Estandarización de protocolos de transformación genética en Escherichia coli y Agrobacterium tumefaciens para la generación de una colección de constructos génicos
1 recurso en línea (páginas 9-16).
- Autores:
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Gómez Arias, Linda Yhiset
Gómez Daza, Silvia
Núñez Zarantes, Víctor
- Tipo de recurso:
- Article of journal
- Fecha de publicación:
- 2018
- Institución:
- Universidad Pedagógica y Tecnológica de Colombia
- Repositorio:
- RiUPTC: Repositorio Institucional UPTC
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- oai:repositorio.uptc.edu.co:001/2374
- Acceso en línea:
- http://repositorio.uptc.edu.co/handle/001/2374
- Palabra clave:
- Ingeniería genética vegetal
Genética vegetal
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- openAccess
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- Copyright (c) 2018 Universidad Pedagógica y Tecnológica de Colombia
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Gómez Arias, Linda YhisetGómez Daza, SilviaNúñez Zarantes, Víctor2019-02-04T20:38:30Z2019-02-04T20:38:30Z2018-07-04Gómez Arias, L. Y., Gómez Daza, S. & Núñez Zarantes, V. (2018). Estandarización de protocolos de transformación genética en Escherichia coli y Agrobacterium tumefaciens para la generación de una colección de constructos génicos. Ciencia en Desarrollo, 9(2), 9-16. DOI: https://doi.org/10.19053/01217488.v9.n2.2018.3861. http://repositorio.uptc.edu.co/handle/001/23742462-7658http://repositorio.uptc.edu.co/handle/001/237410.19053/01217488.v9.n2.2018.38611 recurso en línea (páginas 9-16).An important tool in plant genetic engineering is the vectors or genic constructs that contain reporter genes, utilized to facilitate the standardization of genetic transformation protocols. The objective of this study was evaluate genetic transformation protocols for generate in a quick and confinable manner, a base collection of genic constructs in Escherichia coli strain DH5α and Agrobacterium tumefaciens strains LBA 4404, EHA 105 y C58, using 25 binary vectors (pSK1019, pMP2482 y 23 de la serie pCAMBIA) that contain the reporter genes gfp and gus, by using the heat shock and electroporation techniques. The transformants confirmation was made by PCR amplification and by restriction enzymes assay with Eco RI and Xho I. These approaches allowed verifying the presence Successful of the 25 vectors inside the used bacteria. The results indicate that it is necessary to standardize the transformation protocols in the bacterial strains to be used because they do not all transform with the same conditions and this work can be a reference for the standardization in other laboratories of genetic transformation when working in a massive way.Una herramienta necesaria en la ingeniería genética de plantas son los vectores o constructos génicos que contienen genes reporteros, pues facilitan la estandarización de procedimientos de transformación genética. El objetivo de este estudio fue evaluar protocolos de transformación genética para generar un procedimiento que permitiera de manera rápida y confiable obtener una colección base de constructos génicos en Escherichia coli cepa DH5α y Agrobacterium tumefaciens cepas LBA 4404, EHA 105 y C58, empleando 25 vectores binarios (pSK1019, pMP2482 y 23 de la serie pCAMBIA) que contienen los genes reporteros gfp y gus utilizando las técnicas de choque térmico y electroporación. La confirmación de los transformantes se realizó mediante PCR y cortes con enzimas de restricción (Eco RI y Xho I), lo que permitió verificar la presencia exitosa de estos 25 vectores dentro de las bacterias empleadas. Los resultados indican que es necesario estandarizar los protocolos de transformación en las cepas bacterianas a util izar porque no todas transforman con las mismas condiciones y este trabajo puede ser un referente para la estandarización en otros laboratorios de transformación genética cuando se trabaja de manera masiva.Bibliografía y webgrafía: páginas 15-16.application/pdfspaUniversidad Pedagógica y Tecnológica de ColombiaCopyright (c) 2018 Universidad Pedagógica y Tecnológica de Colombiahttps://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/info:eu-repo/semantics/openAccessAtribución-NoComercial 4.0 Internacional (CC BY-NC 4.0)http://purl.org/coar/access_right/c_abf2https://revistas.uptc.edu.co/index.php/ciencia_en_desarrollo/article/view/3861/7244Estandarización de protocolos de transformación genética en Escherichia coli y Agrobacterium tumefaciens para la generación de una colección de constructos génicosStandardization of genetic transformation protocols in Escherichia coli and Agrobacterium tumefaciens for the generation of a collection of gene constructsArtículo de revistahttp://purl.org/coar/resource_type/c_6501http://purl.org/coar/resource_type/c_2df8fbb1info:eu-repo/semantics/articleinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionTexthttps://purl.org/redcol/resource_type/ARThttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85N. Castañeda, J. Chaparro y J. Castellanos, “Tecnología de la clonación y expresión génica en un sistema bacteriano y su aplicación en virología”, Revista de la Facultad de Medicina, vol. 11, pp. 43-53, 2006.Sambrook J. and Russell D. Molécular cloning a laboratory manual. Edition 3a, New York, Cold spring harbor laboratory press. 1.35-1.37. 2001.D. Hanahan. “Studies on transformation of Escherichia coli with plasmids”, Journal of Molécular Biology, Vol. 166, no 4, pp. 557- 580, 1983Madigan M, Martinko J, and Parker J, Brock Biología de los Microorganismos, Octava edición, Madrid, Prentice Hall Iberia. 1999S. Domingues, K. Harms, WF. Fricke, P. Johnsen, Pål, G. da Silva, and K. Nielsen, “Natural Transformation Facilitates Transfer of Transposons, Integrons and Gene Cassettes between Bacterial Species”, Plos Pathog, vol. 8, pp 1-15, 2012.] D. Hanahan, J. and Jessee, F.R. Bloom Plasmid transformation of Escherichia coli and other bacteria Methods in Enzymology, Vol. 204, pp. 63-113, 1991.D. Prakash, G. Anish, R. Jagadeesh and D. Chakravortty, “Bacterial transformation using micro-shock waves”, Anal Bioc, vol. 419, pp 292–301, 2011.B. Pope and M. Kent, “High efficiency 5 min transformation of Escherichia coli”, Nuc Acids, vol. 24 no 3, pp 536-537, Dec 1996.M. Jacobs, S. Wnendt, and U. Stahl, “High-efficiency electro-transformation of Escherichia coli with DNA from ligation mixtures”, Nucleic Acids Res, vol. 18, pp 1653, Mar 1990J. Diver, L. Bryan, and P. Sokol, “Transformation of Pseudomonas aeruginosa by electroporation”, Analytical Biochemistry , vol. 189, no 1 pp 75–79. 1990.T. Durfee, R. Nelson, S. Baldwin, G. Plunkett III, V. Burland, B. Mau, JF. Petrosino, X. Qin, D. Muzny, M. Ayele, RA. Gibbs, B. Csorgo, G. Posfai, G. Weinstock and F. Blattner, “The Complete Genome Sequence of Escherichia coli DH10B: Insights into the Biology of a Laboratory Workhorse”, J Bacteriol, vol. 190 (7), pp 2597-2606, Feb 2006A. Valderrama, R. Arango and L. Afanador “Transformación de plantas mediada por Agrobacterium: ingeniería genética natural aplicada”. Facultad Nacional Agraria de Medellín, vol. 58: 2569-2585. 2005.E. Kunitake, S. Tani, J. Sumitani and T. Kawaguchi Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation of Aspergillus aculeatus for insertional mutagenesis AMB Express. 1: 46. 2011.B. Stanton, “Agrobacterium-Mediated Plant Transformation: the Biology behind the “Gene-Jockeying” Tool”, Microbiology and molécular Biology Reviews, vol. 67 vol .1 pp. 16-37. 2003C. Walkerpeach and J. Velten “Agrobacterium-mediated gene transfer to plant cells” in: Plant Molécular Biology Manual G. Stanton, R. Schilperoor,. Editorial Springer Science + Business Media, B.V. 2, EE.UU, PMAN-B1/11, PMAN-B1/12 y PMAN-B1/13. 1994. [online].J. Utermark and P. Karlovsky, “Genetic transformation of filamentous fungi by Agrobacterium tumefaciens” Protocol Exchange [online]. 2008 disponible in: http://www.nature.com/protocolexchange/protocols/427.J. Hernández, L. Mariño, M. Orozco y J. Narváez. Uso de la Reacción en Cadena de la Polimerasa para caracterizar aislamientos nativos de Bacillus thuringiens. Revista Corpoica. Vol. 1 (2), 1997J. Abello, S. Kelemu and C. Garcia, “Agrobacterium-mediated transformation of the endophytic fungus Acremonium implicatum associated with Brachiaria grasses”, Mycology research, vol. 112, pp 407-413, 2008.R. Saini and K. Jaiwal “Transformation of a recalcitrant grain legume, Vigna mungo L. Hepper, using Agrobacterium tumefaciens-mediated gene transfer to shoot apical meristem cultures”, Springer Berlin, 24(3): 164-171. 2005.A. López “Transformación genética mediada por Agrobacterium tumefaciensy recuperación de plantas trasgénicas de papa (Solanum tuberosum sp. andigena var Pastusa premia)” trabajo de fin de Master. Univ. Nacional de Colombia, 2006.Ciencia en Desarrollo;Volumen 9, número 2 (Julio-Diciembre 2018)Ingeniería genética vegetalGenética vegetalPlantas - Expresión del genTransformación genética vegetalVectores genéticosGen reporteroElectroporaciónConstructo génicoTransformación genéticaORIGINALPPS_959_Estandarizacion_protocolos_transformacion.pdfPPS_959_Estandarizacion_protocolos_transformacion.pdfArchivo principalapplication/pdf720655https://repositorio.uptc.edu.co/bitstreams/5ca13af1-15d5-437a-9af3-de92ee30d14c/downloade0465355ef7c43b432a15b8fdad011d1MD51LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-814798https://repositorio.uptc.edu.co/bitstreams/30a389d9-a71f-43ca-88e7-caed92b35b8a/download88794144ff048353b359a3174871b0d5MD52TEXTPPS-959.pdf.txtPPS-959.pdf.txtExtracted 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