Estandarización del inmunoensayo elisa para la detección de IgG anti-Toxoplasma gondii en ratón

Se describe la estandarización de un inmunoensayo (ELISA) para la detección de IgG contra Toxoplasma gondii en ratones. Esta prueba tiene interés como herramienta en el estudio de cepas y en el diagnostico de la toxoplasmosis en muestras de origen humano. Se determinaron las mejores condiciones para...

Full description

Autores:
Cardona Pérez, Néstor Iván
Tipo de recurso:
Trabajo de grado de pregrado
Fecha de publicación:
2005
Institución:
Universidad del Quindío
Repositorio:
Repositorio Universidad del Quindío
Idioma:
spa
OAI Identifier:
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Acceso en línea:
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Palabra clave:
Toxoplasma gondii
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description Se describe la estandarización de un inmunoensayo (ELISA) para la detección de IgG contra Toxoplasma gondii en ratones. Esta prueba tiene interés como herramienta en el estudio de cepas y en el diagnostico de la toxoplasmosis en muestras de origen humano. Se determinaron las mejores condiciones para la realización de la prueba (diferentes agentes bloqueadores, diferentes concentraciones de antígeno y concentración optima de conjugado). No hubo diferencias significativas en cuanto a la función de los agentes bloqueadores por lo que se decidió trabajar con tampón de recubrimiento (buffer coating) con albúmina bovina al 1%. El valor óptimo de concentración de antígeno fue de 20µg/ml y para el conjugado la dilución óptima fue de 1:30.000.
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El valor óptimo de concentración de antígeno fue de 20µg/ml y para el conjugado la dilución óptima fue de 1:30.000.Resumen 2 1 Introducción 3 2 Estado general del tema 4 2.1 Antecedentes 4 2.2 Toxoplasma y toxoplasmosis 6 2.2.1 Taxonomía 6 2.2.2 Ciclo de vida 6 2.3 Epidemiología: Importancia de la toxoplasmosis 14 2.4 Métodos diagnósticos 15 2.4.1 Isotipos de anticuerpos específicos durante la infección 15 2.4.2 Métodos de medición de anticuerpos 17 2.4.2.1 Inmunoflorescencia indirecta IFI 17 2.4.2.2 Prueba de Sabin y Feldman 17 2.4.2.3 Aglutinación diferencial (Ac/Hs) 18 2.4.2.4 Técnica inmunoenzimática ELISA 18 2.4.2.4.1 Dispositivos empleados en ELISA 19 2.4.2.4.2 Fases de un ensayo ELISA 20 2.4.2.4.3 Tipos de ensayo ELISA 21 2.5 Pruebas directas (detección del parasito) 23 2.5.1 Inoculación en ratón 23 2.5.2 Cultivo celular 23 2.5.3 Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) 24 3 Planteamiento del problema 25 4 Justificación 26 5 Objetivos 27 5.1 Objetivo general 27 5.2 Objetivos específicos 27 6 Metodología 27 6.1 Ratones 28 6.2 Parásitos 28 6.3 Obtención de antígeno total soluble de Toxoplasma gondii 28 6.4 Muestras 29 6.5 Estandarización del inmunoensayo ELISA 29 6.6 Prueba de reacción cruzada 31 7 Resultados 32 7.1 Resultados para la concentración de antígeno y revelado con el sustrato 32 7.2 Resultados para el efecto de los diferentes bloqueadores 33 7.3 Determinación del punto de corte 34 7.4 Resultado para la prueba de reacción cruzada 35 8 Discusión 36PregradoLicenciado en Biología y Educación Ambientalapplication/pdfspaDerechos reservados - Universidad del Quindíohttps://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/info:eu-repo/semantics/openAccessAtribución-NoComercial 4.0 Internacional (CC BY-NC 4.0)http://purl.org/coar/access_right/c_abf2Estandarización del inmunoensayo elisa para la detección de IgG anti-Toxoplasma gondii en ratónTrabajo de grado - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1finfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionTexthttps://purl.org/redcol/resource_type/TPhttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85Toxoplasma gondiiSueros negativosNICOLLE, C and MANCEAUX, L. 1909. Sur un protozoaire nouveau de Gondi, Toxoplasma. Archives Institut Pasteur (Tunis). 2 :97-103.SHERRIS, J.C. 1993. Esporozoos. Microbiología Médica. Editorial Doyma. España. Cap 52: 783-815GODARD, I., DARCY, F., DESLEE, D., DESSAINT, J.P., CAPRON, A. 1990. Isotypic Profiles of Antibody Responses to Toxoplasma Gondii Infection in Rats and Mice: Kinetic Study and Characterization of Target Antigens of Immunoglobulin A Antibodies. Infection and Immunity. 2446-2451.JAIMES SAAVEDRA M.R., LEÓN PLAZAS M.P. 2000. Estandarización y evaluación de una técnica de inmunoflorescencia indirecta (IFI) para detección de IgG anti-Toxoplasma basada en el principio de avidez. Trabajo de grado. Bogota. Pontificia Universidad Javeriana. 20EISEN, H.N. SISKIND, G.W. 1964. Variations of affinities of antibodies during the immune response. 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