Isolation of human bone marrow mesenchymal stem cells and evaluation of their osteogenic potential
Las células madre mesenquimatosas de médula ósea humana (abreviadas hBMSCs) constituyen una fuente de células auto-renovables con alto potencial de diferenciación, comúnmente aisladas a partir de los aspirados medulares en huesos largos. Su diferenciación hacia el linaje osteogénico, por ejemplo, ha...
- Autores:
-
García-Quiroz, F. (Felipe)
Posada-Estefan, O. (Olga)
Gallego Pérez, D. (Daniel)
Higuita-Castro, N. (Natalia)
Sarassa-Velásquez, C. (Carlos)
Hansford, D. (Derek)
Agudelo-Florez, P. (Piedad)
López-Rojas, L. E. (Luis Ernesto)
- Tipo de recurso:
- Article of journal
- Fecha de publicación:
- 2008
- Institución:
- Universidad EIA .
- Repositorio:
- Repositorio EIA .
- Idioma:
- eng
- OAI Identifier:
- oai:repository.eia.edu.co:11190/444
- Acceso en línea:
- https://repository.eia.edu.co/handle/11190/444
- Palabra clave:
- RBI00031
BIOMATERIALES
BIOMATERIALS
TECNOLOGÍAS PARA LA SALUD
TECHNOLOGY IN HEALTH
BONE AND BONES - GROWTH & DEVELOPMENT
HUESOS - CRECIMIENTO & DESARROLLO
CELL DIFFERENTIATION
MESENCHYMAL STEM CELLS
MINERALIZATION
OSTEOGENIC MARKERS
TISSUE ENGINEERING
DIFERENCIACIÓN CELULAR
CÉLULAS MADRE MESENQUIMATOSAS
MINERALIZACIÓN
MARCADORES OSTEOGÉNICOS
INGENIERÍA DE TEJIDOS
- Rights
- openAccess
- License
- Derechos Reservados - Universidad EIA, 2020
id |
REIA2_fa6c6f674ffc125a9b2b27959f222d70 |
---|---|
oai_identifier_str |
oai:repository.eia.edu.co:11190/444 |
network_acronym_str |
REIA2 |
network_name_str |
Repositorio EIA . |
repository_id_str |
|
dc.title.spa.fl_str_mv |
Isolation of human bone marrow mesenchymal stem cells and evaluation of their osteogenic potential |
title |
Isolation of human bone marrow mesenchymal stem cells and evaluation of their osteogenic potential |
spellingShingle |
Isolation of human bone marrow mesenchymal stem cells and evaluation of their osteogenic potential RBI00031 BIOMATERIALES BIOMATERIALS TECNOLOGÍAS PARA LA SALUD TECHNOLOGY IN HEALTH BONE AND BONES - GROWTH & DEVELOPMENT HUESOS - CRECIMIENTO & DESARROLLO CELL DIFFERENTIATION MESENCHYMAL STEM CELLS MINERALIZATION OSTEOGENIC MARKERS TISSUE ENGINEERING DIFERENCIACIÓN CELULAR CÉLULAS MADRE MESENQUIMATOSAS MINERALIZACIÓN MARCADORES OSTEOGÉNICOS INGENIERÍA DE TEJIDOS |
title_short |
Isolation of human bone marrow mesenchymal stem cells and evaluation of their osteogenic potential |
title_full |
Isolation of human bone marrow mesenchymal stem cells and evaluation of their osteogenic potential |
title_fullStr |
Isolation of human bone marrow mesenchymal stem cells and evaluation of their osteogenic potential |
title_full_unstemmed |
Isolation of human bone marrow mesenchymal stem cells and evaluation of their osteogenic potential |
title_sort |
Isolation of human bone marrow mesenchymal stem cells and evaluation of their osteogenic potential |
dc.creator.fl_str_mv |
García-Quiroz, F. (Felipe) Posada-Estefan, O. (Olga) Gallego Pérez, D. (Daniel) Higuita-Castro, N. (Natalia) Sarassa-Velásquez, C. (Carlos) Hansford, D. (Derek) Agudelo-Florez, P. (Piedad) López-Rojas, L. E. (Luis Ernesto) |
dc.contributor.author.spa.fl_str_mv |
García-Quiroz, F. (Felipe) Posada-Estefan, O. (Olga) Gallego Pérez, D. (Daniel) Higuita-Castro, N. (Natalia) Sarassa-Velásquez, C. (Carlos) Hansford, D. (Derek) Agudelo-Florez, P. (Piedad) López-Rojas, L. E. (Luis Ernesto) |
dc.subject.lcsh.spa.fl_str_mv |
RBI00031 |
topic |
RBI00031 BIOMATERIALES BIOMATERIALS TECNOLOGÍAS PARA LA SALUD TECHNOLOGY IN HEALTH BONE AND BONES - GROWTH & DEVELOPMENT HUESOS - CRECIMIENTO & DESARROLLO CELL DIFFERENTIATION MESENCHYMAL STEM CELLS MINERALIZATION OSTEOGENIC MARKERS TISSUE ENGINEERING DIFERENCIACIÓN CELULAR CÉLULAS MADRE MESENQUIMATOSAS MINERALIZACIÓN MARCADORES OSTEOGÉNICOS INGENIERÍA DE TEJIDOS |
dc.subject.arcmarc.spa.fl_str_mv |
BIOMATERIALES BIOMATERIALS |
dc.subject.eia.spa.fl_str_mv |
TECNOLOGÍAS PARA LA SALUD TECHNOLOGY IN HEALTH |
dc.subject.eurovoc.spa.fl_str_mv |
BONE AND BONES - GROWTH & DEVELOPMENT HUESOS - CRECIMIENTO & DESARROLLO |
dc.subject.keywords.spa.fl_str_mv |
CELL DIFFERENTIATION MESENCHYMAL STEM CELLS MINERALIZATION OSTEOGENIC MARKERS TISSUE ENGINEERING DIFERENCIACIÓN CELULAR CÉLULAS MADRE MESENQUIMATOSAS MINERALIZACIÓN MARCADORES OSTEOGÉNICOS INGENIERÍA DE TEJIDOS |
description |
Las células madre mesenquimatosas de médula ósea humana (abreviadas hBMSCs) constituyen una fuente de células auto-renovables con alto potencial de diferenciación, comúnmente aisladas a partir de los aspirados medulares en huesos largos. Su diferenciación hacia el linaje osteogénico, por ejemplo, ha sido ampliamente utilizada para la evaluación biológica de biomateriales o matrices con aplicaciones en la ingeniería de tejidos óseos. El objetivo de este trabajo consistió en aislar hBMSCs a partir de la cabeza femoral de pacientes sometidos a artroplastia total de cadera, así como evaluar su potencial osteogénico. Brevemente, se extrajo el hueso esponjoso y se disgregó mecánicamente; las células desprendidas se cultivaron y las células no adherentes se eliminaron luego de 4 días. El potencial osteogénico se evaluó en la quinta generación de cultivo, mediante ensayos de diferenciación a 14 y 20 días donde se compararon cultivos con y sin suplementos osteogénicos. La evaluación se realizó mediante tinción con Alizarina Roja y la cuantificación de los niveles de expresión génica de los marcadores osteogénicos colágeno tipo I, osteonectinca y sialoprotiena ósea mediante RT-PCR en tiempo real. Las hBMSCs obtenidas presentaron un fenotipo no-diferenciado estable, así como la capacidad de mineralizar la matriz extracelular y expresar un fenotipo similar al osteoblasto durante la inducción osteogénica. Los tres marcadores evaluados se sobre-expresaron en los cultivos en condiciones osteogénicas, y se encontró que cambios hasta de 2X en sus niveles de expresión son relevantes para el desarrollo del proceso de diferenciación. El modelo de hBMSCS presentado podría ser utilizado para la evaluación in vitro de la osteoinductividad de diferentes biomateriales, moléculas bioactivas o matrices para ingeniería de tejidos. |
publishDate |
2008 |
dc.date.created.spa.fl_str_mv |
2008-06 |
dc.date.submitted.spa.fl_str_mv |
2008-04-07 |
dc.date.accepted.spa.fl_str_mv |
2008-05-12 |
dc.date.accessioned.spa.fl_str_mv |
2014-04-23T16:11:03Z |
dc.date.available.spa.fl_str_mv |
2014-04-23T16:11:03Z |
dc.date.issued.spa.fl_str_mv |
2014-04-23 |
dc.type.spa.fl_str_mv |
Artículo de revista |
dc.type.coar.fl_str_mv |
http://purl.org/coar/resource_type/c_2df8fbb1 |
dc.type.coar.spa.fl_str_mv |
http://purl.org/coar/resource_type/c_6501 |
dc.type.driver.spa.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/article |
dc.type.version.spa.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
dc.type.content.spa.fl_str_mv |
Text |
dc.type.redcol.spa.fl_str_mv |
https://purl.org/redcol/resource_type/ART |
dc.type.coarversion.spa.fl_str_mv |
http://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85 |
format |
http://purl.org/coar/resource_type/c_6501 |
status_str |
publishedVersion |
dc.identifier.issn.spa.fl_str_mv |
ISSN 19099762 |
dc.identifier.uri.spa.fl_str_mv |
https://repository.eia.edu.co/handle/11190/444 |
dc.identifier.bibliographiccitation.spa.fl_str_mv |
García-Quiroz, F., Posada-Estefan, O., Gallego-Pérez, D., Higuita-Castro, N., Sarassa-Velásquez, C., Hansford, D., et al. Isolation of human bone marrow mesenchymal stem cells and evaluation of their osteogenic potential, Revista Ingeniería Biomédica, 2 (3), 48-55 doi: http://repository.eia.edu.co/handle/11190/444 |
identifier_str_mv |
ISSN 19099762 García-Quiroz, F., Posada-Estefan, O., Gallego-Pérez, D., Higuita-Castro, N., Sarassa-Velásquez, C., Hansford, D., et al. Isolation of human bone marrow mesenchymal stem cells and evaluation of their osteogenic potential, Revista Ingeniería Biomédica, 2 (3), 48-55 doi: http://repository.eia.edu.co/handle/11190/444 |
url |
https://repository.eia.edu.co/handle/11190/444 |
dc.language.iso.spa.fl_str_mv |
eng |
language |
eng |
dc.relation.references.spa.fl_str_mv |
Hung S., Chen N., Hsieh S., Li H., Ma H., Lo W. Isolation and characterization of size-sieved stem cells from human bone marrow. Stem Cells, 20, 249-258, 2002. Grayson W.L., Ma T., Bunnell B. Human mesenchymal stem cells tissue development in 3D PET matrices. Biotechnology Progress, 20, 905-912, 2004. Kleiboeker S.B. Quantitative assessment of the effect of uracil-DNA glycosylase on amplicon DNA degradation and RNA amplification in reverse transcription-PCR. Virology Journal, 2:29, 2005. |
dc.rights.spa.fl_str_mv |
Derechos Reservados - Universidad EIA, 2020 |
dc.rights.uri.spa.fl_str_mv |
https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/ |
dc.rights.accessrights.spa.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/openAccess |
dc.rights.creativecommons.spa.fl_str_mv |
Atribución-NoComercial |
dc.rights.coar.spa.fl_str_mv |
http://purl.org/coar/access_right/c_abf2 |
rights_invalid_str_mv |
Derechos Reservados - Universidad EIA, 2020 https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/ Atribución-NoComercial http://purl.org/coar/access_right/c_abf2 |
eu_rights_str_mv |
openAccess |
dc.format.extent.spa.fl_str_mv |
8 p. |
dc.format.mimetype.spa.fl_str_mv |
application/pdf |
dc.publisher.department.spa.fl_str_mv |
Biomédica, Mecatrónica y Mecánica |
dc.publisher.editor.spa.fl_str_mv |
Escuela de Ingeniería de Antioquia EIA Universidad CES |
institution |
Universidad EIA . |
bitstream.url.fl_str_mv |
https://repository.eia.edu.co/bitstreams/c5ec2836-9e15-4c83-8883-eab6ed8855fb/download https://repository.eia.edu.co/bitstreams/8f31b285-25e7-47b7-871f-5bb2b44b6631/download https://repository.eia.edu.co/bitstreams/785eea6e-c34c-4770-b868-64006b5935c9/download https://repository.eia.edu.co/bitstreams/335eb122-de41-4ed5-9752-b54ccbba61cc/download https://repository.eia.edu.co/bitstreams/717e3f88-d194-400e-9772-ac3574d43bc5/download https://repository.eia.edu.co/bitstreams/0b2bf693-5b19-4018-889f-d126939321aa/download https://repository.eia.edu.co/bitstreams/cfa017c5-f6e9-4580-aa3a-42f69af43a39/download |
bitstream.checksum.fl_str_mv |
dbe3670e8bb1b73703256f0eb58696a4 09245f3fd620390a08a2676ec8993d05 66874b0b9366b748c60895d2fb6339f8 4afdbb8c545fd630ea7db775da747b2f 251affa47a4b8eb28fc5a9a9249263a1 cd76e7886171c964e259dcf5e912e299 a381c039eb2fa5ce9f178c47b0952e8b |
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv |
MD5 MD5 MD5 MD5 MD5 MD5 MD5 |
repository.name.fl_str_mv |
Repositorio Institucional Universidad EIA |
repository.mail.fl_str_mv |
bdigital@metabiblioteca.com |
_version_ |
1814100911103934464 |
spelling |
García-Quiroz, F. (Felipe)e05020b21ff871eef7f5d52328ebd5ac-1Posada-Estefan, O. (Olga)d48aeb6aed7a7ae41f19287f78bec3e9-1Gallego Pérez, D. (Daniel)faaf12773dcbeef65e8d538edd3be03d-1Higuita-Castro, N. (Natalia)fee5bae80d7f9c31d39a5953912bab89-1Sarassa-Velásquez, C. (Carlos)4c9ceb86854a40a8549468efdeee3d55-1Hansford, D. (Derek)7f7d2b6b4b510f03f8fef11d519c87d0-1Agudelo-Florez, P. (Piedad)4aef8e6ef7d70b100dc21a669b3597de-1López-Rojas, L. E. (Luis Ernesto)8ed658098f2deaf6a3d803df11cb6595-1bmfegar@eia.edu.co2014-04-23T16:11:03Z2014-04-23T16:11:03Z2008-062014-04-232008-04-072008-05-12ISSN 19099762https://repository.eia.edu.co/handle/11190/444García-Quiroz, F., Posada-Estefan, O., Gallego-Pérez, D., Higuita-Castro, N., Sarassa-Velásquez, C., Hansford, D., et al. Isolation of human bone marrow mesenchymal stem cells and evaluation of their osteogenic potential, Revista Ingeniería Biomédica, 2 (3), 48-55 doi: http://repository.eia.edu.co/handle/11190/444Las células madre mesenquimatosas de médula ósea humana (abreviadas hBMSCs) constituyen una fuente de células auto-renovables con alto potencial de diferenciación, comúnmente aisladas a partir de los aspirados medulares en huesos largos. Su diferenciación hacia el linaje osteogénico, por ejemplo, ha sido ampliamente utilizada para la evaluación biológica de biomateriales o matrices con aplicaciones en la ingeniería de tejidos óseos. El objetivo de este trabajo consistió en aislar hBMSCs a partir de la cabeza femoral de pacientes sometidos a artroplastia total de cadera, así como evaluar su potencial osteogénico. Brevemente, se extrajo el hueso esponjoso y se disgregó mecánicamente; las células desprendidas se cultivaron y las células no adherentes se eliminaron luego de 4 días. El potencial osteogénico se evaluó en la quinta generación de cultivo, mediante ensayos de diferenciación a 14 y 20 días donde se compararon cultivos con y sin suplementos osteogénicos. La evaluación se realizó mediante tinción con Alizarina Roja y la cuantificación de los niveles de expresión génica de los marcadores osteogénicos colágeno tipo I, osteonectinca y sialoprotiena ósea mediante RT-PCR en tiempo real. Las hBMSCs obtenidas presentaron un fenotipo no-diferenciado estable, así como la capacidad de mineralizar la matriz extracelular y expresar un fenotipo similar al osteoblasto durante la inducción osteogénica. Los tres marcadores evaluados se sobre-expresaron en los cultivos en condiciones osteogénicas, y se encontró que cambios hasta de 2X en sus niveles de expresión son relevantes para el desarrollo del proceso de diferenciación. El modelo de hBMSCS presentado podría ser utilizado para la evaluación in vitro de la osteoinductividad de diferentes biomateriales, moléculas bioactivas o matrices para ingeniería de tejidos.Human bone marrow mesenchymal stem cells (hBMSCs) comprise a cell population capable of self-renewal and multilineage differentiation commonly isolated from bone marrow aspirates of large bones. Their osteogenic potential has been extensively exploited for the biological evaluation of scaffolds or biomaterials with applications in bone tissue engineering. This work aimed to isolate hBMSCs from femoral heads of patients undergoing total hip arthroplasty and to evaluate their osteogenic potential. Briefly, the trabecular bone was extracted and mechanically disaggregated; the released cells were cultured and non-adherent cells were removed after 4 days. The osteogenic potential was evaluated at the fifth passage after 14 and 20 days of induction, comparing cultures with and without osteogenic supplements, via Alizarin red staining and the quantification of the gene expression levels of the osteogenic markers collagen type I, osteonectin and bone sialoprotein through real-time RT-PCR. The obtained hBMSCs presented a stable undifferentiated phenotype after prolonged cell culture, matrix mineralization capabilities and expression of osteoblast phenotype upon osteogenic induction. The three markers were up-regulated in cultures under osteogenic conditions and 2 fold differences in their expression levels were found to be significant for the onset of the differentiation process. The obtained hBMSCs may have applications on the in vitro evaluation of the osteoinductivity of different biomaterials, bioactive molecules or tissue engineering scaffolds.8 p.application/pdfengDerechos Reservados - Universidad EIA, 2020https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/El autor de la obra, actuando en nombre propio, hace entrega del ejemplar respectivo y de sus anexos en formato digital o electrónico y autoriza a la ESCUELA DE INGENIERIA DE ANTIOQUIA, para que en los términos establecidos en la Ley 23 de 1982, Ley 44 de 1993, Decisión andina 351 de 1993, Decreto 460 de 1995, y demás normas generales sobre la materia, utilice y use por cualquier medio conocido o por conocer, los derechos patrimoniales de reproducción, comunicación pública, transformación y distribución de la obra objeto del presente documento. PARÁGRAFO: La presente autorización se hace extensiva no sólo a las dependencias y derechos de uso sobre la obra en formato o soporte material, sino también para formato virtual, electrónico, digital, y en red, internet, extranet, intranet, etc., y en general en cualquier formato conocido o por conocer. EL AUTOR, manifiesta que la obra objeto de la presente autorización es original y la realiza sin violar o usurpar derechos de autor de terceros, por lo tanto la obra es de exclusiva autoría y tiene la titularidad sobre la misma. PARÁGRAFO: En caso de presentarse cualquier reclamación o acción por parte de un tercero en cuanto a los derechos de autor sobre la obra en cuestión, EL AUTOR, asumirá toda la responsabilidad, y saldrá en defensa de los derechos aquí autorizados; para todos los efectos la ESCUELA DE INGENIERÍA DE ANTIOQUIA actúa como un tercero de buena fe.info:eu-repo/semantics/openAccessAtribución-NoComercialhttp://purl.org/coar/access_right/c_abf2RBI00031BIOMATERIALESBIOMATERIALSTECNOLOGÍAS PARA LA SALUDTECHNOLOGY IN HEALTHBONE AND BONES - GROWTH & DEVELOPMENTHUESOS - CRECIMIENTO & DESARROLLOCELL DIFFERENTIATIONMESENCHYMAL STEM CELLSMINERALIZATIONOSTEOGENIC MARKERSTISSUE ENGINEERINGDIFERENCIACIÓN CELULARCÉLULAS MADRE MESENQUIMATOSASMINERALIZACIÓNMARCADORES OSTEOGÉNICOSINGENIERÍA DE TEJIDOSIsolation of human bone marrow mesenchymal stem cells and evaluation of their osteogenic potentialArtículo de revistahttp://purl.org/coar/resource_type/c_6501http://purl.org/coar/resource_type/c_2df8fbb1info:eu-repo/semantics/articleinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionTexthttps://purl.org/redcol/resource_type/ARThttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85Biomédica, Mecatrónica y MecánicaEscuela de Ingeniería de Antioquia EIAUniversidad CESHung S., Chen N., Hsieh S., Li H., Ma H., Lo W. Isolation and characterization of size-sieved stem cells from human bone marrow. Stem Cells, 20, 249-258, 2002.Grayson W.L., Ma T., Bunnell B. Human mesenchymal stem cells tissue development in 3D PET matrices. Biotechnology Progress, 20, 905-912, 2004.Kleiboeker S.B. Quantitative assessment of the effect of uracil-DNA glycosylase on amplicon DNA degradation and RNA amplification in reverse transcription-PCR. Virology Journal, 2:29, 2005.PublicationTHUMBNAILRBI00031.pdf.jpgRBI00031.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg14328https://repository.eia.edu.co/bitstreams/c5ec2836-9e15-4c83-8883-eab6ed8855fb/downloaddbe3670e8bb1b73703256f0eb58696a4MD57ORIGINALRBI00031.pdfRBI00031.pdfapplication/pdf3629094https://repository.eia.edu.co/bitstreams/8f31b285-25e7-47b7-871f-5bb2b44b6631/download09245f3fd620390a08a2676ec8993d05MD51LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-81494https://repository.eia.edu.co/bitstreams/785eea6e-c34c-4770-b868-64006b5935c9/download66874b0b9366b748c60895d2fb6339f8MD52CC-LICENSElicense_urllicense_urltext/plain; charset=utf-849https://repository.eia.edu.co/bitstreams/335eb122-de41-4ed5-9752-b54ccbba61cc/download4afdbb8c545fd630ea7db775da747b2fMD53license_textlicense_texttext/html; charset=utf-821251https://repository.eia.edu.co/bitstreams/717e3f88-d194-400e-9772-ac3574d43bc5/download251affa47a4b8eb28fc5a9a9249263a1MD54license_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; charset=utf-823253https://repository.eia.edu.co/bitstreams/0b2bf693-5b19-4018-889f-d126939321aa/downloadcd76e7886171c964e259dcf5e912e299MD55TEXTRBI00031.pdf.txtRBI00031.pdf.txtExtracted texttext/plain34488https://repository.eia.edu.co/bitstreams/cfa017c5-f6e9-4580-aa3a-42f69af43a39/downloada381c039eb2fa5ce9f178c47b0952e8bMD5611190/444oai:repository.eia.edu.co:11190/4442023-07-25 17:15:27.317https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/Derechos Reservados - Universidad EIA, 2020open.accesshttps://repository.eia.edu.coRepositorio Institucional Universidad EIAbdigital@metabiblioteca.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 |