Estudio de los mecanismos moleculares de la acción antiproliferativa del Gibbilimbol B mediante aproximaciones proteómicas y bioinformáticas

Durante el segundo semestre del año 2020 se trabajo en la obtención de los IC50 del compuesto para las líneas celulares MCF7 y MDAMB. Se estimó una concentración de trabajo para ambos compuestos por debajo del valor de IC50. Lo anterior, para obtener población celular de análisis suficiente para los ensayos de proteómica. Las incubaciones se realizaron a 3 tiempos distintos (8,16 y 24 horas). Las células se colectaron, se lisaron, se liofilizaron y se prepararon para los ensayos proteómicos. A continuación, se detalla el flujo de actividades realizadas en Málaga y España: Los análisis por Label-free se exportaron a un excel que resume los resultados de la cuantificación relativa de proteínas en las muestras. Es importante resaltar que se decidió inyectar en el espectrómetro de masas cada una de las muestras después de la ejecución de un blanco. Esto se hace para evitar el posible arrastre de muestras inyectadas con anterioridad en la columna cromatográfica. Los ficheros exportados del Orbitrap se procesaron según el flujo de trabajo que data en la siguiente imagen: Tomada de : https://ars.els-cdn.com/content/image/1-s2.0-S1874391920300373-ga1_lrg.jpg Posteriormente, se realizaron los análisis bionformáticos usando Perseus, Cytoscape para la creación de redes de proteínas, y Cluego para la identificación de vías metabólicas implicadas [1-3]. Se realizaron ensayos de validación de muerte celular mediante citometría de flujo e inmunotransferencia Western que confirman la presencia de activación de la vía de las caspasas para la inducción de la muerte celular programada. La estandarización de estos ensayos permitió la validación de la actividad de estas vías a diferentes concentraciones usando el siguiente flujo de trabajo: El número de células dependiente de las fases de crecimiento exponencial propias de cada tipo celular es crítico en este tipo de procedimientos. En este sentido, se trabajaron siempre concentraciones de trabajo que permitieran obtener como mínimo entre 250-500 células/mL, en placas de 24 wells.

• Autores: Cardona Ramírez, Carolina; Mendez Callejas, Gina Marcela; Muñoz Cendales, Diego Ricardo
• Tipo de recurso: Investigation report
• Fecha de publicación: 2021
• Institución: Universidad de Ciencias Aplicadas y Ambientales U.D.C.A
• Repositorio: Repositorio Institucional UDCA
• Idioma: spa
• OAI Identifier: oai:repository.udca.edu.co:11158/4345
• Acceso en línea: https://repository.udca.edu.co/handle/11158/4345
• Palabra clave: Productos Biológicos; Gibbilimbol B; Fitoquímica
• Rights: closedAccess
• License: https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/legalcode.es