Efecto de la Combinación de Péptidos PEPTIR Sobre la Sensibilidad y Especificidad en Biosensores Electroquímicos Para la Detección de Escherichia coli O157:H7 en Matrices Acuosas

Digital

Autores:
Serrano-Monsalve, Laura Cristina
Tipo de recurso:
Trabajo de grado de pregrado
Fecha de publicación:
2022
Institución:
Universidad de Santander
Repositorio:
Repositorio Universidad de Santander
Idioma:
spa
OAI Identifier:
oai:repositorio.udes.edu.co:001/8702
Acceso en línea:
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Palabra clave:
Electrodo
Electroquímica
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spelling Ropero-Vega, Jose Luisae219f3c-387c-4d70-8527-83603f55af28-1Flórez-Castillo, Johanna Marcela54298018-2f22-4018-a2ed-a40309cf1e82-1Serrano-Monsalve, Laura Cristina9a13b258-e320-4ee6-8ee5-dcccc4448379-1Parra-Aparicio, Gina Patricia3b25aa08-0c68-4db2-9d83-8d345dd99a92-1Albarracín-Arias, Jorge Alberto5b46bc87-576c-44e2-b25f-5a7a4afd24bf-1Ciencias Básicas y Aplicadas para la Sostenibilidad2023-06-22T14:44:06Z2023-06-22T14:44:06Z2022-11-16DigitalEl diseño de biosensores electroquímico se ha estado empleando como un método alternativo para la detección de microorganismos patógenos debido a su simplicidad y alta sensibilidad. En este proyecto de grado se desarrolló un biosensor electroquímico para la detección analítica rápida de Escherichia coli O157:H7 mediante la modificación de un electrodo serigrafiado (SPE) con nanopartículas de oro y elementos biológicos de reconocimiento. Para dichos elementos biológicos, se utilizaron 2 péptidos diseñados en el grupo de investigación CIBAS. El péptido 1 (PEPTIR 1) y péptido 2 (PEPTIR 2), los cuales difieren en el cambio de un aminoácido, una asparagina por una alanina, esto confiere parámetros de interacción molecular con la proteína intimina superiores en PEPTIR 2.0, además, presenta mejores valores de afinidad de unión y constante de disociación. Los dos péptidos tienen la misma región de unión al interactuar con la proteína intimina, sin embargo, el PEPTIR 1.0 genera un menor número de contactos intermoleculares (52 contactos) que el PEPTIR 2.0 (63 contactos), por esto, es más sensible para detectar microorganismos como S. aureus y P. aeruginosa y el PEPTIR 2,0 es más específico o selectivo para E.coli patógena, por consiguiente, surgió la importancia de combinar estos dos elementos de reconocimiento en un mismo biosensor y así determinar el efecto que tienen sobre la especificidad y la sensibilidad al momento de detectar Escherichia coli O157:H7. La medición de las propiedades electroquímicas del biosensor se realizaron a través de las técnicas de espectroscopia de impedancia electroquímica, voltametría de onda cuadrada y voltametría cíclica. Los resultados obtenidos concluyeron que la combinación que mejor presento resultados fue la combinación I, donde se trabajó con concentraciones de 10,0 nM para el PEPTIR-1 y 5.0 nM de PEPTIR-2, obteniendo límites de detección y cuantificación de 3 UFC/mL y 11 UFC/mL, respectivamente.Electrochemical biosensor design has been used as an alternative method for the detection of pathogenic microorganisms due to its simplicity and high sensitivity. In this degree project, an electrochemical biosensor was developed for the rapid analytical detection of Escherichia coli O157:H7 by modifying a screen-printed electrode (SPE) with gold nanoparticles and biological recognition elements. For these biological elements, 2 peptides designed in the CIBAS research group were used. Peptide 1 (PEPTIR 1) and peptide 2 (PEPTIR 2), which differ in the change of an amino acid, an asparagine for an alanine, this confers higher molecular interaction parameters with the intimin protein in PEPTIR 2.0, in addition, it presents better binding affinity and dissociation constant values. The two peptides have the same binding region when interacting with the intimin protein, however, PEPTIR 1.0 generates fewer intermolecular contacts (52 contacts) than PEPTIR 2.0 (63 contacts), therefore, it is more sensitive to detect microorganisms such as S. aureus and P. aeruginosa and PEPTIR 2.0 is more specific or selective for pathogenic E.coli, therefore, it was important to combine these two recognition elements in the same biosensor and thus determine the effect they have on the specificity and sensitivity at the time of detecting Escherichia coli O157:H7. The measurement of the electrochemical properties of the biosensor was carried out through the techniques of electrochemical impedance spectroscopy, square wave voltammetry and cyclic voltammetry. The results obtained concluded the results obtained concluded that the combination that presented the best results was combination I, where concentrations of 10.0 nM for PEPTIR-1 and 5.0 nM for PEPTIR-2 were worked, obtaining detection and quantification limits of 3 CFU/mL. and 11 CFU/mL, respectively.PregradoMicrobiólogo IndustrialNanotecnología y biomaterialesTabla de Contenido Capítulo 1 20 Introducción 20 Capítulo 2 24 Objetivos 24 Objetivo General 24 Objetivos Específicos 24 Capítulo 3. Marco de Referencia 25 Marco de Antecedentes 25 Década de los 60 y 70 25 Actualidad 26 Marco Teórico 27 Escherichia coli 27 Escherichia coli O157:H7 27 Métodos Tradicionales de Detección 28 Filtración por Membrana 28 Métodos Moleculares (PCR) 29 Método del Número Más Probable 29 Biosensor Electroquímico 30 Componentes de los Biosensores Electroquímicos 31 Elementos de Reconocimiento 31 Transductor 32 Traducción Electroquímica – Técnicas 33 Espectroscopia de Impedancia Electroquímica 33 Voltametría de Onda Cuadrada (SWV) 33 Voltametría Cíclica (CV) 34 Capítulo 4. Marco Legal 35 Capítulo 5. Metodología 36 Equipos y Materiales 36 Instrumentación 36 Electrodos 36 Reactivos 36 Material Microbiológico 36 Péptidos 37 Métodos y Procedimientos Analíticos 37 Técnicas Electroquímicas 37 Electrodeposición de AuNPs. 38 Inmovilización de Péptidos 39 Caracterización Electroquímica 40 Capítulo 5. Resultados y Discusión 42 Establecimiento de las combinaciones de péptidos PEPTIR mediante biosensores electroquímicos. 42 Curva de Calibración 47 Límites de Detección (LDD) y Límites de Cuantificación (LDC) 48 Linealidad del Biosensor 49 Prueba de Selectividad 51 Conclusiones 55 Recomendaciones 56 Referencias Bibliográficas 57 Apéndices 6272 papplication/pdfUniversidad de SantanderT33.22 S277eRepositorio Digital Universidad de Santanderhttps://repositorio.udes.edu.cohttps://repositorio.udes.edu.co/handle/001/8702spaUniversidad de SantanderBucaramangaFacultad de Ciencias NaturalesBucaramanga, ColombiaMicrobiología IndustrialArtigues, M. (2019). Estudio de biosensores electroquímicos basados en inmovilización enzimática. 235.Bilinski P., Kapka-Skrzypczak L., Posobkiewicz M., Bondaryk M., Holownia P., Wojtyla A. Public health hazards in Poland posed by foodstuffs contaminated with E. coli O104:H4 bacterium from the recent European outbreak. Ann. Agric. Environ. 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Al consultar y hacer uso de este recurso, está aceptando las condiciones de uso establecidas por los autores.https://repositorio.udes.edu.coRepositorio Universidad de 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