Perfil de porinas asociado a la impermeabilidad celular en cepas de Klebsiella pneumoniae resistentes a antimicrobianos

Las bacterias del genero Klebsiella son una causa frecuente de infecciones nosocomiales. Uno de los principales factores de virulencia son las proteínas de membrana externa. Se ha descrito previamente que Klebsiella pneumoniae sintetiza dos porinas mayores, OmpK35 y OmpK36 y una porina quiescente Om...

Full description

Autores:
Múnera Martínez, Leonardo
Tipo de recurso:
Trabajo de grado de pregrado
Fecha de publicación:
2009
Institución:
Universidad del Quindío
Repositorio:
Repositorio Universidad del Quindío
Idioma:
spa
OAI Identifier:
oai:bdigital.uniquindio.edu.co:001/6002
Acceso en línea:
https://bdigital.uniquindio.edu.co/handle/001/6002
Palabra clave:
Membrana externa
Porinas
Antibiótico-resistencia
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description Las bacterias del genero Klebsiella son una causa frecuente de infecciones nosocomiales. Uno de los principales factores de virulencia son las proteínas de membrana externa. Se ha descrito previamente que Klebsiella pneumoniae sintetiza dos porinas mayores, OmpK35 y OmpK36 y una porina quiescente OmpK37. OmpK35 permite una penetración más eficiente de cafalosporinas que OmpK36. Este es el primer informe en Colombia en el que se caracterizan molecularmente aislados klebsiella por expresión de porinas y su asociación a la resistencia a antimicrobiales. De 37 aislados clínicos provenientes de la clínica central de Armenia, 25 fueron identificados como Klebsiella pneumoniae y 3 como Klebsiella oxytoca. Su nivel de susceptibilidad se evaluó por el método de sensibilidad por difusión en disco con 11 antimicrobianos para discriminar cepas resistentes. Se determino la concentración mínima inhibitoria para las cepas resistentes con todos los antibióticos por la técnica de difusión en caldo. Las proteínas de membrana externa fueron aisladas de las cepas resistentes, su presencia o ausencia se determino por SDS-PAGE. Se encontraron ocho fenotipos diferentes de resistencia, todos los aislados sensibles presentaron las porinas OmpK35 y OmpK36, dos de los nueve aislados resistentes que expresaron las dos porinas, OmpK35 y OmpK36, presentaron el menor número de resistencias. Se observo relación entre la ausencia de expresión de OmpK35 y la resistencia a ceftazidima, cefazolina, cefuroxima, aztreonam y gentamicina., OmpK36 no influyo en las resistencias encontradas ni en decrecimientos de CIM. El único aislado resistente a ciprofloxacina fue Klebsiella oxytoca.
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Se determino la concentración mínima inhibitoria para las cepas resistentes con todos los antibióticos por la técnica de difusión en caldo. Las proteínas de membrana externa fueron aisladas de las cepas resistentes, su presencia o ausencia se determino por SDS-PAGE. Se encontraron ocho fenotipos diferentes de resistencia, todos los aislados sensibles presentaron las porinas OmpK35 y OmpK36, dos de los nueve aislados resistentes que expresaron las dos porinas, OmpK35 y OmpK36, presentaron el menor número de resistencias. Se observo relación entre la ausencia de expresión de OmpK35 y la resistencia a ceftazidima, cefazolina, cefuroxima, aztreonam y gentamicina., OmpK36 no influyo en las resistencias encontradas ni en decrecimientos de CIM. El único aislado resistente a ciprofloxacina fue Klebsiella oxytoca.Resumen 5 abstract 5 1. Introducción 6 2. Marco teórico 7 2.1. Genero Klebsiella 7 2.1.2. Clasificación 8 2.2. Factores De Virulencia 9 2.3. Antimicrobianos 9 2.4. Mecanismos de resistencia 10 2.5. Pared celular en bacterias Gram negativas 12 3. Estado del arte 15 4. Objetivos 18 4.1. General 18 4.2. Específicos 18 5. Materiales y métodos 19 5.1. Cepas de bacterias y cultivo 19 5.2. Identificación bioquímica 19 Resumen 5 abstract 5 1. Introducción 6 2. Marco teórico 7 2.1. Genero klebsiella 7 2.1.2. Clasificación 8 2.2. Factores de virulencia 9 2.3. Antimicrobianos 9 2.4. Mecanismos de resistencia 10 2.4.1. Modificación enzimática del antibiótico: 10 2.4.2. Β- lactamasas de espectro extendido (blee): 10 2.4.3. Bombas de expulsión: 11 2.4.4. Cambios en la permeabilidad de la membrana externa: 11 2.4.5. Alteraciones del sitio de acción: 12 2.5. Pared celular en bacterias gram negativas 12 2.5.1 porinas 13 3. Estado del arte 15 4. Objetivos 18 4.1. General 18 4.2. Específicos 18 5. Materiales y métodos 19 5.1. Cepas de bacterias y cultivo 19 5.2. Identificación bioquímica 19 5.3. Pruebas de Susceptibilidad 19 5.4. Extracción de ADN 20 5.5. Presencia de los genes OmpK35, OmpK36 y OmpK37 por PCR 20 5.6. Extracción de la fracción de membrana externa y perfil de porinas 21 6. Resultados y discusión 22 6.1. Identificación de especies 22 6.2. Pruebas de Susceptibilidad 23 6.3. Presencia de los genes OmpK35, OmpK36 y OmpK37 por PCR 27 6.4. Perfil de porinas 28PregradoBiólogoapplication/pdfspaDerechos reservados Universidad del Quindíohttps://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/info:eu-repo/semantics/openAccessAtribución-NoComercial 4.0 Internacional (CC BY-NC 4.0)http://purl.org/coar/access_right/c_abf2Perfil de porinas asociado a la impermeabilidad celular en cepas de Klebsiella pneumoniae resistentes a antimicrobianosTrabajo de grado - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1finfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionTexthttps://purl.org/redcol/resource_type/TPhttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85Membrana externaPorinasAntibiótico-resistenciaAlbertí, S. Marqués, G. 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J., Talbot, H.W., Morrow, J.E. 1978. Isolation of Klebsiellae from within living wood. Appl. Environ. Microbiol, 36:178–185.Facultad de Ciencias Básicas y TecnologíasArmeniaCiencias Básicas y Tecnologías - BiologíaPublicationORIGINALPERFIL DE PORINAS ASOCIADO A LA IMPERMEABILIDAD CELULAR EN CEPAS DE Klebsiella pneumoniae RESISTE.pdfPERFIL DE PORINAS ASOCIADO A LA IMPERMEABILIDAD CELULAR EN CEPAS DE Klebsiella pneumoniae RESISTE.pdfapplication/pdf1098121https://bdigital.uniquindio.edu.co/bitstreams/271c9f92-4509-417e-b042-2b25a3ac46c2/download974026c08657758acee729d233841c5eMD51LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-814828https://bdigital.uniquindio.edu.co/bitstreams/43c2c902-7516-4943-bede-b85e6570ca9a/download2f9959eaf5b71fae44bbf9ec84150c7aMD52TEXTPERFIL DE PORINAS ASOCIADO A LA IMPERMEABILIDAD CELULAR EN CEPAS DE Klebsiella pneumoniae RESISTE.pdf.txtPERFIL DE PORINAS ASOCIADO A LA IMPERMEABILIDAD CELULAR EN CEPAS DE Klebsiella pneumoniae RESISTE.pdf.txtExtracted 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