Estudio in Silico y Experimental de la Proteína SAG-Related Sequence 12B (SRS12B) de Toxoplasma gondii (2018)
Las proteínas SRS (Sag-related sequence) de Toxoplasma gondii son de interés porque median la adhesión del parásito a la célula hospedadora y, además, modulan la respuesta inmune dentro del hospedador; SRS12B es una SRS identificada in silico por medio del software ApiPredictorAd UniQE 2.0 como posible adhesina del parásito, sin embargo, hasta el momento no se cuenta con una descripción estructural ni funcional y su rol biológico no se ha demostrado experimentalmente , por lo tanto, en este trabajo se buscó realizar una descripción in silico de la estructura de la proteína SRS12B de T. gondii y evaluar las condiciones de expresión in vitro en el modelo Escherichia coli BL21 DE3, como primer paso para la comprensión de la funcionalidad biológica de la proteína. Se encontró que SRS12B consta de dos dominios SAG típicos a ambos extremos, presentando una topología en tipo mancuerna característico de otros miembros de la familia. En cuanto a su estructura secundaria está compuesta por 21 láminas beta paralelas y antiparalelas formando una estructura tipo β-Sandwich estabilizadas por la unión por puentes disulfuro. SRS12B es una proteína homodimérica, el interfaz de los dominios D1 muestran una ranura definida para la interacción con el ligando. El acoplamiento molecular realizado con la molécula heparina presento una energía libre de interacción de -12.5 Kcal/mol. En cuanto a la fase experimental, se logró clonar con éxito el plásmido pEXP5-CT/TOPO con la región codificante para SRS12B en E. coli One Shot TOP10 y posteriormente en E. coli BL21 DE3, donde se estandarizaron las condiciones de expresión de la proteína recombinante encontrando una producción optima de la proteína a OD600: 0,3, 1mM IPTG y 37°C. En este estudio se presentan los primeros datos bioinformáticos y experimentales relacionados con SRS12B.