Selección in vitro de epítopes T inmunogénicos con miras a la producción de vacunas para bovinos

Con el objetivo de reducir a futuro el uso de animales, con este proyecto se pretende determinar in vitro la afinidad de epítopes T optimizados frente al complejo mayor de histocompatibilidad II bovino (BoLA II), para esto se requiere identificar bovinos homocigotos cuyo alelo sea de alta frecuencia, para derivar los monocitos del animal homocigoto a células dendríticas se requiere la producción de IL-4 y GM-CSF. A la fecha se identificó un bovino cuyo alelo DRB3 es 10:01, alelo de alta frecuencia. Para la producción de las proteínas IL-4 y GM-CSF en su forma recombinante, los productos amplificados para cada uno de los genes fueron digeridos y ligados de manera individual en el vector pcDNA 3.1(-) y transformados en E. coli Top10. Debido a un problema en la ligación que no se logró solucionar, se diseñaron los genes sintéticos ya insertados en el vector pcDNA 3.1(-), los genes sintéticos se solicitaron a GenScript, adicionalmente. Inicialmente el proyecto se planteó para realizar los ensayos con sangre de tres bovinos homocigotos, sin embargo, ya que solo llegó 1 homocigoto al hato de la universidad, se replantearon los ensayos y se trabajará solo con ese individuo cuyo alelo DRB3.2*010:01. Una vez definido esto, se realizó un ensayo in silico y con base en los resultados de este ensayo se seleccionó el péptido que por predicción muestra mejor unión, el péptido pertenece a la proteína VP1 del virus. Haciendo uso de un coctel (IL4 + GM-CSF bovina) producido durante el estudio, se realizaron ensayos para encontrar el mejor protocolo para derivar los monocitos de sangre bovina a células dendríticas y con estas poder hacer los ensayos. Una vez estandarizado este protocolo, se realizaron los ensayos de estabilidad del clip bovino, asociación y disociación del péptido seleccionado y número de moléculas DR que activa el péptido. Para todos los ensayos se utilizó como control positivo un péptido de la ovoalbúmina (OVA[323- 335]).

• Autores: Ordoñez Salcedo, Diego Armando; Avendaño, Catalina; Celis Giraldo, Carmen Teresa
• Tipo de recurso: Investigation report
• Fecha de publicación: 2022
• Institución: Universidad de Ciencias Aplicadas y Ambientales U.D.C.A
• Repositorio: Repositorio Institucional UDCA
• Idioma: spa
• OAI Identifier: oai:repository.udca.edu.co:11158/4546
• Acceso en línea: https://repository.udca.edu.co/handle/11158/4546; https://repository.udca.edu.co
• Palabra clave: Vacunas; Epítopos; Ganado bovino
• Rights: closedAccess
• License: https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/legalcode.es