Estandarización de la prueba ELISA indirecta para el diagnóstico de Ehrlichia canis usando como antígenos péptidos de la proteína TRP-36 a partir de muestras obtenidas de distintas regiones de Colombia.

La ehrlichiosis Monocítica canina (EMC), causada por la bacteria Ehrlichia canis es una enfermedad de distribución mundial con endemismo en los países tropicales y subtropicales. En Colombia la enfermedad tiene altas incidencias en las áreas de trópico bajo y medio, con riesgo de ser una enfermedad...

Full description

Autores:
Guete Fragozo, Mayra Alejandra
Matiz Velázquez, Luisa Fernanda
Tipo de recurso:
Trabajo de grado de pregrado
Fecha de publicación:
2023
Institución:
Universidad de Ciencias Aplicadas y Ambientales U.D.C.A
Repositorio:
Repositorio Institucional UDCA
Idioma:
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OAI Identifier:
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Acceso en línea:
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Palabra clave:
Perros
Ensayo de Inmunoadsorción Enzimática
Ehrlichia canis
Metastigmata
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description La ehrlichiosis Monocítica canina (EMC), causada por la bacteria Ehrlichia canis es una enfermedad de distribución mundial con endemismo en los países tropicales y subtropicales. En Colombia la enfermedad tiene altas incidencias en las áreas de trópico bajo y medio, con riesgo de ser una enfermedad emergente para los lugares de trópico alto, lo cual puede generar mayor impacto clínico. La E. canis puede recombinar a partir del intercambio genético entre distintos genogrupos produciendo variantes con cambios en las principales proteínas inmunorreactivas T RP-19 y TRP-36, lo cual puede afectar el diagnostico serológico, especialmente cuando se emplean antígenos de otros genogrupos. Por lo tanto, el objetivo de este estudio fue evaluar la técnica de ELISA indirecta empleando 4 péptidos sintéticos diseñados a partir de las regiones conservadas en tándem de la proteína TRP-36. Estos péptidos se produjeron mediante el método t-boc empleándose como antígenos muestras naturales para identificar estándares y el efecto prozona en la dilución de 1:100 con la concentración de los péptidos en 0,5 μg. Inicialmente se identificó una mejor respuesta al diagnóstico con los péptidos TEDSVSAPA (3670) y EASVVPAAEA (3672) con una sensibilidad del 83% y una especificidad del 100% para ambos. Sin embargo, los valores de AUC para el péptido 3670 fue de 1.0 comparado con 0,72 identificado en 3672. Con el péptido 3670 se realizaron ELISAS con muestras ciegas evidenciando una alta capacidad discriminatoria entre muestras positivas y negativas. Al contrastar muestras previamente diagnosticadas por TRP-19 en inmunocromatografía con el péptido 3670, se identificaron tasas de falsos negativos de 55% y de falsos positivos de 28%, evidenciando una mayor capacidad diagnostica para el péptido 3670. Por lo tanto, el presente estudio muestra que la ELISA fundamentada en el péptido 3670 de TRP-36 como antígeno podría ser una alternativa para el diagnóstico serológico de la EMC en el territorio nacional.
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Por lo tanto, el objetivo de este estudio fue evaluar la técnica de ELISA indirecta empleando 4 péptidos sintéticos diseñados a partir de las regiones conservadas en tándem de la proteína TRP-36. Estos péptidos se produjeron mediante el método t-boc empleándose como antígenos muestras naturales para identificar estándares y el efecto prozona en la dilución de 1:100 con la concentración de los péptidos en 0,5 μg. Inicialmente se identificó una mejor respuesta al diagnóstico con los péptidos TEDSVSAPA (3670) y EASVVPAAEA (3672) con una sensibilidad del 83% y una especificidad del 100% para ambos. Sin embargo, los valores de AUC para el péptido 3670 fue de 1.0 comparado con 0,72 identificado en 3672. Con el péptido 3670 se realizaron ELISAS con muestras ciegas evidenciando una alta capacidad discriminatoria entre muestras positivas y negativas. Al contrastar muestras previamente diagnosticadas por TRP-19 en inmunocromatografía con el péptido 3670, se identificaron tasas de falsos negativos de 55% y de falsos positivos de 28%, evidenciando una mayor capacidad diagnostica para el péptido 3670. Por lo tanto, el presente estudio muestra que la ELISA fundamentada en el péptido 3670 de TRP-36 como antígeno podría ser una alternativa para el diagnóstico serológico de la EMC en el territorio nacional.Canine Monocytic Ehrlichiosis (CME), caused by the bacterium Ehrlichia canis, is a worldwide disease with endemism in tropical and subtropical countries. In Colombia, the disease has high incidence in low and mid-tropical areas, with the risk of being an emerging disease for high tropic areas, which can generate wider clinical impact. E. canis can recombine as of genetic exchange between different genogroups, producing variants with alterations in the main immunoreactive proteins TRP-19 and TRP-36, which may affect serologic diagnosis, especially when antigens from other genogroups are used. Therefore, this study aimed to evaluate the indirect ELISA technique using 4 synthetic peptides designed as of the conserved regions in tandem of the TRP-36 protein. These peptides were produced with the t-boc method using natural samples to identify standards and the prozone effect in the 1:100 dilution with the peptides’ concentration at 0.5 μg. Initially, a better diagnostic response was observed with the TEDSVSAPA (3670) and EASVVVPAAEA (3672) peptides with a sensitivity of 83% and a specificity of 100% for both. However, the AUC values were different, for the peptide 3670 was 1.0 and 0.72 for the 3672. With peptide 3670, the ELISAs were made with blinded samples showing high discriminatory capacity between positive and negative samples. By measuring samples diagnosed previously by TRP-19 in immunochromatography with peptide 3670, false negatives rate of 55% and false positive rates of 28% were identified, showing higher diagnostic capacity for peptide 3670. Therefore, the present study proves that ELISA based on peptide 3670 of TRP-36 as antigen might be an alternative for the serological diagnosis of CME in the national territory.Incluye bibliografíaPregradoMédico(a) VeterinarioMedicina VeterinariaSanidad Animal39 páginas : gráficasapplication/pdfspaUniversidad de Ciencias Aplicadas y AmbientalesFacultad de Ciencias AgropecuariasBogotáhttps://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/legalcode.eshttps://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/info:eu-repo/semantics/openAccessAtribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0)http://purl.org/coar/access_right/c_abf2Estandarización de la prueba ELISA indirecta para el diagnóstico de Ehrlichia canis usando como antígenos péptidos de la proteína TRP-36 a partir de muestras obtenidas de distintas regiones de Colombia.Trabajo de grado - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1finfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionTexthttps://purl.org/redcol/resource_type/TPhttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85PerrosEnsayo de Inmunoadsorción EnzimáticaEhrlichia canisMetastigmataAgrosaviaPublicationORIGINALESTANDARIZACIÓN DE LA PRUEBA ELISA INDIRECTA PARA EL DIAGNÓSTICO DE EHRLICHIA CANIS USANDO COMO ANTÍGENOS.pdfESTANDARIZACIÓN DE LA PRUEBA ELISA INDIRECTA PARA EL DIAGNÓSTICO DE EHRLICHIA CANIS USANDO COMO ANTÍGENOS.pdfapplication/pdf1607449https://repository.udca.edu.co/bitstreams/8da90912-1624-4e25-a202-3107ba774a7e/downloada63f6a611efb08717ef5f6b3ff333c86MD51IdentificacionTG FORMATO BIB-01 (1).pdfIdentificacionTG FORMATO BIB-01 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