Diseño de un modelo in vitro de células epiteliales primarias gingivales humanas para evaluar infectividad de Helicobacter pylori (ATCC 43504)

Antecedentes: La evidencia sobre patologías bucales asociadas a Helicobacter pylori es controversial, especialmente porque no hay certeza sobre la capacidad infectante de la bacteria en tejido oral. Por lo tanto, es importante evaluar metodologías para establecer la capacidad de adhesión de H. pylori a la célula hospedera en el proceso de patogénesis. Objetivo: Evaluar la capacidad infectante de H. pylori (ATCC 43504) en células epiteliales primarias gingivales humanas. Metodología: Biopsias de encías humanas de donantes sanos se disgregaron mecánicamente y se digirieron con enzimas proteolíticas y con antioxidantes. El sedimento celular se suspendió en medio Williams suplementado con antimicrobianos, suero bovino fetal y factores de crecimiento. Las células se cultivaron por dos semanas en placas de 12 pozos a 37°C y atmósfera CO2 al 10%. El fenotipo epitelial se confirmó por coloración de Hematoxilina & Eosina (H&E) e inmunohistoquímica para el antígeno epitelial de membrana (AEM) y coctel de citoqueratinas AE1/AE3. La evaluación de la capacidad de infección se realizó por inmunofluorescencia indirecta (IFI) con anticuerpo anti H. pylori. Se utilizó una multiplicidad de infección MOI (bacteria: célula) de 100 en monocapas con 70% de confluencia; como controles positivo y negativo de la infección se utilizaron líneas de células tumorales gástricas (AGS) y células embrionarias de riñón (293TN) de origen humano, respectivamente. Resultados y conclusiones: Se aislaron células gingivales viables y proliferantes, con confluencia inicial del 20% a las 72 horas y un 100% a los diez días de incubación. La coloración H&E evidenció la morfología epitelial de células planas de forma cilíndrica y núcleo prominente; y se confirmó el fenotipo de origen epitelial con AEM y AE1/AE3 (positividad de 80% y 60%, respectivamente). La IFI demostró ausencia de H. pylori en las células gingivales primarias con fluorescencia 0.4 ± 0.5%, mientras que los controles positivos y negativos presentaron 99.4 ± 0.9 % y 19.2 ± 1.1 % de positividad, respectivamente. Los resultados obtenidos sugieren que la cepa ATCC 43504 de H. pylori no tiene capacidad de adhesión a células epiteliales primarias gingivales humanas. Por consiguiente, se puede sugerir que la cepa evaluada de H. pylori participaría como microorganismo comensal transitorio en la cavidad bucal.

• Autores: Macías Gómez, Fabio
• Tipo de recurso: Trabajo de grado de pregrado
• Fecha de publicación: 2019
• Institución: Universidad Santo Tomás
• Repositorio: Repositorio Institucional USTA
• OAI Identifier: oai:repository.usta.edu.co:11634/18979
• Acceso en línea: http://hdl.handle.net/11634/18979
• Palabra clave: Primary gingival culture; Tissue engineering; Helicobacter pylori; Infectivity; Immunohistochemistry; Immunofluorescence; Helicobacter pylori; Células epiteliales; Inmunofluorescencia; Cultivo in vitro; Inmunohistoquímica; Cultivo de tejidos; Cultivo primario gingival; Helicobacter pylori; Infectividad; Ingeniería tejidos; Inmunohistoquímica; Inmunofluorescencia
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