Cells. BioMed Research International. 2014 [Internet]. [Citado 2018 Jul 1]. 2014: 474953. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4053233/#__ffn_sectitleNakasone N, Ogura Y, Higa N, Toma C, Koizumi Y, Takaesu G, Suzuki T, Yamashiro T. Effects of Psidium guajava leaf extract on secretion systems of gram-negative enteropathogenic bacteria. Microbiology and Immunology. 2018 [intenet].[Citado 2018 Ago 02].62:7, pp.444-453 Disponible en https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Noboru+Nakasone++hep-2+espbOsaka I, Hefty PS. Lipopolysaccharide-Binding Alkylpolyamine DS-96 Inhibits Chlamydia trachomatis Infection by Blocking Attachment and Entry. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 2014 [intenet]. [Citado 2018 Ago 12];58:6.3245-3254.disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4068484/Nans A, Saibil HR, Hayward RD. Pathogen–host reorganization during Chlamydia invasion revealed by cryo-electron tomography. Cellular Microbiology. 2014 [Internet]. [Citado 2018 Ago 15];16(10):1457-1472. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4336559/#b45Da Cunha M, Pais SV, Bugalhão JN, Mota LJ. The Chlamydia trachomatis type III secretion substrates CT142, CT143, and CT144 are secreted into the lumen of the inclusion. Ojcius DM, ed. PLoS ONE. 2017 [internet].[Citado 2018 Jun 29];12:6. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5473537/Derrick T, Last AR, Burr SE. Inverse relationship between microRNA-155 and 184 expression with increasing conjunctival inflammation during ocular Chlamydia trachomatis infection. 2016 [Citado 2017 May 13]. Disponible en: https://bmcinfectdis.biomedcentral.com/articles/10.1186/s12879-016-1367-8.Richard Coic. Current Protocols in Microbiology. Wiley InterScience. 2005. [Libro] [Citado 2017 May 5].Engström P, Bergström M, Alfaro A, Syam Krishnan K, Bahnan W, Almqvist F, Bergström, S. Expansion of the Chlamydia trachomatis inclusion does not require bacterial replication. International Journal of Medical Microbiology. 2015 [internet]. [Citado 2018 Jul 27]; 305(3):378-382. Disponible en https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1438422115000181Vicetti Miguel RD, Henschel KJ, Dueñas Lopez FC, Quispe Calla NE, Cherpes TL. Fluorescent labeling reliably identifies Chlamydia trachomatis in living human endometrial cells and rapidly and accurately quantifies chlamydial inclusion forming units. Journal of microbiological methods. 2015 [internet].[Citado 2018 Jul];119:79-82.Disponible en https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4993108/Becker E, Hegemann JH. All subtypes of the Pmp adhesin family are implicated in chlamydial virulence and show species-specific function. Microbiology Open. 2014 [Internet]. [Citado Ago 2];3(4):544-556. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4287181/ .Snyder PJ, Bhasin S, Cunningham GR, et al. Effects of Testosterone Treatment in Older Men. The New England journal of medicine. 2016 [internet].[Citado 2018 Agos ];374:7.611-624 Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4287181/Soysa P, Jayarthne P, Ranathunga I. Water extract of Semecarpus parvifolia The leaves inhibits cell proliferation and induces apoptosis on HEp-2 cells. BMC Complementary and Alternative Medicine. 2018 [Internet]. [Citado 2018 Ago 01]; 18-1. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/29506521Lee JK et al. Replication dependent size reduction precedes differentiation in Chlamydia trachomatis. Nature COMMUNICATIONS. 2018 [Internet]. [Citado 2018 Ago 1]; 9(1):45. Disponible en: https://www.nature.com/articles/s41467-017-02432-0Armitage CW, O'Meara CP, Beagley KW. Chlamydia pneumoniae and Chlamydia trachomatis Infection Differentially Modulates Human Dendritic Cell Line (MUTZ) Differentiation and Activation. Scandinavian Journal Immunology.[Internet]. 2015 [Citado 2018 Ago 15] 48-54. Disponible en: https://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1111/sji.12295Carrera LC et al. Comparación del cultivo celular de HeLa y HEp-2: Perspectivasde estudios con Chlamydia trachomatis. NOVA [Internet]. 2015 [Citado 2017 May 2]; 12 (21): 17-29. Disponible en: http://www.scielo.org.co/pdf/nova/v13n23/v13n23a02.pdfSherrid AM, Hybiske K. Chlamydia trachomatis Cellular Exit Alters Interactions with Host Dendritic Cells. Roy CR, ed. Infection and Immunity [Internet]. 2018 [Citado 2018 Ago 4]:285-5. Disponible en:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5400845/Nguyen PH , Lutter EI, Hackstadt T. Chlamydia trachomatis inclusion membrane protein MrcA interacts with the inositol 1,4,5-trisphosphate receptor type 3 (ITPR3) to regulate extrusion formation. PLOS Pathogens. 2018 [Internet]. [Citado 2018 Ago 1]; 14(3):e1006911. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5854415/Chlamydia TrachomatisEnfermedades de Transmisión SexualInfeccionesMicroorganismosTEXTCartas derechos de autor.pdf.txtCartas derechos de autor.pdf.txtExtracted texttext/plain20https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/3586/5/Cartas%20derechos%20de%20autor.pdf.txtb132767d7dbacc9cb5ff2ae1ca490526MD55metadata only accessModelo de infección de células HEp-2 con Chlamydia trachomatis serovar l2 (EB’S_LGV VR-902B) y su aplicación en investigación_.pdf.txtModelo de infección de células HEp-2 con Chlamydia trachomatis serovar l2 (EB’S_LGV VR-902B) y su aplicación en investigación_.pdf.txtExtracted 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