Identificación de polimorfismo(s) en el gen de la Mieloperoxidasa asociado a infecciones recurrentes por Candida albicans.

La candidiasis es una infección causada por levaduras del género Candida spp. que se presenta de varias formas dependiendo la zona del cuerpo en la que se localice, como la candidiasis bucal y la candidiasis vulvovaginal. Esto ocurre cuando existe un desequilibrio inmunológico entre el huésped y el...

Full description

Autores:
Riaño Parra, Lina Marcela
Tipo de recurso:
Trabajo de grado de pregrado
Fecha de publicación:
2019
Institución:
Colegio Mayor de Cundinamarca
Repositorio:
Repositorio Colegio Mayor de Cundinamarca
Idioma:
spa
OAI Identifier:
oai:repositorio.unicolmayor.edu.co:unicolmayor/4764
Acceso en línea:
https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/4764
Palabra clave:
Infección
Patologías
Inmunidad celular
Neutrófilos
Candidiasis
Enzima Mieloperoxidasa
Deficiencia enzimática
Polimorfismos
Infecciones recurrentes
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closedAccess
License
Derechos Reservados - Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2019
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description La candidiasis es una infección causada por levaduras del género Candida spp. que se presenta de varias formas dependiendo la zona del cuerpo en la que se localice, como la candidiasis bucal y la candidiasis vulvovaginal. Esto ocurre cuando existe un desequilibrio inmunológico entre el huésped y el hongo; por lo tanto, el organismo desencadena un mecanismo de defensa que involucra células como el neutrófilo, quien actúa como principal mediador de la respuesta inmune innata frente a levaduras, dado a que libera sustancias fungicidas como la Mieloperoxidasa (MPO), enzima presente en los gránulos azurófilos. Sin embargo, se han descrito múltiples causas que pueden generar deficiencia o disfunción de esta enzima como la presencia de polimorfismos en el gen que la codifica; por tal motivo, en este estudio se buscó identificar un posible polimorfismo mediante técnicas moleculares y citoquímicas en muestras de pacientes con antecedentes de candidiasis recurrente, logrando estandarizar la técnica de PCR convencional para la amplificación del gen mpo, la secuenciación de la región amplificada y análisis bioinformáticos de los productos de amplificación hallando un cambio en una base nitrogenada (G291T) ubicada en una región no codificante del gen en estudio.
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spelling Cruz Baquero, Claudia Andreaf37a550d32dcc1622c0035ee0120dd76Riaño Parra, Lina Marcelac8158babde7a94ebc0a643f7de5041882022-03-03T21:56:22Z2022-03-03T21:56:22Z2019https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/476458653La candidiasis es una infección causada por levaduras del género Candida spp. que se presenta de varias formas dependiendo la zona del cuerpo en la que se localice, como la candidiasis bucal y la candidiasis vulvovaginal. Esto ocurre cuando existe un desequilibrio inmunológico entre el huésped y el hongo; por lo tanto, el organismo desencadena un mecanismo de defensa que involucra células como el neutrófilo, quien actúa como principal mediador de la respuesta inmune innata frente a levaduras, dado a que libera sustancias fungicidas como la Mieloperoxidasa (MPO), enzima presente en los gránulos azurófilos. Sin embargo, se han descrito múltiples causas que pueden generar deficiencia o disfunción de esta enzima como la presencia de polimorfismos en el gen que la codifica; por tal motivo, en este estudio se buscó identificar un posible polimorfismo mediante técnicas moleculares y citoquímicas en muestras de pacientes con antecedentes de candidiasis recurrente, logrando estandarizar la técnica de PCR convencional para la amplificación del gen mpo, la secuenciación de la región amplificada y análisis bioinformáticos de los productos de amplificación hallando un cambio en una base nitrogenada (G291T) ubicada en una región no codificante del gen en estudio.Resumen 12 Introducción 13 2. Objetivos 15 2.1 Objetivo general 15 2.2 Objetivos específicos 15 3. Marco teórico 16 3.1 Antecedentes 16 3.2 Candidiasis generalidades 19 3.3 Epidemiología 24 3.4 Diagnóstico 26 3.5 Tratamiento 26 3.6 Fisiopatología e inmunidad de Candida albicans 27 3.7 Los neutrófilos 30 3.8 Mieloperoxidasa 31 3.9 Deficiencia de MPO y susceptibilidad a infecciones 36 3.10 Tipos de polimorfismos genéticos 40 3.11 Diagnóstico deficiencia de MPO 43 3.11.1 Técnicas citoquímicas 43 3.11.2 PCR convencional 43 3.11.3 Secuenciación de ADN 45 4. Metodología 47 4.1 Tipo de investigación 47 4.2 Población 47 4.3 Muestra 47 4.4 Recolección de la muestra 48 4.5 Diseño de primers y análisis Bioinformático 48 4.6 Extracción de ADN 49 4.7 Estandarización PCR convencional para amplificación gen mpo 50 4.7.1 Titulación de ADN 50 4.7.2 Titulación de MgCl2 51 4.7.3 Titulación de primers 51 4.7.4 Temperatura de anillamiento 52 4.8 PCR convencional 52 4.9 Purificación de ADN 54 4.10 Secuenciación 54 4.11 Tinción citoquímica de peroxidasa leucocitaria 55 4.12 Cuadro hemático y FSP 55 5. Resultados56 5.1 Estandarización PCR convencional para amplificación gen mpo 56 5.1.1 Titulación de ADN 56 5.1.2 Titulación de MgCl2 57 5.1.3 Titulación de primers 58 5.1.4 Temperatura de anillamiento 60 5.1.5 PCR convencional 62 5.2 Resultados secuenciación 63 5.2.1 Alineamineto de las secuencias con programa bioinformático BLAST 63 5.2.1.1 Muestra Nº 1: Paciente con diágnostico candidiasis bucal 63 5.2.1.2 Muestra Nº 2: Control negativo 65 5.2.1.3 Muestra Nº 3: Paciente con diágnostico candidiasis vaginal 67 5.2.2 Comparación de alineamientos de secuenciaciones con programa Multalin .69 5.2.3Análisis de electroferogramas de los productos de amplificación de PCR secuenciados de candenas complementarias 71 5.3 Análisis bioinformático de la región del gen mpo amplificado, para determinar la ubicación del polimorfismo hallado en la base de datos NCBI 73 5.4 Comparación de tinción citoquímica y FSP de las muestras en estudio 77 6. Discusión. 81 7. Conclusiones 85 8. Referencias. 86 9. Anexos 95PregradoBacteriólogo(a) y Laboratorista Clínico101p.application/pdfspaUniversidad Colegio Mayor de CundinamarcaFacultad de Ciencias de la SaludBogotá D.CBacteriología y Laboratorio ClínicoDerechos Reservados - Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2019https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/info:eu-repo/semantics/closedAccessAtribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0)http://purl.org/coar/access_right/c_14cbIdentificación de polimorfismo(s) en el gen de la Mieloperoxidasa asociado a infecciones recurrentes por Candida albicans.Trabajo de grado - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fhttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85Textinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesishttps://purl.org/redcol/resource_type/TPinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionKullberg BJ, Arendrup MC. Invasive Candidiasis. N Engl J Med [Internet]. 2015;373(15):1445-56. Disponible en: http://www.nejm.org/doi/10.1056/NEJMra1315399Sánchez EA. 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2019.pdfapplication/pdf3519143https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/4764/2/TESIS%20POLIMORFISMOS%20GEN%20MIELOPEROXIDASA%202019.pdf478fc5b1901ccd0bda6a8fa41170b15bMD52open accessTESIS POLIMORFISMOS GEN MIELOPEROXIDASA 2019 FORMATO DERECHOS DE AUTOR.pdfTESIS POLIMORFISMOS GEN MIELOPEROXIDASA 2019 FORMATO DERECHOS DE AUTOR.pdfapplication/pdf41666https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/4764/3/TESIS%20POLIMORFISMOS%20GEN%20MIELOPEROXIDASA%202019%20FORMATO%20DERECHOS%20DE%20AUTOR.pdf75545ed817e244a82f7baef9ee777f25MD53metadata only accessTEXTPRESENTACIÓN TESIS IDENTIFICACIÓN DE POLIMORFISMOS EN LA ENZIMA MPO 2019.pdf.txtPRESENTACIÓN TESIS IDENTIFICACIÓN DE POLIMORFISMOS EN LA ENZIMA MPO 2019.pdf.txtExtracted texttext/plain9739https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/4764/5/PRESENTACIO%cc%81N%20TESIS%20IDENTIFICACIO%cc%81N%20DE%20POLIMORFISMOS%20EN%20LA%20ENZIMA%20MPO%202019.pdf.txt85be3556e4baba6eb84d14d8c112de4cMD55open 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