Identificación de perfiles cromatográficos (HPLC-DAD) de flavonoides presentes en especies de la familia Asteraceae como herramienta para su caracterización
33 páginas : gráficas
- Autores:
-
Cuervo Escobar, Sergio Andrei
- Tipo de recurso:
- Work document
- Fecha de publicación:
- 2019
- Institución:
- Universidad de Ciencias Aplicadas y Ambientales U.D.C.A
- Repositorio:
- Repositorio Institucional UDCA
- Idioma:
- spa
- OAI Identifier:
- oai:repository.udca.edu.co:11158/3554
- Acceso en línea:
- https://repository.udca.edu.co/handle/11158/3554
- Palabra clave:
- Asteraceae
Flavonoides
Análisis químico de las plantas
HPLC
Cromatografía
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- Derechos Reservados - Universidad de Ciencias Aplicadas y Ambientales
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Cuervo Escobar, Sergio Andrei2020-08-27T20:53:02Z2020-08-27T20:53:02Z2019-11-20https://repository.udca.edu.co/handle/11158/355433 páginas : gráficasEl consumo directo o en forma de infusiones de algunas especies de plantas ha sido usado tradicionalmente por la “medicina” popular, quien le ha atribuido “poderes curativos” a muchas de estas preparaciones. Hoy en día, y gracias a la experimentación en fitoquímica, se ha demostrado científicamente la actividad terapéutica de muchos extractos para diversas dolencias e incluso se ha demostrado su utilidad en términos de protección y prevención de enfermedades. Las investigaciones en este campo han mostrado que las diferentes actividades biológicas, a nivel terapéutico y/o protectivo, son debidas a un conjunto de metabolitos presentes en las plantas que han sido aislados y caracterizados en los últimos años. La identificación de especies vegetales promisorias y el aislamiento de sus metabolitos responsables sigue siendo un campo de investigación en aumento, que demanda, cada vez más, herramientas que permitan acelerar dichas investigaciones, aprovechando al máximo los recursos disponibles y asegurando una sostenibilidad ambiental. Dentro de las especies que han sido identificadas con potenciales aplicaciones terapéuticas se encuentra las pertenecientes a géneros de la familia Asteraceae (Chromolaena, Gnaphalium, Achyrocline y Gamochaeta entre otras) las cuales fueron objeto de este estudio con el cual se desarrolló y validó una metodología por HPLC-DAD que permite de forma rápida la determinación simultánea, tanto cualitativa como cuantitativa, de 12 flavonoides presentes en extractos de especies pertenecientes a géneros de la familia Asteraceae. Para el análisis cromatográfico se utilizó un Cromatógrafo líquido LaChrom Elite (Merck-Hitachi, Germany-Japan) equipado con una bomba cuaternaria, sistema de desgasificación en línea y un detector (UV/VIS) de arreglo de diodos (DAD), La separación se realizó en una columna de fase inversa Thermo scientific C18 de 250 mm x 4.6 mm y diámetro 5 µm (Phenomenex, USA) a temperatura ambiente, la cual se escogió por ser la columna que ofrece una mayor probabilidad de tener mejor resolución para los analitos trabajados. Se trabajaron inicialmente 14 moléculas de flavonoides mediante el uso de patrones de referencia certificados. Después de ensayar varias condiciones en busca de la separación de los 14 analitos se encontró que ninguna de las condiciones ensayadas fue capaz de separar adecuadamente los pares rutina-hiperósido y Apigenina-Hispidulina, debido a la similitud estructural que presentan, por lo tanto se procedió a ensayar con condiciones diferentes de fase móvil en los que se elevaron los porcentajes de ácido acético. Al finalizar estos análisis se concluyó que la separación de los pares de flavonoides rutina-hiperósido e hispidulina-apigenina, es un proceso que requiere de una metodología específica e independiente de la desarrollada para los demás analitos y aunque con algunos de estos métodos se logró una pequeña mejora en la resolución, probablemente un aumento drástico en la polaridad de la fase móvil, que lograría separarlos aún más, sacrificaría de manera significativa el tiempo total del análisis por un aumento en las retenciones que además conllevaría a un ensanchamiento de los picos y pérdida de sensibilidad. Por esta razón se decidió no realizar más modificaciones al gradiente y trabajar con 12 estándares, escogiendo entre uno solo de los estándares de los pares críticos. Tomando como criterios la abundancia en la familia de las asteráceas y la disponibilidad de material de trabajo, se excluyó el hiperósido y la hispidulina del resto del estudio. De todas las condiciones ensayadas, las que mostraron una mejor resolución y tiempo de análisis fueron: gradiente con ácido acético al 2% (A) y metanol (B) t 0min 70%A:30%B; t 25min 40%A:60%B; t 30min 40%A:60%B; t 45min 25%A:75%B; a Flujo de 1,1mL/min y volumen de inyección de 25 L. Se evaluaron distintas longitudes de onda gracias al detector DAD, basados en las estructuras y el coeficiente de absortividad, dentro de las cuales se tuvieron en cuenta aquellas reportadas en la literatura como las de mayor absorbancia para los flavonoides, se escogió la longitud de onda de 360nm para la identificación de cada una de las señales de los estándares en los cromatogramas pero se definieron longitudes de onda específicas para la cuantificación de cada uno de los flavonoides basados en los criterios anteriores. Bajo las condiciones anteriormente descritas se llevó a cabo el proceso de validación de la metodología. Mediante el uso de los patrones y extractos provenientes de algunas especies se evaluó la especificidad, linealidad, precisión y exactitud de la metodología establecida, encontrándose que en todos los casos se cumple con los criterios de aceptación para estos parámetros. De la misma forma, y a partir de la metodología establecida, fue posible obtener perfiles cromatográficos específicos de las especies Gnaphalium elegans, Achyrocline satureioides y Achyrocline bogotensis, pertenecientes a géneros de la familia Asteraceae. Lo anterior, además de ayudar en la caracterización e identificación de una especie puede permitir la determinación del potencial biológico de dicha especie perteneciente a la familia Asteraceae, mediante el establecimiento de patrones de señales cromatográficas (HPLC-DAD) específicas. Mediante la superposición de los perfiles cromatográficos para las réplicas de una misma especie fue posible confirmar que dicho patrón se mantiene y que existen señales específicas debidas tanto a los analitos trabajados como a otras no identificadas en este estudio, que permiten una caracterización confiable de la especie, dichos patrones y señales en estos también permiten una adecuada diferenciación de otras especies similares lo cual se observó mediante la superposición de los perfiles obtenidos de extractos provenientes de distintas especies. Finalmente, mediante la aplicación de la metodología desarrollada, se identificaron y cuantificaron los flavonoides presentes en los extractos de hoja y flor de Gnaphalium elegans, Achyrocline satureioides y Achyrocline bogotensis. Para la confirmación de la identidad de las señales se compararon los espectros obtenidos en el cromatograma de 3 dimensiones con el correspondiente al patrón de referencia para asegurar la pureza del pico y descartar posibles interferentes. Las mayores concentraciones de los flavonoides identificados para los extractos de hoja se encuentran en las especies A. bogotensis y G. elegans, mientras que la mayor concentración de flavonoides en los extractos de flor fueron encontrados en la especie A. satureioides.Línea de investigación Análisis Químico – Productos Naturalesapplication/pdfspaBogotá : Universidad de Ciencias Aplicadas y Ambientales, 2019Derechos Reservados - Universidad de Ciencias Aplicadas y Ambientaleshttps://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/info:eu-repo/semantics/closedAccessAtribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0)http://purl.org/coar/access_right/c_14cbAsteraceaeFlavonoidesAnálisis químico de las plantasHPLCCromatografíaIdentificación de perfiles cromatográficos (HPLC-DAD) de flavonoides presentes en especies de la familia Asteraceae como herramienta para su caracterizaciónInforme de investigaciónhttp://purl.org/coar/resource_type/c_8042info:eu-repo/semantics/workingPaperinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionTexthttp://purl.org/redcol/resource_type/WPhttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85PublicationORIGINALInforme-Técnico-Final Proyecto sergio cuervo.pdfInforme-Técnico-Final Proyecto sergio cuervo.pdfapplication/pdf1381213https://repository.udca.edu.co/bitstreams/5754aead-add2-4077-8d4d-f33aa4c9a433/downloadb774efb74b7a010ea2d1f34b03aa8f84MD51LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-814775https://repository.udca.edu.co/bitstreams/e9bd14cd-bbd4-48b5-992b-5c011169e4ed/downloadf661acf14bedbf9f5d13897a0387e751MD52TEXTInforme-Técnico-Final Proyecto sergio cuervo.pdf.txtInforme-Técnico-Final Proyecto sergio cuervo.pdf.txtExtracted texttext/plain79823https://repository.udca.edu.co/bitstreams/775f2635-0e63-40e8-bc35-6a34548d7173/downloadf779ea2c9edb4717d850a8a3ab714cadMD53THUMBNAILInforme-Técnico-Final Proyecto sergio 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