Re - sensibilización de escherichia coli y pseudomonas aeruginosa por edición de genes asociados a multirresistencia antibiótica implementando crispr cas9.
La panresistencia (PDR), multirresistencia (MDR) y resistencia extrema (XDR) a antibióticos, es un problema de salud pública mundial, las alertas globales están encendidas por la expansión de mecanismos intrínsecos y extrínsecos que tienen y desarrollan los procariotas para contrarrestar los efectos...
- Autores:
-
García Espinosa, Yudy Catalina
- Tipo de recurso:
- Trabajo de grado de pregrado
- Fecha de publicación:
- 2019
- Institución:
- Colegio Mayor de Cundinamarca
- Repositorio:
- Repositorio Colegio Mayor de Cundinamarca
- Idioma:
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- OAI Identifier:
- oai:repositorio.unicolmayor.edu.co:unicolmayor/289
- Acceso en línea:
- https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/289
- Palabra clave:
- Infección bacteriana
Resistencia antibiótica
bacteriología
Escherichia coli
Pseudomonas aeruginosa
CRISPR/Cas9
Panresistencia
Multiresistencia
Resistencia Extendida
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- openAccess
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- Derechos Reservados -Universidad Colegio Myor de Cundinamarca ,2019
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Escherichia coli Pseudomonas aeruginosa CRISPR/Cas9 Panresistencia Multiresistencia Resistencia Extendida Transferencia horizontal de genes |
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La panresistencia (PDR), multirresistencia (MDR) y resistencia extrema (XDR) a antibióticos, es un problema de salud pública mundial, las alertas globales están encendidas por la expansión de mecanismos intrínsecos y extrínsecos que tienen y desarrollan los procariotas para contrarrestar los efectos de los fármacos antimicrobianos. Dentro de las habilidades extrínsecas de las bacterias está la transmisión horizontal de genes por plásmidos (THG), un mecanismo que es punto clave a controlar en la lucha contra las infecciones bacterianas. Dos de los microorganismos prioritarios que requieren nuevos antibióticos, son Pseudomonas aeruginosa y las variedades de E. coli que han adquirido resistencia a antibióticos. Esta revisión bibliográfica, tiene como objetivo general, evidenciar que la tecnología Cris Cas 9 puede ser una herramienta clave a emplearse para mitigar la resistencia a antibióticos relacionada con THG en las bacterias Gram negativas Escherichia coli (E. coli) y Pseudomonas aeruginosa (P. Aeruginosa), que son un problema de salud pública a nivel intrahospitalario en Colombia; por medio de su re- sensibilización, al editar genes asociados a resistencia antibiótica con la herramienta CRISPR Cas9; la metodología consistio en una revisión bibliográfica de artículos recientes en bases de datos con validez científica, que dan cuenta que se ha logrado en este campo, describiendo sus resultados y acercándonos a sus implicaciones y alcances. Los criterios de búsqueda fueron artículos desde el año 2010 en revistas indexadas es español o inglés que pudieran obtenerse completos para su análisis, que evaluaran la re-sensibilización de bacterias Gram negativas y cuya metodología fuera asociada a CRISPR Cas9; se demostró que las bacterias E- coli multirresistente y P.aeruginosa extremadamente resistente pueden recuperar su suceptibilidad inicial a antibióticos por varias vías de edición con CRISPR Cas 9. Entiéndase re - sensibilización como todo proceso de edición genética que al ser empleado en una cepa bacteriana que había adquirido previamente multirresistencias a antibióticos por transmisión horizontal de plásmidos, demuestre haber devuelto a dicha bacteria sus características previas a la adquisición de esta información de resistencia frente a antibióticos, volviéndola nuevamente susceptible |
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1 Fergus Walsh. Antibiotic resistence as 'serious as terrorism'. The Western Morning News 2013 Mar 11:16. Disponible en: https://www.bbc.com/news/health-21 2 Vigilancia de infecciones asociadas a la atención en salud, resistencia bacteriana y consumo De antibióticos en hospitales de alta complejidad, Colombia, 2011 alera D Barrero L Villalobos A Rivera S Ovalle M. Biomédica 2013. Biomédica Revista del Instituto Nacional de Salud. Vol. 34 (2014): Suplemento 1, Resistencia bacteriana ISSN: 0120-4157. Disponible en: Disponible en: https://doi.org/10.7705/biomedica.v34i0.1698 3 Sun L, He T, Zhang L. et al. Generation of newly discovered resistance gene mcr-1 knockout in E. coli using the CRISPR/Cas9 system. Journal of Microbiology and Biotechnology. 2017 vol: 27 (7) pp: 1276-1280. Disponible en: https://www.mendeley.com/viewer/?fileId=29f38258-094b-4713-1e63-030887be1fab&documentId=5ec249cf-64e0-3e1d-86b7-124893491bb3 4 González L Cortés J. Revisión sistemática de la resistencia antimicrobiana en enterobacterias en aislamientos intrahospitalarios en Colombia. Biomédica 34 (2), 180-197, 2014. Disponible en: https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=84330907005 5 Espinosa C Cortés J Castillo J Leal A. Revisión sistemática de la resistencia antimicrobiana en cocos Gram positivos intrahospitalarios en Colombia. Biomédica 31 (1), 27-34, 2011. Disponible en: https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=84322444005 6 Moncayo Medina A. Antibiotic resistance and the lack of interest by the pharmaceutical industry. ScienceDirect Volume 18, Issue 2, April-June 2014, Pages 35-36. Disponible en: https://doi.org/10.1016/j.infect.2014.02.003 7 Ceasar S, Rjan V, Prykhozhij S, Berman J. Ignacimuthu S. Insert, remove or replace: A highly advanced genome editing system using CRISPR/Cas9. Biochimica et Biophysica Acta - Molecular Cell Research. Publisher:Elsevier B.V vol:1863 (9) pp: 2333-2344.2016. Disponible en: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0167488916301781?via%3Dihub 8 De La Fuente Nuñez C. ; Lu T. CRISPR-Cas9 technology: applications in genome engineering, development of secuence-specific antimicrobials, and future prospects. Integrative Biology (United Kingdom) 2017 vol. 9 (2) pp: 109 - 122. Disponible en: Doi:10.1039/c6ib00140h 9 Kim J, Cho D, Park M. et al. Crispr/Cas9- mediated resensitizacion of antibiotic-resistant E. coli harboring extended-spectrum B-lactamases. Journal of Micriobiology and Biotechnology. 2015 vol: 26 (2) pp: 394-401. Disponible en: https://www.mendeley.com/viewer/?fileId=4638e4c6-88df-549f-2bbb- 6d292c7e2dbb&documentId=d241b8d4-b4f5-3ef2-bfa8-cda38989a154 10 Qiu H. Gong, Butaye P, Lu G. et al. CRISPR/Cas9/sgRNA-mediated targeted gene modification confirms the cause-effect relationship between gyrA mutation and quinolone resistance in E. coli. FEMS Microbiology Letters Publisher Oxford University Press. 2018 vol: 365 (13). Disponible en: https://academic.oup.com/femsle/advance-article-abstract/doi/10.1093/femsle/fny127/4995911 11 Weizhong Chen, Ya Zhang et al. CRISPR/Cas9- based Genome Editing in Pseudomonas aeruginosa and CytidineDeaminase- Mediated Base Editing in Pseudomonas Species. iScience 6, 222.231, August 31, 2018. Disponible en: http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/ 12 Ishino, Y., Shinagawa, H., Makino, K., Amemura, M., & Nakatura, A. (1987). Nucleotide sequence of the iap gene, responsible for alkaline phosphatase isoenzyme conversion in Escherichia coli, and identification of the gene product. Journal of Bacteriology, 169(12), 5429–5433. Disponible en: https://www.mendeley.com/catalogue/nucleotide-sequence-iap-gene-responsible-alkaline-phosphatase-isoenzyme-conversion-escherichia-coli/ 13 Tomado de internet: http://amyd.quimica.unam.mx/pluginfile.php/9322/mod_resource/content/1/CRISPR%20C AS9.pdf 14 Mojica F, Díez-Villaseñor C, Soria E, Juez G. Biological significance of a family of regularly spaced repeats in the genomes of Archaea, Bacteria and mitochondria. Molecular Microbiology. 2000. 15 Tomado de internet: http://fundacion-antama.org/historia-del-desarrollo-de-la-tecnologia-cripsr-cas/ 16 Rodolphe Barrangou, Christophe Fremaux, Heléne Deveau et al. CRISPR Provides Acquired Resistance Against Viruses in Prokaryotes. Science 23 Mar. 2007: Vol. 315, Issue 5819, pp. 1709-1712. Disponible en: https://science.sciencemag.org/content/315/5819/1709 17 Deveau, H., Barrangou, R., Garneau, J. E., Labonté, J., Fremaux, C., Boyaval, P., Moineau, S. (2008). Phage response to CRISPR-encoded resistance in Streptococcus thermophilus. Journal of bacteriology, 190(4), 1390–1400. doi:10.1128/JB.01412-07. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2238228 18 Doudna, J.A., y Charpentier, E. The new frontier of genome engineering with CRISPR/Cas9. Science. American Associatin for the Advancement of Science. 2014. Disponible en: https://doi.org/10.1126/science.1258096 19 Huang Z, Tomitaka A, Raymond A, Nair M. Current application of CRISPR/Cas9 gene-editing technique to eradication of HIV/AIDS. Gene Ther 2017 07;24(7):377-384. Disponible en: https://nature.com/articles/gt201735 20 Bier E, Harrison M, O’connor- Giles K, Wildonger J. Advances in engineering the fly genome with the CRISPR-Cas system. GENETICS January 1, 2018 vol. 208 no. 1 1-18. Disponible en: https://doi.org/10.1534/genetics.117.1113 21 Kolli N Lu M Maiti P Rossignol J Dunbar G International Journal of Molecular Sciences 2017 vol: 18 (4). Disponible en: https://doi.org/10.3390/ijms18040754 22 Jusiak B Cleto S Perez-Piñera P Lu T Trends in Biotechnology Publisher: Elsevier Ltd 2016 vol: 34 (7) pp: 535-547. Disponible en: https://doi.org/10.1016/j.tibtech.2015.12.014 23 Idoko-Akoh Alewo, Taylor Lorna, <...>, McGrew Michael J. High fidelity 84 CRISPR/Cas9 increases precise monoallelic and biallelic editing events in primordial germ cells.Scientific Reports, Nature Publishing Group (2018) 8:15126. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC61811960/ 24 Tomado de internet: http:www.who.int/mediacentre/factsheets/fs194/es/index.html 25 Esparza Germán. Conferencia: Bacilos Gram Negativos Panresistentes. Aspectos Diagnósticos, Terapéuticos y Epidemiológicos. Asociación Colombiana de Infectología (ACIN). 2016 Disponible en: https://youtu.be/MEf0U9k6pxc 26 Hernández-Gómez C Blanco V Motoa G Correa A Maya J De la Cadena E Perengüez M Rojas L Hernández A Vallejo M Villegas M.Evolución de la resistencia antimicrobiana de bacilos Gram negativos en unidades de cuidados intensivos en Colombia. Biomédica Revista del Instituto Nacional de Salud. Vol. 34 (2014): Suplemento 1, Resistencia bacteriana ISSN: 0120-4157. Disponible en: https://doi.org/10.7705/biomedica.v34i0.1667 27 Fair, R. J., & Tor, Y. (2014). Antibiotics and bacterial resistance in the 21st century. Perspectives in medicinal chemistry, 6, 25–64. doi:10.4137/PMC.S14459 28 Argyris Michalopoulos,Matthew E.Falagas. colistin and polymyxin B in critical care crit. care crit. Care Clin 24 (2008). 29 Tomado de internet: https://es.slideshare.net/mobile/josemiguelunerg/resistencia-bacteriana-79164438 30 Nordmann, Patrice & Dortet, Laurent & Poirel, Laurent. (2012). Carbapenem resistance in Enterobacteriaceae: Here is the storm!. Trends in molecular medicine. 18. 263-72. 10.1016/j.molmed.2012.03.003. Disponible en: file:///C:/Users/usuario/Downloads/Carbapenem_resistance_in_Enterobacteriaceae_Here_i.pdf 31 Calvo Jorge; Cantón Rafael et al. Detección fenotípica de mecanismos de resistencia en gram negativos. Recomendaciones de la Sociedad Española de Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica. ISBN-978-84-615-1530-1. Disponible en: https://www.seimc.org/contenidos/documentoscientificos/procedimientosmicrobiologia/seimcprocedimientomicrobiologia38.pdf 32 Tomado de internet: http://www.youtube.com/watch?v=zdz38cgHmJs 33 Tomado de internet: https://www.uv.mx/personal/sbonilla/files/2011/06/escherichia-coli-i.pdf 34 Tomado de internet: https://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/2521/LRM_TESIS.pdf?sequence=1&isAllowed=y 35 Pérez Faraldo Bárbara, González Isla Fernando. Infecciones por bacilos gramnegativos no fermentadores: agentes etiológicos de infecciones asociadas a la atención sanitaria. ccm [Internet]. 2017 Dic [citado 2019 Oct 02] ; 21( 4 ): 1197-1200. Disponible en: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S156043812017000400021&lng=es. 36 De Almeida Alejandra. Análisis de cepas recombinantes de Escherichia coli productoras de poli(3- hidroxibutirato): efecto de la acumulación del polímero de la proteína PhaP sobre el metabolismo y la expresión génica. Tesis doctoral en Química Biológica. Universidad de Buenos Aires.2010. Disponible en: 37 Ugarte Silva Ruth; Olivo López José; Corso Alejandra et al. Resistencia a colistín mediado por el gen mcr-1 identificado en cepas de E. coli y Klebsiella pneumoniae: primeros reportes en el Perú. An. Fac. med. Julio de 2018. 79 (3): 213-217. Disponible en: http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1025-55832018000300004 38 Alerta por la primera detección de mcr-1 gen de resistencia a colistina en aislamientos de Salmonella entérica serovar Typhimurium y Excherichia coli de origen humano en Colombia. Grupo de Microbiología Subdirección Laboratorio Nacional de Referencia Dirección de Redes en Salud Pública Instituto Nacional de Salud. 2018. Disponible en: https://www.ins.gov.co/buscador-eventos/Informacin%20de%20laboratorio/Alerta%20Colombia%20mcr1%20Salmonella%20y%20E%20%20coli.pdf 39 Sánchez Palencia Liz, Acosta Cáceres José. Mutaciones en la región determinante de resistencia a quinolonas (QRDR) del gen gyrA de Neisseria gonorrhoeae presente en muestras clínicas de hombres que tienen sexo con hombres. Rev. peru biol. [Internet]. 2017 Sep [citado 2019 Oct 02] ; 24( 3 ): 283-292. Disponible en: http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S172799332017000300008&lng=es. http://dx.doi.org/10.15381/rpb.v24i3.13905. 40 Tomado de internet: https://es.slideshare.net/elvis_d7/quinolonas-45973885 41 Montoliu Lluís. Video de la conferencia “Editando genomas: Todo lo que ya podemos hacer con CRISPR y mucho más”, durante la XIV edición de encuentros con la ciencia celebrada el Centro de Biotecnología (CSIC)en España el 19 de Mayo de 2017. Disponible en: https://www.youtube.com/watch?v=WsweSPH3EW0 42 Mojica Francisco. Video de la conferencia “Sistemas CRISPR - Cas, una revolución biotecnológica con origen bacteriano”, durante la XIII edición de encuentros con la ciencia celebrada en Málaga España el 11 de enero de 2016. FECYT, de la SEBBM y Ámbito cultural de el Corte Inglés. Disponible en: https://www.youtube.com/watch?v=GOK6FkfmHdQ 43 Karginov y Hannon. Las secuencias repetidas de CRISPR. Cell 2010. Disponible en: https://www.google.com/amp/s/www.dciencia.es/que-es-la-tecnologia-crispr-cas9/amp/ 44 Citorik RJ, Mimee M, Lu TK. Sequence-specific antimicrobials using efficiently delivered RNA- guided nucleases. Nat Biotechnol. 2014 Nov;32(11):1141-5. doi: 10.1038/nbt.3011. Epub 2014 Sep 21. PMID: 25240928; PMCID: PMC4237163. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4237163 44 Haisi Dong, Hua Xiang. Exploiting a conjugative CRISPR/Cas9 system to eliminate plasmid harbouring the mcr-1 gene from Escherichia coli. International Journal of Antimicrobial Agents 53 (2019) 1-8. 45 M02-A12 Performance standards for Ántimicrobial Disk Susceptibility Test; Approved Standard – Twelfth Edition. Clinical and Laboratory Sandards Institute. January 2015. Disponible en: https://clsi.org 46 Tomado de internet www.crispr.mit.edu.co 47 Jiménez Pearson MA, Galas M, Corso A, Hormazábal JC, Duarte Valderrama C, Salgado Marcano N et al. Consenso latinoamericano para definir, categorizar y notificar patógenos multirresistentes, con resistencia extendida o panresistentes. Rev Panam Salud Publica. 2019;43:e65. Disponible en: https://doi.org/10.26633/RPSP.2019.65 48 Didovyk A Borek B Tsimring L Hasty J. Transcriptional regulation with CRISPR-Cas9: Principles, advances, and applications. Current Opinion in Biotechnology 2016. Disponible en: https://reader.elsevier.com/reader/sd/pii/S0958166916301537?token=A9109FC63A378A3349936B18259C6FA70C21FE461684748011D671B2DAC95A973BD82ECC5934124DE153DC8006F723B5 49 Tomado de internet: https://www.ins.gov.co/TyS/programas-de-calidad/programas-directos/bacteriolog%C3%ADa |
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Sánchez Mora, Ruth Mélidaefe8f5fbfdf7ec7c24ba850634bfbb9aGarcía Espinosa, Yudy Catalina734e84122921dd3e8b2986d51cebd99aUniversidad Colegio Mayor de CundinamarcaTrabajo de grado2021-06-24T20:01:37Z2021-06-24T20:01:37Z2019-10-04https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/28960171La panresistencia (PDR), multirresistencia (MDR) y resistencia extrema (XDR) a antibióticos, es un problema de salud pública mundial, las alertas globales están encendidas por la expansión de mecanismos intrínsecos y extrínsecos que tienen y desarrollan los procariotas para contrarrestar los efectos de los fármacos antimicrobianos. Dentro de las habilidades extrínsecas de las bacterias está la transmisión horizontal de genes por plásmidos (THG), un mecanismo que es punto clave a controlar en la lucha contra las infecciones bacterianas. Dos de los microorganismos prioritarios que requieren nuevos antibióticos, son Pseudomonas aeruginosa y las variedades de E. coli que han adquirido resistencia a antibióticos. Esta revisión bibliográfica, tiene como objetivo general, evidenciar que la tecnología Cris Cas 9 puede ser una herramienta clave a emplearse para mitigar la resistencia a antibióticos relacionada con THG en las bacterias Gram negativas Escherichia coli (E. coli) y Pseudomonas aeruginosa (P. Aeruginosa), que son un problema de salud pública a nivel intrahospitalario en Colombia; por medio de su re- sensibilización, al editar genes asociados a resistencia antibiótica con la herramienta CRISPR Cas9; la metodología consistio en una revisión bibliográfica de artículos recientes en bases de datos con validez científica, que dan cuenta que se ha logrado en este campo, describiendo sus resultados y acercándonos a sus implicaciones y alcances. Los criterios de búsqueda fueron artículos desde el año 2010 en revistas indexadas es español o inglés que pudieran obtenerse completos para su análisis, que evaluaran la re-sensibilización de bacterias Gram negativas y cuya metodología fuera asociada a CRISPR Cas9; se demostró que las bacterias E- coli multirresistente y P.aeruginosa extremadamente resistente pueden recuperar su suceptibilidad inicial a antibióticos por varias vías de edición con CRISPR Cas 9. Entiéndase re - sensibilización como todo proceso de edición genética que al ser empleado en una cepa bacteriana que había adquirido previamente multirresistencias a antibióticos por transmisión horizontal de plásmidos, demuestre haber devuelto a dicha bacteria sus características previas a la adquisición de esta información de resistencia frente a antibióticos, volviéndola nuevamente susceptiblePan-resistance (PDR), multi-resistance (MDR) and extended resistance (XDR) to antibiotics is a global public health problem. Global alerts are lit by the expansion of intrinsic and extrinsic mechanisms that prokaryotes have and develop to counteract the effects of antimicrobial drugs. Among the extrinsic abilities of bacteria is the horizontal transmission of genes by plasmids (THG), a mechanism that is a key point to control in the fight against bacterial infections. Two of the priority microorganisms that require new antibiotics are Pseudomonas aeruginosa and the varieties of E. coli that have acquired antibiotic resistance. In this literature review, the general objective is to show that Cris Cas 9 technology can be a key tool to mitigate THG-related antibiotic resistance in Gram-negative bacteria Escherichia coli (E. coli) and Pseudomonas aeruginosa ( P. Aeruginosa), which are a public health problem at the hospital level in Colombia (2, 4); through its re-sensitization, when editing genes associated with antibiotic resistance with the CRISPR Cas9 tool; The methodology was a documentation by means of the specific search of recent articles in databases with scientific validity, that realize that it has been achieved in this field, describing its results and approaching its implications and scope. The search criteria were articles from 2010 in indexed journals, Spanish or English, which could be obtained for analysis, which evaluated the re-sensitization of gram negative bacteria and whose methodology was associated with CRISPR Cas9. It was demonstrated that the extremely resistant E.coli bacteria and extremely resistant P.aeruginosa can regain their initial susceptibility to antibiotics by several ways of editing with CRISPR Cas 9. Re-sensitization is understood as any process of genetic editing that, when used in a bacterial strain that had previously acquired multiresistance to antibiotics by horizontal transmission of plasmids, demonstrates having returned to said bacterium its characteristics prior to the acquisition of this resistance information against antibiotics, making it again susceptiblelista de tablas 10 lista figuras 11 lista de gráficos página 12 abstract 14 objetivo general 16 objetivos específicos 16 introducción 17 1. antecedentes 23 2. marco referencial 28 2.1. resistencia bacteriana a antibióticos 28 2.2. Mecanismos de resistencia bacteriana en bacilos Gram negativos incluida la familia Enterobacteriaceae 30 2.2.1. Betalactamasas de Espectro Extendido o BLEES 31 2.2.2. Betalactamasas tipo carbapenemasa 32 2.2.3. Resistencia a Aminoglucósidos 32 2.2.4. Resistencia a quinolonas 33 2.2.5. Plásmidos de resistencia 33 2.3. Escherichia coli y P. aeruginosa 34 2.3.2. Colistina 36 2.3.3 Mutación gyrA 36 2.3.4 Quinolonas 36 3. Diseño metodológico 40 4. Resultados 42 4.1. Herramienta de CRISPR/Cas 9 43 4.1.1. CRISPR Cas 9 (CRISPR Cas tipo II) 46 4.1.2. Fases del mecanismo de la inmunidad de CRIPSR/Cas9 Tipo II 47 4.2. Re-sensibilización de E. coli por edición de genes codificantes para Betalactamasas de amplio espectro BLEES. 51 4.3. Re-sensibilización de E. coli por edición del Gen de resistencia a colistina mcr-1 usando el sistema CRISPR/Cas9 57 4.3.1. Bloqueo del Gen mcr-1 por CRISPR/Cas 58 4.3.2 Eliminación del gen de resistencia a colistina mrc-1 presente en diferentes plásmidos en E. coli. 60 4.4. La edición de E. coli resistente a quinolonas implementando CRISPR / Cas9, confirma la relación causa-efecto entre la mutación (gyr) y la resistencia a este antibiótico, al re-sensibilizar las cepas que habían adquirido dicho mecanismo 65 4.5. La edición previamente empleada en distintas especies de Pseudomonas puede replicarse para re- sensibilizar a P. Aeruginosa por medio de la edición de CRISPR/Cas9 68 5. Discusión 74 Conclusiones 81 Referencias 82PregradoBacteriólogo(a) y Laboratorista ClínicoTrabajo de grado86p.application/pdfspaUniversidad Colegio Mayor de CundinamarcaFacultad de Ciencias de la SaludBogotá, Distrito CapitalBacteriología y Laboratorio ClínicoNo objeto asociado1 Fergus Walsh. Antibiotic resistence as 'serious as terrorism'. The Western Morning News 2013 Mar 11:16. Disponible en: https://www.bbc.com/news/health-212 Vigilancia de infecciones asociadas a la atención en salud, resistencia bacteriana y consumo De antibióticos en hospitales de alta complejidad, Colombia, 2011 alera D Barrero L Villalobos A Rivera S Ovalle M. Biomédica 2013. Biomédica Revista del Instituto Nacional de Salud. Vol. 34 (2014): Suplemento 1, Resistencia bacteriana ISSN: 0120-4157. Disponible en: Disponible en: https://doi.org/10.7705/biomedica.v34i0.16983 Sun L, He T, Zhang L. et al. Generation of newly discovered resistance gene mcr-1 knockout in E. coli using the CRISPR/Cas9 system. Journal of Microbiology and Biotechnology. 2017 vol: 27 (7) pp: 1276-1280. Disponible en: https://www.mendeley.com/viewer/?fileId=29f38258-094b-4713-1e63-030887be1fab&documentId=5ec249cf-64e0-3e1d-86b7-124893491bb34 González L Cortés J. Revisión sistemática de la resistencia antimicrobiana en enterobacterias en aislamientos intrahospitalarios en Colombia. Biomédica 34 (2), 180-197, 2014. Disponible en: https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=843309070055 Espinosa C Cortés J Castillo J Leal A. Revisión sistemática de la resistencia antimicrobiana en cocos Gram positivos intrahospitalarios en Colombia. Biomédica 31 (1), 27-34, 2011. Disponible en: https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=843224440056 Moncayo Medina A. Antibiotic resistance and the lack of interest by the pharmaceutical industry. ScienceDirect Volume 18, Issue 2, April-June 2014, Pages 35-36. Disponible en: https://doi.org/10.1016/j.infect.2014.02.0037 Ceasar S, Rjan V, Prykhozhij S, Berman J. Ignacimuthu S. Insert, remove or replace: A highly advanced genome editing system using CRISPR/Cas9. Biochimica et Biophysica Acta - Molecular Cell Research. Publisher:Elsevier B.V vol:1863 (9) pp: 2333-2344.2016. Disponible en: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0167488916301781?via%3Dihub8 De La Fuente Nuñez C. ; Lu T. CRISPR-Cas9 technology: applications in genome engineering, development of secuence-specific antimicrobials, and future prospects. Integrative Biology (United Kingdom) 2017 vol. 9 (2) pp: 109 - 122. Disponible en: Doi:10.1039/c6ib00140h9 Kim J, Cho D, Park M. et al. Crispr/Cas9- mediated resensitizacion of antibiotic-resistant E. coli harboring extended-spectrum B-lactamases. Journal of Micriobiology and Biotechnology. 2015 vol: 26 (2) pp: 394-401. Disponible en: https://www.mendeley.com/viewer/?fileId=4638e4c6-88df-549f-2bbb- 6d292c7e2dbb&documentId=d241b8d4-b4f5-3ef2-bfa8-cda38989a15410 Qiu H. Gong, Butaye P, Lu G. et al. CRISPR/Cas9/sgRNA-mediated targeted gene modification confirms the cause-effect relationship between gyrA mutation and quinolone resistance in E. coli. FEMS Microbiology Letters Publisher Oxford University Press. 2018 vol: 365 (13). Disponible en: https://academic.oup.com/femsle/advance-article-abstract/doi/10.1093/femsle/fny127/499591111 Weizhong Chen, Ya Zhang et al. CRISPR/Cas9- based Genome Editing in Pseudomonas aeruginosa and CytidineDeaminase- Mediated Base Editing in Pseudomonas Species. iScience 6, 222.231, August 31, 2018. Disponible en: http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/12 Ishino, Y., Shinagawa, H., Makino, K., Amemura, M., & Nakatura, A. (1987). Nucleotide sequence of the iap gene, responsible for alkaline phosphatase isoenzyme conversion in Escherichia coli, and identification of the gene product. Journal of Bacteriology, 169(12), 5429–5433. Disponible en: https://www.mendeley.com/catalogue/nucleotide-sequence-iap-gene-responsible-alkaline-phosphatase-isoenzyme-conversion-escherichia-coli/13 Tomado de internet: http://amyd.quimica.unam.mx/pluginfile.php/9322/mod_resource/content/1/CRISPR%20C AS9.pdf14 Mojica F, Díez-Villaseñor C, Soria E, Juez G. Biological significance of a family of regularly spaced repeats in the genomes of Archaea, Bacteria and mitochondria. Molecular Microbiology. 2000.15 Tomado de internet: http://fundacion-antama.org/historia-del-desarrollo-de-la-tecnologia-cripsr-cas/16 Rodolphe Barrangou, Christophe Fremaux, Heléne Deveau et al. CRISPR Provides Acquired Resistance Against Viruses in Prokaryotes. Science 23 Mar. 2007: Vol. 315, Issue 5819, pp. 1709-1712. Disponible en: https://science.sciencemag.org/content/315/5819/170917 Deveau, H., Barrangou, R., Garneau, J. E., Labonté, J., Fremaux, C., Boyaval, P., Moineau, S. (2008). Phage response to CRISPR-encoded resistance in Streptococcus thermophilus. Journal of bacteriology, 190(4), 1390–1400. doi:10.1128/JB.01412-07. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC223822818 Doudna, J.A., y Charpentier, E. The new frontier of genome engineering with CRISPR/Cas9. Science. American Associatin for the Advancement of Science. 2014. Disponible en: https://doi.org/10.1126/science.125809619 Huang Z, Tomitaka A, Raymond A, Nair M. Current application of CRISPR/Cas9 gene-editing technique to eradication of HIV/AIDS. Gene Ther 2017 07;24(7):377-384. Disponible en: https://nature.com/articles/gt20173520 Bier E, Harrison M, O’connor- Giles K, Wildonger J. Advances in engineering the fly genome with the CRISPR-Cas system. GENETICS January 1, 2018 vol. 208 no. 1 1-18. Disponible en: https://doi.org/10.1534/genetics.117.111321 Kolli N Lu M Maiti P Rossignol J Dunbar G International Journal of Molecular Sciences 2017 vol: 18 (4). Disponible en: https://doi.org/10.3390/ijms1804075422 Jusiak B Cleto S Perez-Piñera P Lu T Trends in Biotechnology Publisher: Elsevier Ltd 2016 vol: 34 (7) pp: 535-547. Disponible en: https://doi.org/10.1016/j.tibtech.2015.12.01423 Idoko-Akoh Alewo, Taylor Lorna, <...>, McGrew Michael J. High fidelity 84 CRISPR/Cas9 increases precise monoallelic and biallelic editing events in primordial germ cells.Scientific Reports, Nature Publishing Group (2018) 8:15126. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC61811960/24 Tomado de internet: http:www.who.int/mediacentre/factsheets/fs194/es/index.html25 Esparza Germán. Conferencia: Bacilos Gram Negativos Panresistentes. Aspectos Diagnósticos, Terapéuticos y Epidemiológicos. Asociación Colombiana de Infectología (ACIN). 2016 Disponible en: https://youtu.be/MEf0U9k6pxc26 Hernández-Gómez C Blanco V Motoa G Correa A Maya J De la Cadena E Perengüez M Rojas L Hernández A Vallejo M Villegas M.Evolución de la resistencia antimicrobiana de bacilos Gram negativos en unidades de cuidados intensivos en Colombia. Biomédica Revista del Instituto Nacional de Salud. Vol. 34 (2014): Suplemento 1, Resistencia bacteriana ISSN: 0120-4157. Disponible en: https://doi.org/10.7705/biomedica.v34i0.166727 Fair, R. J., & Tor, Y. (2014). Antibiotics and bacterial resistance in the 21st century. Perspectives in medicinal chemistry, 6, 25–64. doi:10.4137/PMC.S1445928 Argyris Michalopoulos,Matthew E.Falagas. colistin and polymyxin B in critical care crit. care crit. Care Clin 24 (2008).29 Tomado de internet: https://es.slideshare.net/mobile/josemiguelunerg/resistencia-bacteriana-7916443830 Nordmann, Patrice & Dortet, Laurent & Poirel, Laurent. (2012). Carbapenem resistance in Enterobacteriaceae: Here is the storm!. Trends in molecular medicine. 18. 263-72. 10.1016/j.molmed.2012.03.003. Disponible en: file:///C:/Users/usuario/Downloads/Carbapenem_resistance_in_Enterobacteriaceae_Here_i.pdf31 Calvo Jorge; Cantón Rafael et al. Detección fenotípica de mecanismos de resistencia en gram negativos. Recomendaciones de la Sociedad Española de Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica. ISBN-978-84-615-1530-1. Disponible en: https://www.seimc.org/contenidos/documentoscientificos/procedimientosmicrobiologia/seimcprocedimientomicrobiologia38.pdf32 Tomado de internet: http://www.youtube.com/watch?v=zdz38cgHmJs33 Tomado de internet: https://www.uv.mx/personal/sbonilla/files/2011/06/escherichia-coli-i.pdf34 Tomado de internet: https://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/2521/LRM_TESIS.pdf?sequence=1&isAllowed=y35 Pérez Faraldo Bárbara, González Isla Fernando. Infecciones por bacilos gramnegativos no fermentadores: agentes etiológicos de infecciones asociadas a la atención sanitaria. ccm [Internet]. 2017 Dic [citado 2019 Oct 02] ; 21( 4 ): 1197-1200. Disponible en: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S156043812017000400021&lng=es.36 De Almeida Alejandra. Análisis de cepas recombinantes de Escherichia coli productoras de poli(3- hidroxibutirato): efecto de la acumulación del polímero de la proteína PhaP sobre el metabolismo y la expresión génica. Tesis doctoral en Química Biológica. Universidad de Buenos Aires.2010. Disponible en:37 Ugarte Silva Ruth; Olivo López José; Corso Alejandra et al. Resistencia a colistín mediado por el gen mcr-1 identificado en cepas de E. coli y Klebsiella pneumoniae: primeros reportes en el Perú. An. Fac. med. Julio de 2018. 79 (3): 213-217. Disponible en: http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1025-5583201800030000438 Alerta por la primera detección de mcr-1 gen de resistencia a colistina en aislamientos de Salmonella entérica serovar Typhimurium y Excherichia coli de origen humano en Colombia. Grupo de Microbiología Subdirección Laboratorio Nacional de Referencia Dirección de Redes en Salud Pública Instituto Nacional de Salud. 2018. Disponible en: https://www.ins.gov.co/buscador-eventos/Informacin%20de%20laboratorio/Alerta%20Colombia%20mcr1%20Salmonella%20y%20E%20%20coli.pdf39 Sánchez Palencia Liz, Acosta Cáceres José. Mutaciones en la región determinante de resistencia a quinolonas (QRDR) del gen gyrA de Neisseria gonorrhoeae presente en muestras clínicas de hombres que tienen sexo con hombres. Rev. peru biol. [Internet]. 2017 Sep [citado 2019 Oct 02] ; 24( 3 ): 283-292. Disponible en: http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S172799332017000300008&lng=es. http://dx.doi.org/10.15381/rpb.v24i3.13905.40 Tomado de internet: https://es.slideshare.net/elvis_d7/quinolonas-4597388541 Montoliu Lluís. Video de la conferencia “Editando genomas: Todo lo que ya podemos hacer con CRISPR y mucho más”, durante la XIV edición de encuentros con la ciencia celebrada el Centro de Biotecnología (CSIC)en España el 19 de Mayo de 2017. Disponible en: https://www.youtube.com/watch?v=WsweSPH3EW042 Mojica Francisco. Video de la conferencia “Sistemas CRISPR - Cas, una revolución biotecnológica con origen bacteriano”, durante la XIII edición de encuentros con la ciencia celebrada en Málaga España el 11 de enero de 2016. FECYT, de la SEBBM y Ámbito cultural de el Corte Inglés. Disponible en: https://www.youtube.com/watch?v=GOK6FkfmHdQ43 Karginov y Hannon. Las secuencias repetidas de CRISPR. Cell 2010. Disponible en: https://www.google.com/amp/s/www.dciencia.es/que-es-la-tecnologia-crispr-cas9/amp/44 Citorik RJ, Mimee M, Lu TK. Sequence-specific antimicrobials using efficiently delivered RNA- guided nucleases. Nat Biotechnol. 2014 Nov;32(11):1141-5. doi: 10.1038/nbt.3011. Epub 2014 Sep 21. PMID: 25240928; PMCID: PMC4237163. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC423716344 Haisi Dong, Hua Xiang. Exploiting a conjugative CRISPR/Cas9 system to eliminate plasmid harbouring the mcr-1 gene from Escherichia coli. International Journal of Antimicrobial Agents 53 (2019) 1-8.45 M02-A12 Performance standards for Ántimicrobial Disk Susceptibility Test; Approved Standard – Twelfth Edition. Clinical and Laboratory Sandards Institute. January 2015. Disponible en: https://clsi.org46 Tomado de internet www.crispr.mit.edu.co47 Jiménez Pearson MA, Galas M, Corso A, Hormazábal JC, Duarte Valderrama C, Salgado Marcano N et al. Consenso latinoamericano para definir, categorizar y notificar patógenos multirresistentes, con resistencia extendida o panresistentes. Rev Panam Salud Publica. 2019;43:e65. Disponible en: https://doi.org/10.26633/RPSP.2019.6548 Didovyk A Borek B Tsimring L Hasty J. Transcriptional regulation with CRISPR-Cas9: Principles, advances, and applications. Current Opinion in Biotechnology 2016. Disponible en: https://reader.elsevier.com/reader/sd/pii/S0958166916301537?token=A9109FC63A378A3349936B18259C6FA70C21FE461684748011D671B2DAC95A973BD82ECC5934124DE153DC8006F723B549 Tomado de internet: https://www.ins.gov.co/TyS/programas-de-calidad/programas-directos/bacteriolog%C3%ADaDerechos Reservados -Universidad Colegio Myor de Cundinamarca ,2019https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/info:eu-repo/semantics/openAccessAtribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0)http://purl.org/coar/access_right/c_abf2Re - sensibilización de escherichia coli y pseudomonas aeruginosa por edición de genes asociados a multirresistencia antibiótica implementando crispr cas9.Trabajo de grado - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fhttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85Textinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesishttps://purl.org/redcol/resource_type/TPinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionColombiaInfección bacterianaResistencia antibióticabacteriologíaEscherichia coliPseudomonas aeruginosaCRISPR/Cas9PanresistenciaMultiresistenciaResistencia ExtendidaTransferencia horizontal de genesORIGINALSUSTENTACION_Resensibilizacion_Ecoli_Paeruginosa_CRISPRCas9.pdfSUSTENTACION_Resensibilizacion_Ecoli_Paeruginosa_CRISPRCas9.pdfapplication/pdf2442688https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/289/1/SUSTENTACION_Resensibilizacion_Ecoli_Paeruginosa_CRISPRCas9.pdfe89bfc16006d0156bf6077d2f00356ccMD51open access1 PARA SUBIR RE-SENSIBILIZACIÓN DE Ecoli y Paeruginosa CON CRISPRCas9-3-86.pdf1 PARA SUBIR RE-SENSIBILIZACIÓN DE Ecoli y Paeruginosa CON CRISPRCas9-3-86.pdfapplication/pdf1811583https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/289/2/1%20PARA%20SUBIR%20RE-SENSIBILIZACI%c3%93N%20DE%20Ecoli%20y%20Paeruginosa%20CON%20CRISPRCas9-3-86.pdffa1bc70898cc41dfbbf707562e7b1d49MD52open access2 PARA SUBIR RE-SENSIBILIZACIÓN DE Ecoli y Paeruginosa CON CRISPRCas9.pdf2 PARA SUBIR RE-SENSIBILIZACIÓN DE Ecoli y Paeruginosa CON CRISPRCas9.pdfapplication/pdf297270https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/289/3/2%20PARA%20SUBIR%20RE-SENSIBILIZACI%c3%93N%20DE%20Ecoli%20y%20Paeruginosa%20CON%20CRISPRCas9.pdffa063e8cea027ae64521b2a099ce3c96MD53metadata only accessLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-814828https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/289/4/license.txt2f9959eaf5b71fae44bbf9ec84150c7aMD54open accessTEXTSUSTENTACION_Resensibilizacion_Ecoli_Paeruginosa_CRISPRCas9.pdf.txtSUSTENTACION_Resensibilizacion_Ecoli_Paeruginosa_CRISPRCas9.pdf.txtExtracted texttext/plain8095https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/289/5/SUSTENTACION_Resensibilizacion_Ecoli_Paeruginosa_CRISPRCas9.pdf.txtd3af4df35035e2c4c43d64bce8b0bc07MD55open access1 PARA SUBIR RE-SENSIBILIZACIÓN DE Ecoli y Paeruginosa CON CRISPRCas9-3-86.pdf.txt1 PARA SUBIR RE-SENSIBILIZACIÓN DE Ecoli y Paeruginosa CON CRISPRCas9-3-86.pdf.txtExtracted texttext/plain143840https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/289/7/1%20PARA%20SUBIR%20RE-SENSIBILIZACI%c3%93N%20DE%20Ecoli%20y%20Paeruginosa%20CON%20CRISPRCas9-3-86.pdf.txtcedca2bb73dc80c03a45dfd51402106eMD57open access2 PARA SUBIR RE-SENSIBILIZACIÓN DE Ecoli y Paeruginosa CON CRISPRCas9.pdf.txt2 PARA SUBIR RE-SENSIBILIZACIÓN DE Ecoli y Paeruginosa CON CRISPRCas9.pdf.txtExtracted texttext/plain12https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/289/9/2%20PARA%20SUBIR%20RE-SENSIBILIZACI%c3%93N%20DE%20Ecoli%20y%20Paeruginosa%20CON%20CRISPRCas9.pdf.txt2f73b6e85f30c4ccf616eddc685fb256MD59metadata only accessTHUMBNAILSUSTENTACION_Resensibilizacion_Ecoli_Paeruginosa_CRISPRCas9.pdf.jpgSUSTENTACION_Resensibilizacion_Ecoli_Paeruginosa_CRISPRCas9.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg7090https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/289/6/SUSTENTACION_Resensibilizacion_Ecoli_Paeruginosa_CRISPRCas9.pdf.jpgc1bb8496493873f21bb28b57c87ee645MD56open access1 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