Evaluación del efecto del fitocannabinoide cannabidiol (CBD) en la cepa NL5901 de Caenorhabditis elegans

La alfa sinucleína, es una proteína pre sináptica, componente principal de los cuerpos de Lewy, esta es una característica patológica importante en la enfermedad de Parkinson (EP), en la cual se ha destacado la importancia del uso de modelos biológicos que permitan evaluar la disminución de dicha pr...

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Autores:
Hidalgo Pulido, Karen Lorena
Tipo de recurso:
Trabajo de grado de pregrado
Fecha de publicación:
2022
Institución:
Colegio Mayor de Cundinamarca
Repositorio:
Repositorio Colegio Mayor de Cundinamarca
Idioma:
spa
OAI Identifier:
oai:repositorio.unicolmayor.edu.co:unicolmayor/5711
Acceso en línea:
https://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/5711
Palabra clave:
Cannabidiol (CBD)
Alfa sinucleína NL5901
Caenorhabditis elegans
Rights
closedAccess
License
Derechos Reservados - Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2022
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description La alfa sinucleína, es una proteína pre sináptica, componente principal de los cuerpos de Lewy, esta es una característica patológica importante en la enfermedad de Parkinson (EP), en la cual se ha destacado la importancia del uso de modelos biológicos que permitan evaluar la disminución de dicha proteína, entre ellos, el nematodo Caenorhabditis elegans. Este nematodo es ampliamente empleado en el estudio de varias enfermedades neurodegenerativas como la EP. En este proyecto se emplea la cepa transgénica NL5901, caracterizada por presentar agregados proteicos de alfa sinucleína marcados con YFP (1) lo que facilita su uso para la evaluación de posibles tratamientos que disminuyan la agregación de alfa sinucleína y así mejoren las características fisiológicas. El cannabidiol (CBD) es un fitocannabinoide no psicoactivo procedente de la planta de Cannabis sativa, al cual se le han atribuido varios beneficios, entre ellos, propiedades neuroprotectoras. Por lo tanto, el objetivo planteado fue evaluar el efecto del CBD de Cannabis sativa, en la cepa NL5901 y N2 Bristol de Caenorhabditis elegans. Para el cumplimiento de este proyecto se evaluó en efecto del CBD (2), sobre algunas características como la movilidad por medio del número de ondas, la esperanza de vida del nematodo, protección bajo el estrés térmico y la agregación de alfa sinucleína. Finalmente, el tratamiento mejoró las características de los nematodos y se evidenció una disminución de los agregados proteicos en la cepa NL5901.
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En este proyecto se emplea la cepa transgénica NL5901, caracterizada por presentar agregados proteicos de alfa sinucleína marcados con YFP (1) lo que facilita su uso para la evaluación de posibles tratamientos que disminuyan la agregación de alfa sinucleína y así mejoren las características fisiológicas. El cannabidiol (CBD) es un fitocannabinoide no psicoactivo procedente de la planta de Cannabis sativa, al cual se le han atribuido varios beneficios, entre ellos, propiedades neuroprotectoras. Por lo tanto, el objetivo planteado fue evaluar el efecto del CBD de Cannabis sativa, en la cepa NL5901 y N2 Bristol de Caenorhabditis elegans. Para el cumplimiento de este proyecto se evaluó en efecto del CBD (2), sobre algunas características como la movilidad por medio del número de ondas, la esperanza de vida del nematodo, protección bajo el estrés térmico y la agregación de alfa sinucleína. Finalmente, el tratamiento mejoró las características de los nematodos y se evidenció una disminución de los agregados proteicos en la cepa NL5901.Tabla de contenido Índice de figuras7 Índice de tablas .8 Resumen....9 Introducción . 10 1. Antecedentes.... 11 2. Marco referencial... 15 2.1. Alfa Sinucleína ... 15 2.2. Agregación de Alfa Sinucleína 17 2.3. Sistema Endocannabinoide 17 2.3.1. Receptores Cannabinoides... 17 2.3.2. Endocannabinoides.18 2.4. Fitocannabinoides......19 2.4.1. CBD ... 19 2.5. Caenorhabditis elegans como modelo de agregación de alfa sinucleína .... 20 3. Diseño metodológico ....21 3.1. Universo, población, muestra . 22 3.2. Hipótesis, variables, indicadores .. 22 3.3. Técnicas y procedimientos.23 3.3.1. Obtención de CBD..23 3.3.2. Obtención de las cepas de C. elegans y E. coli OP50 .... 23 3.3.3. Mantenimiento de C. elegans cepa silvestre N2 Bristol y NL5901.....23 3.3.4. Reactivación Cultivo de C. elegans cepa silvestre N2 Bristol y NL5901 24 3.3.5. Sincronización . 24 3.3.6. Determinación de longitud del cuerpo... 26 3.3.7. Elaboración de las soluciones de trabajo .27 3.3.8. Dosis Letal 50 aguda.... 27 3.3.9. Ensayo de longevidad y movilidad sin tratamiento ...28 3.3.10. Ensayo de longevidad y movilidad bajo el tratamiento 29 3.3.11. Determinación de agregados de alfa sinucleína 30 6 3.3.12. Determinación de la tolerancia al estrés térmico .....30 3.3.13. Determinación de la tolerancia al estrés térmico junto con el tratamiento31 3.3.14. Análisis Estadístico.... 31 4. Resultados 32 4.1. Congelación E coli OP50 ..32 4.2. Caracterización de las cepas ... 32 4.2.1. Identificación de los estadios larvarios.. 32 4.2.2. Identificación fluorescencia NL590133 4.2.3. Longitud34 4.3. Dosis Letal 50 35 4.4. Ensayo de Longevidad.... 38 4.4.1. Efecto del CBD sobre la longevidad.38 4.5. Ensayo de Movilidad .40 4.5.1. Efecto del CBD sobre la Movilidad..42 4.6. Fluorescencia con CBD .. 45 4.7. Tolerancia al estrés térmico .... 47 4.7.1 Efecto del CBD sobre la tolerancia al estrés térmico .48 5. Discusión . 48 6. Conclusiones.... 52 7. Referencias Bibliográficas. 53 8. Anexos57PregradoBacteriólogo(a) y Laboratorista Clínico63p.application/pdfspaDerechos Reservados - Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2022https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/info:eu-repo/semantics/closedAccessAtribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0)http://purl.org/coar/access_right/c_14cbEvaluación del efecto del fitocannabinoide cannabidiol (CBD) en la cepa NL5901 de Caenorhabditis elegansTrabajo de grado - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fhttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85Textinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesishttps://purl.org/redcol/resource_type/TPinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionFacultad de Ciencias de la SaludBogotáBacteriología y Laboratorio ClínicoGonzález Devia JL. Evaluación del efecto del extracto etanólico de Witheringia coccoloboides sobre agregados de αsinucleína en la cepa NL5901 de Caenorhabditis elegans [Internet]. [Bogotá D.C.]: Universidad Nacional de Colombia; 2018. Disponible en: https://repositorio.unal.edu.co/bitstream/handle/unal/68758/Tesis%20de%20Maestr%c3%ad a%20Johanna%20Lizeth%20Gonzalez%20Devia.pdf?sequence=1&isAllowed=yParada Ferro LK, Gualteros Bustos AV, Sanchez Mora RM. Caracterización fenotípica de la cepa N2 de Caenorhabditis elegans como un modelo en enfermedades neurodegenerativas. NOVA. diciembre de 2017;15(28):69-78.Brunetti G, Di Rosa G, Scuto M, Leri M, Stefani M, Schmitz-Linneweber C, et al. Healthspan Maintenance and Prevention of Parkinson’s-like Phenotypes with Hydroxytyrosol and Oleuropein Aglycone in C. elegans. Int J Mol Sci. 8 de abril de 2020;21(7)Fernández Espejo E. Agregación de alfa-sinucleína y degeneración Parkinsoniana. 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(CBD) en la cepa NL5901 de Caenorhabditis elegans.pdf.txtExtracted texttext/plain14386https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/5711/8/PRESENTACI%c3%93N%20Evaluaci%c3%b3n%20del%20efecto%20del%20fitocannabinoide%20cannabidiol%20%28CBD%29%20en%20la%20cepa%20NL5901%20de%20Caenorhabditis%20elegans.pdf.txt43aa659b838fb6076cccd2ad007a2029MD58open accessFORMATO IDENTIFICACIÓN TRABAJOS DE GRADO(1)(1).pdf.txtFORMATO IDENTIFICACIÓN TRABAJOS DE GRADO(1)(1).pdf.txtExtracted texttext/plain3055https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/5711/10/FORMATO%20IDENTIFICACI%c3%93N%20TRABAJOS%20DE%20GRADO%281%29%281%29.pdf.txt27cb32b0c102cff5ea77463b875e77cbMD510metadata only accessCARTA DERECHOS DE AUTOR Hidalgo.pdf.txtCARTA DERECHOS DE AUTOR Hidalgo.pdf.txtExtracted texttext/plain1099https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/5711/12/CARTA%20DERECHOS%20DE%20AUTOR%20Hidalgo.pdf.txt9465ff7f54026e5b4420bda9acf78d9bMD512metadata only accessTHUMBNAILEvaluación del efecto del fitocannabinoide cannabidiol (CBD) en la cepa NL5901 de Caenorhabditis elegans.pdf.jpgEvaluación del efecto del fitocannabinoide cannabidiol (CBD) en la cepa NL5901 de Caenorhabditis elegans.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg6028https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/5711/7/Evaluaci%c3%b3n%20del%20efecto%20del%20fitocannabinoide%20cannabidiol%20%28CBD%29%20en%20la%20cepa%20NL5901%20de%20Caenorhabditis%20elegans.pdf.jpg3aa44d726ee780e23e6b243ba78dd1b9MD57open accessPRESENTACIÓN Evaluación del efecto del fitocannabinoide cannabidiol (CBD) en la cepa NL5901 de Caenorhabditis elegans.pdf.jpgPRESENTACIÓN Evaluación del efecto del fitocannabinoide cannabidiol (CBD) en la cepa NL5901 de Caenorhabditis elegans.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg8050https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/5711/9/PRESENTACI%c3%93N%20Evaluaci%c3%b3n%20del%20efecto%20del%20fitocannabinoide%20cannabidiol%20%28CBD%29%20en%20la%20cepa%20NL5901%20de%20Caenorhabditis%20elegans.pdf.jpg878c79d34d72c5dab7422e693711da82MD59open accessFORMATO IDENTIFICACIÓN TRABAJOS DE GRADO(1)(1).pdf.jpgFORMATO IDENTIFICACIÓN TRABAJOS DE GRADO(1)(1).pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg13725https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/5711/11/FORMATO%20IDENTIFICACI%c3%93N%20TRABAJOS%20DE%20GRADO%281%29%281%29.pdf.jpg24969aa08af70a2210985dbc368ebf06MD511metadata only accessCARTA DERECHOS DE AUTOR Hidalgo.pdf.jpgCARTA DERECHOS DE AUTOR Hidalgo.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg9267https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/unicolmayor/5711/13/CARTA%20DERECHOS%20DE%20AUTOR%20Hidalgo.pdf.jpg402833fa4bfac63bbe5cf80d16b0edaeMD513metadata only accessORIGINALEvaluación del efecto del fitocannabinoide cannabidiol (CBD) 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