Determinación de respuesta inmune celular generada por péptidos sintéticos derivados de proteínas de Mycobacterium Tuberculosis H37rv
Teniendo en cuenta que la tuberculosis es una enfermedad infecciosa causada principalmente por el bacilo Mycobacterium tuberculosis, el cual infecta con mayor frecuencia los pulmones debido a que es transmitida por aerosoles (Tuberculosis pulmonar), además de afectar otros órganos (Tuberculosis extr...
- Autores:
-
Tonguino Quiñonez, Erika Tatiana
- Tipo de recurso:
- Trabajo de grado de pregrado
- Fecha de publicación:
- 2018
- Institución:
- Colegio Mayor de Cundinamarca
- Repositorio:
- Repositorio Colegio Mayor de Cundinamarca
- Idioma:
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- OAI Identifier:
- oai:repositorio.unicolmayor.edu.co:unicolmayor/4801
- Acceso en línea:
- https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/4801
- Palabra clave:
- Tuberculosis
Mycobacterium tuberculosis H37Rv
Péptidos sintéticos
HABPs
PBMC
Infoproliferación
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- Derechos Reservados - Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2018
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Teniendo en cuenta que la tuberculosis es una enfermedad infecciosa causada principalmente por el bacilo Mycobacterium tuberculosis, el cual infecta con mayor frecuencia los pulmones debido a que es transmitida por aerosoles (Tuberculosis pulmonar), además de afectar otros órganos (Tuberculosis extrapulmonar), y considerada después del SIDA como la segunda causa de muerte a nivel mundial, la Fundación Instituto de Inmunología de Colombia ha desarrollado una metodología lógica y racional para el diseño de vacunas sintéticas, la cual ha tenido éxito en estudios con malaria. Los avances obtenidos en el desarrollo de vacuna antituberculosa han permitido establecer péptidos de alta unión específica a células blanco (HABPs), que además inhiben la entrada de la micobacteria en ensayos in vitro, los cuales han sido postulados para estudios como posibles candidatos a vacuna. Dando continuidad a dicha metodología, en este proyecto mediante ensayos de linfoproliferación se evaluó parte de la respuesta inmune celular generada por péptidos sintéticos derivados de proteínas de Mycobacterium tuberculosis H37Rv ante PBMC de 8 individuos clasificados por prueba de QuantiFERON Qf (4Qf+ y 4Qf-), determinando que la mayoría de los péptidos sintéticos importantes en la interacción hospedero-patógeno no son inmunogénicos. Se estableció que los péptidos que hacen parte de las proteínas Rv0180c (31039), Rv2270 (37777) y Rv3494c (38373) estimulan la linfoproliferación de linfocitos de por lo menos 3 de los 4 individuos clasificados como Qf+, y a su vez que los resultados obtenidos contribuyen a una posible técnica de diagnóstico para diferenciar pacientes que hayan tenido contacto con M. tuberculosis de pacientes que no |
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Kovacs-Simon A, Titball R, Michell SL. Lipoproteins of bacterial pathogens. Infection and immunity. 2011;79(2):548-61. WHO. Global Tuberculosis Report. Report. World Health Organization, 2017. Enfermedades CpeCylPdl. Factores de Riesgo de la Tuberculosis. 01-02-2018; Available from: https://www.cdc.gov/tb/esp/topic/basics/risk.htm. Fine PE. Variation in protection by BCG: implications of and for heterologous immunity. The Lancet. 1995;346(8986):1339-45. Evans TG, Brennan MJ, Barker L, Thole J. Preventive vaccines for tuberculosis. Vaccine. 2013;31:B223-B6. Lozano JM, Patarroyo ME. A rational strategy for a malarial vaccine development. Microbes and infection. 2007;9(6):751-60. Patarroyo ME, Patarroyo MA. Emerging rules for subunit-based, multiantigenic, multistage chemically synthesized vaccines. Accounts of chemical research. 2008;41(3):377-86. atarroyo M, Cifuentes G, Bermudez A, Patarroyo M. Strategies for developing multi‐ epitope, subunit‐based, chemically synthesized anti‐malarial vaccines. Journal of cellular and molecular medicine. 2008;12(5b):1915-35. Patarroyo ME, Cifuentes G, Martínez NL, Patarroyo MA. Atomic fidelity of subunitbased chemically-synthesized antimalarial vaccine components. Progress in biophysics and molecular biology. 2010;102(1):38-44. Cifuentes G, Bermudez A, Rodriguez R, Patarroyo M, Patarroyo M. Shifting the polarity of some critical residues in malarial peptides' binding to host cells is a key factor in breaking conserved antigens' code of silence. Medicinal Chemistry. 2008;4(3):278-9 Ocampo M, Patarroyo MA, Vanegas M, Alba MP, Patarroyo ME. Functional, biochemical and 3D studies of Mycobacterium tuberculosis protein peptides for an effective anti-tuberculosis vaccine. Critical reviews in microbiology. 2014;40(2):117-45. Dorronsoro I, Torroba L, editors. Microbiología de la tuberculosis. Anales del sistema sanitario de Navarra; 2007: SciELO Espana. ario de Navarra; 2007: SciELO Espana. 13. Chan VL. Bacterial genomes and infectious diseases. Pediatric research. 2003;54(1):1-7. García JG, Gutiérrez JP, Antuña AS. Respiratory infections caused by environmental mycobacteria. 2005 [cited 41 4]; 206-19]. Available from: http://www.aeras.org/annualreport2016. L. B. The Basic of Clinical Bacteriology. In: Palomino JC CLS, Ritacco V Editors, editor. 2007;Tuberculosis 2007: From basic science to patient care 2007. Kaur D, Guerin ME, Škovierová H, Brennan PJ, Jackson M. Biogenesis of the cell wall and other glycoconjugates of Mycobacterium tuberculosis. Advances in applied microbiology. 2009;69:23-78 Gonzalo-A.Jesus MD, Martin Carlos and Aguilo Nacho. MTBVAC: Attenuating the Human Pathogen of Tuberculosis (TB) Toward a Promising Vaccine against the TB Epidemic. 2017. Brennan PJ. Structure, function, and biogenesis of the cell wall of Mycobacterium tuberculosis. Tuberculosis. 2003;83(1):91-7. Trabajo INdSeHee. Mycobacterium tuberculosis: viabilidad, propagación y transmisión Instituto Nacional de Seguridad e Higiene en el Trabajo, 23 de Septiembre de 2012 Kaufmann SH. How can immunology contribute to the control of tuberculosis? Nature reviews Immunology. 2001;1(1):20. Cosma CL, Sherman DR, Ramakrishnan L. The secret lives of the pathogenic mycobacteria. Annual Reviews in Microbiology. 2003;57(1):641-76. Garcıá -Pérez BE, Mondragón-Flores R, Luna-Herrera J. Internalization of Mycobacterium tuberculosis by macropinocytosis in non-phagocytic cells. Microbial pathogenesis. 2003;35(2):49-55 Russell DG. Who puts the tubercle in tuberculosis? Nature Reviews Microbiology. 2007;5(1):39. Kaufmann SH, Hussey G, Lambert P-H. New vaccines for tuberculosis. The Lancet. 2010;375(9731):2110-9 Schaible UE, Winau F, Sieling PA, Fischer K, Collins HL, Hagens K, et al. Apoptosis facilitates antigen presentation to T lymphocytes through MHC-I and CD1 in tuberculosis. Nature medicine. 2003;9(8):1039 Figueroa MCEG-S. Respuesta Inmune a la infección por Mycobacterium tuberculosis. Una revisión de la literatura. Rev Inst Nal Enf Resp Mex. 2001;14(2):114-28. Goicochea CR, Castillo SB, Tarazona PC, Narvaez CC, Última JC, Última RC, et al. Asociación de criterios de Stegen modificado por Toledo para el diagnóstico de tuberculosis pediátrica, Hospital Belén de Trujillo. UCV-SCIENTIA. 2015;4(1):64-71. Tincopa Wong OW, Castro L, Lelie K, Plasencia Angulo WF, Valverde López JC. Tuberculosis cutánea: Rasgos clínicos, histopatológicos y epidemiológicos en un Hospital General de Trujillo, Perú. Dermatol peru. 2006;16(3):220-32. Abbate E, Vescovo M, Natiello M, Cufré M, García A, Ambroggi M, et al. Tuberculosis extensamente resistente (XDR-TB) en Argentina: aspectos destacables epidemiológicos, bacteriológicos, terapéuticos y evolutivo. 2007 Cavanaugh JS, Shah NS, Cain KP, Winston CA. Survival among Patients with HIV Infection and Smear-Negative Pulmonary Tuberculosis-United States, 1993–2006. PLoS One. 2012;7(10):e47855 Arteaga Arteaga A, Vélez Moncada E, Salazar Blanco OF, Morales Múnera OL, Cornejo Ochoa JW, Valencia Pino DC. Clinical and sociodemographic characteristics of children, younger than 13 years, with or without a confirmed diagnosis of pulmonary tuberculosis, at Hospital Universitario San Vicente de Paúl, Medellín, Colombia, 2007-2008. Iatreia. 2010;23(3):227-39. Abbate EH, Palmero DJ, Castagnino J, Cufre M, Doval A, Estevan R, et al. Tratamiento de la tuberculosis: Guía práctica elaborada por la Sección Tuberculosis, Asociación Argentina de Medicina Respiratoria. Medicina (Buenos Aires). 2007;67(3):295- 305 Garzón MC, Angée DY, Llerena C, Orjuela DL, Victoria JE. Vigilancia de la resistencia del Mycobacterium tuberculosis a los fármacos antituberculosos, Colombia 2004-2005. Biomédica. 2008;28(3):319-26 Arias Guillén M, Palomar R, Arias M. Avances en el diagnóstico de la infección tuberculosa latente en pacientes en tratamiento renal sustitutivo. Nefrología (Madrid). 2011;31(2):137-41. Cardoso EM. Multiple drug resistance: a threat for tuberculosis control. Revista Panamericana de Salud Pública. 2004;16(1):68-73. Ramakrishnan L. Revisiting the role of the granuloma in tuberculosis. Nature reviews Immunology. 2012;12(5):352. Moliva JI, Turner J, Torrelles JB. Prospects in Mycobacterium bovis Bacille Calmette et Guerin (BCG) vaccine diversity and delivery: why does BCG fail to protect against tuberculosis? Vaccine. 2015;33(39):5035-41 AERAS. GLOBAL CLINICAL PIPELINE OF TB VACCINE CANDIDATES.Information is self-reported by vaccine sponsors. 26/2017. Available from: http://www.aeras.org/annualreport2016. Agger EM, Cassidy JP, Brady J, Korsholm KS, Vingsbo‐Lundberg C, Andersen P. Adjuvant modulation of the cytokine balance in Mycobacterium tuberculosis subunit vaccines; immunity, pathology and protection. Immunology. 2008;124(2):175-85. Petrovsky N, Aguilar JC. Vaccine adjuvants: current state and future trends. Immunology and cell biology. 2004;82(5):488. Cole S, Brosch R, Parkhill J, Garnier T, Churcher C, Harris D, et al. Erratum: Deciphering the biology of Mycobacterium tuberculosis from the complete genome sequence. Nature. 1998;396(6707):190 Song H, Sandie R, Wang Y, Andrade-Navarro MA, Niederweis M. Identification of outer membrane proteins of Mycobacterium tuberculosis. Tuberculosis. 2008;88(6):526-44. Vizcaíno C, Restrepo-Montoya D, Rodríguez D, Niño LF, Ocampo M, Vanegas M, et al. Computational prediction and experimental assessment of secreted/surface proteins from Mycobacterium tuberculosis H37Rv. PLoS computational biology. 2010;6(6):e1000824 Patarroyo MA, Curtidor H, Plaza DF, Ocampo M, Reyes C, Saboya O, et al. Peptides derived from the Mycobacterium tuberculosis Rv1490 surface protein implicated in inhibition of epithelial cell entry: Potential vaccine candidates? Vaccine. 2008;26(34):4387-95. Ocampo M, Aristizábal-Ramírez D, Rodríguez DM, Muñoz M, Curtidor H, Vanegas M, et al. The role of Mycobacterium tuberculosis Rv3166c protein-derived high-activity binding peptides in inhibiting invasion of human cell lines. Protein Engineering, Design & Selection. 2012;25(5):235-42. Forero M, Puentes A, Cortés J, Castillo F, Vera R, Rodríguez LE, et al. Identifying putative Mycobacterium tuberculosis Rv2004c protein sequences that bind specifically to U937 macrophages and A549 epithelial cells. Protein science. 2005;14(11):2767-80. Rodríguez DC, Ocampo M, Reyes C, Arévalo‐Pinzón G, Munoz M, Patarroyo MA, et al. Cell‐Peptide Specific Interaction Can Inhibit Mycobacterium tuberculosis H37Rv Infection. Journal of cellular biochemistry. 2016;117(4):946-58. Ocampo M, Curtidor H, Vanegas M, Patarroyo MA, Patarroyo ME. Specific Interaction between Mycobacterium tuberculosis Lipoprotein‐derived Peptides and Target Cells Inhibits Mycobacterial Entry In Vitro. Chemical biology & drug design. 2014;84(6):626- Plaza DF, Curtidor H, Patarroyo MA, Chapeton‐Montes JA, Reyes C, Barreto J, et al. The Mycobacterium tuberculosis membrane protein Rv2560− biochemical and functional studies. The FEBS journal. 2007;274(24):6352-64. The FEBS journal. 2007;274(24):6352-64. 50. Rodríguez DC, Ocampo M, Varela Y, Curtidor H, Patarroyo MA, Patarroyo ME. Mce4F Mycobacterium tuberculosis protein peptides can inhibit invasion of human cell lines. Pathogens and disease. 2015;73(3) Rodríguez DM, Ocampo M, Curtidor H, Vanegas M, Patarroyo ME, Patarroyo MA. Mycobacterium tuberculosis surface protein Rv0227c contains high activity binding peptides which inhibit cell invasion. Peptides. 2012;38(2):208-16 Rodríguez D, Vizcaíno C, Ocampo M, Curtidor H, Pinto M, Elkin Patarroyo M, et al. Peptides from the Mycobacterium tuberculosis Rv1980c protein involved in human cell infection: insights into new synthetic subunit vaccine candidates. Biological chemistry. 2010;391(2/3):207-17 Profile BSD, Workstation BO, Controller BB, Controller BAS, Sensor BS. Product description. Migration. 2011;3:4. Bøyum A. Separation of white blood cells. Nature. 1964;204(4960):793-4. Profile BSD, Workstation BO, Controller BB, Controller BAS, Sensor BS. Product description. Migration2011. p. 4. Denizot F, Lang R. Rapid colorimetric assay for cell growth and survival: modifications to the tetrazolium dye procedure giving improved sensitivity and reliability. Journal of immunological methods. 1986;89(2):271-7. Parish CR, Glidden MH, Quah BJ, Warren HS. Use of the intracellular fluorescent dye CFSE to monitor lymphocyte migration and proliferation. Current protocols in immunology. 2009:4.9. 1-4.9. 13. Quah BJ, Warren HS, Parish CR. Monitoring lymphocyte proliferation in vitro and in vivo with the intracellular fluorescent dye carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester. Nature protocols. 2007;2(9):2049. Martinez P, Lopez C, Saravia C, Vanegas M, Patarroyo MA. Evaluation of the antigenicity of universal epitopes from PvDBPII in individuals exposed to Plasmodium vivax malaria. Microbes and infection. 2010;12(14-15):1188-97. Arenas-Ramirez N, Woytschak J, Boyman O. Interleukin-2: biology, design and application. Trends in immunology. 2015;36(12):763-77 Revelen R, D Arbonneau F, Guillevin L, Bordron A, Youinou P, Dueymes M. Comparison of cell-ELISA, flow cytometry and Western blotting for the detection of antiendothelial cell antibodies. Clinical and experimental rheumatology. 2002;20(1):19-26. Nguyen XD, Eichler H, Dugrillon A, Piechaczek C, Braun M, Klüter H. Flow cytometric analysis of T cell proliferation in a mixed lymphocyte reaction with dendritic cells. Journal of immunological methods. 2003;275(1-2):57-68. Behr MA. Comparative genomics of mycobacteria: some answers, yet more new questions. Cold Spring Harbor perspectives in medicine. 2015;5(2):a021204. Cáceres SM, Ocampo M, Arévalo-Pinzón G, Jimenez RA, Patarroyo ME, Patarroyo MA. The Mycobacterium tuberculosis membrane protein Rv0180c: evaluation of peptide sequences implicated in mycobacterial invasion of two human cell lines. Peptides. 2011;32(1):1-10. |
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Rodríguez Lancheros, Deisy Carolina6e8f4d046e47cad05c0042cd574a7a28Rodríguez Lancheros, Deisy Carolina6e8f4d046e47cad05c0042cd574a7a28Hernández Rojas, Edith Del Carmenbca0adf32f76bf23e6eef2dd4eaa979cTonguino Quiñonez, Erika Tatianabd63f7b64abe310e5585b93d7c45fdf72022-03-10T14:13:23Z2022-03-10T14:13:23Z2018https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/480158423Teniendo en cuenta que la tuberculosis es una enfermedad infecciosa causada principalmente por el bacilo Mycobacterium tuberculosis, el cual infecta con mayor frecuencia los pulmones debido a que es transmitida por aerosoles (Tuberculosis pulmonar), además de afectar otros órganos (Tuberculosis extrapulmonar), y considerada después del SIDA como la segunda causa de muerte a nivel mundial, la Fundación Instituto de Inmunología de Colombia ha desarrollado una metodología lógica y racional para el diseño de vacunas sintéticas, la cual ha tenido éxito en estudios con malaria. Los avances obtenidos en el desarrollo de vacuna antituberculosa han permitido establecer péptidos de alta unión específica a células blanco (HABPs), que además inhiben la entrada de la micobacteria en ensayos in vitro, los cuales han sido postulados para estudios como posibles candidatos a vacuna. Dando continuidad a dicha metodología, en este proyecto mediante ensayos de linfoproliferación se evaluó parte de la respuesta inmune celular generada por péptidos sintéticos derivados de proteínas de Mycobacterium tuberculosis H37Rv ante PBMC de 8 individuos clasificados por prueba de QuantiFERON Qf (4Qf+ y 4Qf-), determinando que la mayoría de los péptidos sintéticos importantes en la interacción hospedero-patógeno no son inmunogénicos. Se estableció que los péptidos que hacen parte de las proteínas Rv0180c (31039), Rv2270 (37777) y Rv3494c (38373) estimulan la linfoproliferación de linfocitos de por lo menos 3 de los 4 individuos clasificados como Qf+, y a su vez que los resultados obtenidos contribuyen a una posible técnica de diagnóstico para diferenciar pacientes que hayan tenido contacto con M. tuberculosis de pacientes que noRESUMEN 10 INTRODUCCIÓN 12 1. MARCO REFERENCIAL 15 1.1 Epidemiologia de la tuberculosis 15 1.2 Generalidades de la tuberculosis 16 1.2.1 El género Mycobacterium 16 1.2.2 Mycobacterium tuberculosis 18 1.2.3 Respuesta inmune ante M. tuberculosis 22 1.2.4 Diagnóstico de la enfermedad 25 1.2.4.1 Criterio clínico 25 1.2.4.2 Criterio bacteriológico 26 • Baciloscopia 26 • Cultivo bacteriano 27 1.2.4.3 Criterio radiológico 28 1.2.4.4 Criterio epidemiológico 29 1.2.4.5 Criterio tuberculínico 29 1.2.4.6 Criterio histopatológico 30 1.2.4.7 Ensayos de liberación de interferón gamma 30 1.2.5 Fármacos antituberculosos 31 1.2.6. Desarrollo de vacunas contra la tuberculosis 32 2. OBJETIVOS 36 2.1 General 36 2.2. Específicos 36 3. DISEÑO METODOLOGICO 37 3.1 Universo, Población, Muestra 37 3.2. Selección de péptidos 37 3.3 Obtención de muestras de sangre periférica 38 3.4 Separación de células mononucleares de sangre periférica (PBMC )38 3.5 Ensayos de Linfoproliferación 40 3.5.1 Ensayos preliminares utilizando MTT 40 3.5.2 Ensayos utilizando CFSE 42 3.5.3 Procesamiento y análisis de datos 44 4. RESULTADOS 45 4.1 Selección de péptidos 45 4.2 Obtención de PBMC 47 4.3 Ensayos de Linfoproliferación 47 4.3.1 Ensayos preliminares utilizando MTT 47 4.3.2 Ensayos utilizando CFSE 49 5. DISCUSIÓN 53 6. CONCLUSIONES 57 7. RECOMENDACIONES 58 8. BIBLIOGRAFIA 59PregradoBacteriólogo(a) y Laboratorista Clínico68p.application/pdfspaUniversidad Colegio Mayor de CundinamarcaFacultad de Ciencias de la SaludBogotá D.CBacteriología y Laboratorio ClínicoDerechos Reservados - Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2018https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/info:eu-repo/semantics/closedAccessAtribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0)http://purl.org/coar/access_right/c_14cbDeterminación de respuesta inmune celular generada por péptidos sintéticos derivados de proteínas de Mycobacterium Tuberculosis H37rvTrabajo de grado - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fhttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85Textinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesishttps://purl.org/redcol/resource_type/TPinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionKovacs-Simon A, Titball R, Michell SL. Lipoproteins of bacterial pathogens. Infection and immunity. 2011;79(2):548-61.WHO. Global Tuberculosis Report. Report. World Health Organization, 2017.Enfermedades CpeCylPdl. Factores de Riesgo de la Tuberculosis. 01-02-2018; Available from: https://www.cdc.gov/tb/esp/topic/basics/risk.htm.Fine PE. Variation in protection by BCG: implications of and for heterologous immunity. The Lancet. 1995;346(8986):1339-45.Evans TG, Brennan MJ, Barker L, Thole J. Preventive vaccines for tuberculosis. Vaccine. 2013;31:B223-B6.Lozano JM, Patarroyo ME. A rational strategy for a malarial vaccine development. Microbes and infection. 2007;9(6):751-60.Patarroyo ME, Patarroyo MA. Emerging rules for subunit-based, multiantigenic, multistage chemically synthesized vaccines. Accounts of chemical research. 2008;41(3):377-86.atarroyo M, Cifuentes G, Bermudez A, Patarroyo M. Strategies for developing multi‐ epitope, subunit‐based, chemically synthesized anti‐malarial vaccines. Journal of cellular and molecular medicine. 2008;12(5b):1915-35.Patarroyo ME, Cifuentes G, Martínez NL, Patarroyo MA. Atomic fidelity of subunitbased chemically-synthesized antimalarial vaccine components. Progress in biophysics and molecular biology. 2010;102(1):38-44.Cifuentes G, Bermudez A, Rodriguez R, Patarroyo M, Patarroyo M. Shifting the polarity of some critical residues in malarial peptides' binding to host cells is a key factor in breaking conserved antigens' code of silence. Medicinal Chemistry. 2008;4(3):278-9Ocampo M, Patarroyo MA, Vanegas M, Alba MP, Patarroyo ME. Functional, biochemical and 3D studies of Mycobacterium tuberculosis protein peptides for an effective anti-tuberculosis vaccine. Critical reviews in microbiology. 2014;40(2):117-45.Dorronsoro I, Torroba L, editors. Microbiología de la tuberculosis. Anales del sistema sanitario de Navarra; 2007: SciELO Espana.ario de Navarra; 2007: SciELO Espana. 13. Chan VL. Bacterial genomes and infectious diseases. Pediatric research. 2003;54(1):1-7.García JG, Gutiérrez JP, Antuña AS. Respiratory infections caused by environmental mycobacteria. 2005 [cited 41 4]; 206-19]. Available from: http://www.aeras.org/annualreport2016.L. B. The Basic of Clinical Bacteriology. In: Palomino JC CLS, Ritacco V Editors, editor. 2007;Tuberculosis 2007: From basic science to patient care 2007.Kaur D, Guerin ME, Škovierová H, Brennan PJ, Jackson M. Biogenesis of the cell wall and other glycoconjugates of Mycobacterium tuberculosis. Advances in applied microbiology. 2009;69:23-78Gonzalo-A.Jesus MD, Martin Carlos and Aguilo Nacho. MTBVAC: Attenuating the Human Pathogen of Tuberculosis (TB) Toward a Promising Vaccine against the TB Epidemic. 2017.Brennan PJ. Structure, function, and biogenesis of the cell wall of Mycobacterium tuberculosis. Tuberculosis. 2003;83(1):91-7.Trabajo INdSeHee. Mycobacterium tuberculosis: viabilidad, propagación y transmisión Instituto Nacional de Seguridad e Higiene en el Trabajo, 23 de Septiembre de 2012Kaufmann SH. How can immunology contribute to the control of tuberculosis? Nature reviews Immunology. 2001;1(1):20.Cosma CL, Sherman DR, Ramakrishnan L. The secret lives of the pathogenic mycobacteria. Annual Reviews in Microbiology. 2003;57(1):641-76.Garcıá -Pérez BE, Mondragón-Flores R, Luna-Herrera J. Internalization of Mycobacterium tuberculosis by macropinocytosis in non-phagocytic cells. Microbial pathogenesis. 2003;35(2):49-55Russell DG. Who puts the tubercle in tuberculosis? Nature Reviews Microbiology. 2007;5(1):39.Kaufmann SH, Hussey G, Lambert P-H. New vaccines for tuberculosis. The Lancet. 2010;375(9731):2110-9Schaible UE, Winau F, Sieling PA, Fischer K, Collins HL, Hagens K, et al. Apoptosis facilitates antigen presentation to T lymphocytes through MHC-I and CD1 in tuberculosis. Nature medicine. 2003;9(8):1039Figueroa MCEG-S. Respuesta Inmune a la infección por Mycobacterium tuberculosis. Una revisión de la literatura. Rev Inst Nal Enf Resp Mex. 2001;14(2):114-28.Goicochea CR, Castillo SB, Tarazona PC, Narvaez CC, Última JC, Última RC, et al. Asociación de criterios de Stegen modificado por Toledo para el diagnóstico de tuberculosis pediátrica, Hospital Belén de Trujillo. UCV-SCIENTIA. 2015;4(1):64-71.Tincopa Wong OW, Castro L, Lelie K, Plasencia Angulo WF, Valverde López JC. Tuberculosis cutánea: Rasgos clínicos, histopatológicos y epidemiológicos en un Hospital General de Trujillo, Perú. Dermatol peru. 2006;16(3):220-32.Abbate E, Vescovo M, Natiello M, Cufré M, García A, Ambroggi M, et al. Tuberculosis extensamente resistente (XDR-TB) en Argentina: aspectos destacables epidemiológicos, bacteriológicos, terapéuticos y evolutivo. 2007Cavanaugh JS, Shah NS, Cain KP, Winston CA. Survival among Patients with HIV Infection and Smear-Negative Pulmonary Tuberculosis-United States, 1993–2006. PLoS One. 2012;7(10):e47855Arteaga Arteaga A, Vélez Moncada E, Salazar Blanco OF, Morales Múnera OL, Cornejo Ochoa JW, Valencia Pino DC. Clinical and sociodemographic characteristics of children, younger than 13 years, with or without a confirmed diagnosis of pulmonary tuberculosis, at Hospital Universitario San Vicente de Paúl, Medellín, Colombia, 2007-2008. Iatreia. 2010;23(3):227-39.Abbate EH, Palmero DJ, Castagnino J, Cufre M, Doval A, Estevan R, et al. Tratamiento de la tuberculosis: Guía práctica elaborada por la Sección Tuberculosis, Asociación Argentina de Medicina Respiratoria. Medicina (Buenos Aires). 2007;67(3):295- 305Garzón MC, Angée DY, Llerena C, Orjuela DL, Victoria JE. Vigilancia de la resistencia del Mycobacterium tuberculosis a los fármacos antituberculosos, Colombia 2004-2005. Biomédica. 2008;28(3):319-26Arias Guillén M, Palomar R, Arias M. Avances en el diagnóstico de la infección tuberculosa latente en pacientes en tratamiento renal sustitutivo. Nefrología (Madrid). 2011;31(2):137-41.Cardoso EM. Multiple drug resistance: a threat for tuberculosis control. Revista Panamericana de Salud Pública. 2004;16(1):68-73.Ramakrishnan L. Revisiting the role of the granuloma in tuberculosis. Nature reviews Immunology. 2012;12(5):352.Moliva JI, Turner J, Torrelles JB. Prospects in Mycobacterium bovis Bacille Calmette et Guerin (BCG) vaccine diversity and delivery: why does BCG fail to protect against tuberculosis? Vaccine. 2015;33(39):5035-41AERAS. GLOBAL CLINICAL PIPELINE OF TB VACCINE CANDIDATES.Information is self-reported by vaccine sponsors. 26/2017. Available from: http://www.aeras.org/annualreport2016.Agger EM, Cassidy JP, Brady J, Korsholm KS, Vingsbo‐Lundberg C, Andersen P. Adjuvant modulation of the cytokine balance in Mycobacterium tuberculosis subunit vaccines; immunity, pathology and protection. Immunology. 2008;124(2):175-85.Petrovsky N, Aguilar JC. Vaccine adjuvants: current state and future trends. Immunology and cell biology. 2004;82(5):488.Cole S, Brosch R, Parkhill J, Garnier T, Churcher C, Harris D, et al. Erratum: Deciphering the biology of Mycobacterium tuberculosis from the complete genome sequence. Nature. 1998;396(6707):190Song H, Sandie R, Wang Y, Andrade-Navarro MA, Niederweis M. Identification of outer membrane proteins of Mycobacterium tuberculosis. Tuberculosis. 2008;88(6):526-44.Vizcaíno C, Restrepo-Montoya D, Rodríguez D, Niño LF, Ocampo M, Vanegas M, et al. Computational prediction and experimental assessment of secreted/surface proteins from Mycobacterium tuberculosis H37Rv. PLoS computational biology. 2010;6(6):e1000824Patarroyo MA, Curtidor H, Plaza DF, Ocampo M, Reyes C, Saboya O, et al. Peptides derived from the Mycobacterium tuberculosis Rv1490 surface protein implicated in inhibition of epithelial cell entry: Potential vaccine candidates? Vaccine. 2008;26(34):4387-95.Ocampo M, Aristizábal-Ramírez D, Rodríguez DM, Muñoz M, Curtidor H, Vanegas M, et al. The role of Mycobacterium tuberculosis Rv3166c protein-derived high-activity binding peptides in inhibiting invasion of human cell lines. Protein Engineering, Design & Selection. 2012;25(5):235-42.Forero M, Puentes A, Cortés J, Castillo F, Vera R, Rodríguez LE, et al. Identifying putative Mycobacterium tuberculosis Rv2004c protein sequences that bind specifically to U937 macrophages and A549 epithelial cells. Protein science. 2005;14(11):2767-80.Rodríguez DC, Ocampo M, Reyes C, Arévalo‐Pinzón G, Munoz M, Patarroyo MA, et al. Cell‐Peptide Specific Interaction Can Inhibit Mycobacterium tuberculosis H37Rv Infection. Journal of cellular biochemistry. 2016;117(4):946-58.Ocampo M, Curtidor H, Vanegas M, Patarroyo MA, Patarroyo ME. Specific Interaction between Mycobacterium tuberculosis Lipoprotein‐derived Peptides and Target Cells Inhibits Mycobacterial Entry In Vitro. Chemical biology & drug design. 2014;84(6):626-Plaza DF, Curtidor H, Patarroyo MA, Chapeton‐Montes JA, Reyes C, Barreto J, et al. The Mycobacterium tuberculosis membrane protein Rv2560− biochemical and functional studies. The FEBS journal. 2007;274(24):6352-64.The FEBS journal. 2007;274(24):6352-64. 50. Rodríguez DC, Ocampo M, Varela Y, Curtidor H, Patarroyo MA, Patarroyo ME. Mce4F Mycobacterium tuberculosis protein peptides can inhibit invasion of human cell lines. Pathogens and disease. 2015;73(3)Rodríguez DM, Ocampo M, Curtidor H, Vanegas M, Patarroyo ME, Patarroyo MA. Mycobacterium tuberculosis surface protein Rv0227c contains high activity binding peptides which inhibit cell invasion. Peptides. 2012;38(2):208-16Rodríguez D, Vizcaíno C, Ocampo M, Curtidor H, Pinto M, Elkin Patarroyo M, et al. Peptides from the Mycobacterium tuberculosis Rv1980c protein involved in human cell infection: insights into new synthetic subunit vaccine candidates. Biological chemistry. 2010;391(2/3):207-17Profile BSD, Workstation BO, Controller BB, Controller BAS, Sensor BS. Product description. Migration. 2011;3:4.Bøyum A. Separation of white blood cells. Nature. 1964;204(4960):793-4.Profile BSD, Workstation BO, Controller BB, Controller BAS, Sensor BS. Product description. Migration2011. p. 4.Denizot F, Lang R. Rapid colorimetric assay for cell growth and survival: modifications to the tetrazolium dye procedure giving improved sensitivity and reliability. Journal of immunological methods. 1986;89(2):271-7.Parish CR, Glidden MH, Quah BJ, Warren HS. Use of the intracellular fluorescent dye CFSE to monitor lymphocyte migration and proliferation. Current protocols in immunology. 2009:4.9. 1-4.9. 13.Quah BJ, Warren HS, Parish CR. Monitoring lymphocyte proliferation in vitro and in vivo with the intracellular fluorescent dye carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester. Nature protocols. 2007;2(9):2049.Martinez P, Lopez C, Saravia C, Vanegas M, Patarroyo MA. Evaluation of the antigenicity of universal epitopes from PvDBPII in individuals exposed to Plasmodium vivax malaria. Microbes and infection. 2010;12(14-15):1188-97.Arenas-Ramirez N, Woytschak J, Boyman O. Interleukin-2: biology, design and application. Trends in immunology. 2015;36(12):763-77Revelen R, D Arbonneau F, Guillevin L, Bordron A, Youinou P, Dueymes M. Comparison of cell-ELISA, flow cytometry and Western blotting for the detection of antiendothelial cell antibodies. Clinical and experimental rheumatology. 2002;20(1):19-26.Nguyen XD, Eichler H, Dugrillon A, Piechaczek C, Braun M, Klüter H. Flow cytometric analysis of T cell proliferation in a mixed lymphocyte reaction with dendritic cells. Journal of immunological methods. 2003;275(1-2):57-68.Behr MA. Comparative genomics of mycobacteria: some answers, yet more new questions. Cold Spring Harbor perspectives in medicine. 2015;5(2):a021204.Cáceres SM, Ocampo M, Arévalo-Pinzón G, Jimenez RA, Patarroyo ME, Patarroyo MA. The Mycobacterium tuberculosis membrane protein Rv0180c: evaluation of peptide sequences implicated in mycobacterial invasion of two human cell lines. Peptides. 2011;32(1):1-10.TuberculosisMycobacterium tuberculosis H37RvPéptidos sintéticosHABPsPBMCInfoproliferaciónORIGINALEscrito Final Tesis Erika Tonguino.pdfEscrito Final Tesis Erika Tonguino.pdfapplication/pdf2798184https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/4801/1/Escrito%20Final%20Tesis%20Erika%20Tonguino.pdf4578e224439f694b8f26a6aed495cf96MD51open accessEscrito Final Tesis Erika Tonguino FORMATO DERECHOS DE AUTOR.pdfEscrito Final Tesis Erika Tonguino FORMATO DERECHOS DE AUTOR.pdfapplication/pdf225002https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/4801/2/Escrito%20Final%20Tesis%20Erika%20Tonguino%20FORMATO%20DERECHOS%20DE%20AUTOR.pdf027ea62d344ae660ffe6d855cad9d4dcMD52metadata only accessSustentacion Erika Tonguino.pdfSustentacion Erika Tonguino.pdfapplication/pdf4631909https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/4801/3/Sustentacion%20Erika%20Tonguino.pdfaaae591d7df240c6ee8cd282297741e2MD53open accessLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-814828https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/4801/4/license.txt2f9959eaf5b71fae44bbf9ec84150c7aMD54open accessTEXTEscrito Final Tesis Erika Tonguino.pdf.txtEscrito Final Tesis Erika Tonguino.pdf.txtExtracted texttext/plain85570https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/4801/5/Escrito%20Final%20Tesis%20Erika%20Tonguino.pdf.txtef684bb97d309787f1c6ed8b9df10b9bMD55open accessEscrito Final Tesis Erika Tonguino FORMATO DERECHOS DE AUTOR.pdf.txtEscrito Final Tesis Erika Tonguino FORMATO DERECHOS DE AUTOR.pdf.txtExtracted texttext/plain10https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/4801/7/Escrito%20Final%20Tesis%20Erika%20Tonguino%20FORMATO%20DERECHOS%20DE%20AUTOR.pdf.txt46afca8b2ab62d66ffa30323984c6092MD57metadata only accessSustentacion Erika Tonguino.pdf.txtSustentacion Erika Tonguino.pdf.txtExtracted texttext/plain11221https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/4801/9/Sustentacion%20Erika%20Tonguino.pdf.txt32e94e975461baddc0af6744f6234bd4MD59open accessTHUMBNAILEscrito Final Tesis Erika Tonguino.pdf.jpgEscrito Final Tesis Erika Tonguino.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg6862https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/4801/6/Escrito%20Final%20Tesis%20Erika%20Tonguino.pdf.jpg071c9c0fc8930b7b31ee18387f3b4269MD56open accessEscrito Final Tesis Erika Tonguino FORMATO DERECHOS DE AUTOR.pdf.jpgEscrito Final Tesis Erika Tonguino FORMATO DERECHOS DE AUTOR.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg6186https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/4801/8/Escrito%20Final%20Tesis%20Erika%20Tonguino%20FORMATO%20DERECHOS%20DE%20AUTOR.pdf.jpg67faa54c449179dd87cb213726210007MD58metadata only accessSustentacion Erika Tonguino.pdf.jpgSustentacion Erika Tonguino.pdf.jpgGenerated 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