Factores bioquímicos del semen y fertilidad in vitro de toros nativos e introducidos en el trópico colombiano

1 documento

Autores:
Abadia Serna, Beatriz
Tipo de recurso:
Investigation report
Fecha de publicación:
2008
Institución:
Minciencias
Repositorio:
Repositorio Minciencias
Idioma:
spa
OAI Identifier:
oai:repositorio.minciencias.gov.co:20.500.14143/50201
Acceso en línea:
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Palabra clave:
Proyectos de investigación
Toros -- Investigaciones
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spelling Abadia Serna, Beatriz2024-01-09T13:52:23Z2024-01-09T13:52:23Z2008-05-06https://repositorio.minciencias.gov.co/handle/20.500.14143/502011 documentoIncrementar los índices reproductivos del hato bovino, ha sido por años la preocupación del productor y el motivo de los trabajos de investigación en el ámbito internacional y nacional. La fertilidad del toro incide directamente en los índices reproductivos del hato. La investigación al respecto ha evidenciado por ejemplo, que los valores de los parámetros de calidad seminal (volumen del eyaculado, concentración, viabilidad, motilidad y morfología espermática), con los que comúnmente se infiere sobre la fertilidad del reproductor, no siempre se relacionan con la fertilidad in vivo del animal. Nuestro grupo de trabajo estandarizó e implementó en años recientes, las técnicas in vitro de penetración espermática de oocitos bovinos y de inducción de la reacción acrosómica del espermatozoide con el fin de evaluar la habilidad fecundante de espermatozoides de toros de las razas criollas colombianas (Sanmartinero, Romosinuano, ·Blanco Orejinegro y Costeño con Cuernos) y las razas foráneas Cebú y Holstein. Estas investigaciones evidenciaron que los porcentajes de oocitos penetrados (in Vitro), por espermatozoides de toros criollos, y el incremento en el porcentaje de espermatozoides con acrosoma reaccionado, eran superiores a los presentados por espermatozoides de las razas foráneas.RESUMEN INTRODUCCIÓN OBJETIVOS General Específicos MATERIALES YMETODOS CONTENIDO 4.1 Unidades Experimentales y toma de muestras 4.2 Fases de la Investigación 4.2.1 Primera fase 4.2.1 .1 4.2.1.2 4.2.1.3 4.2.1.4 Método de colección de las muestras seminales Método de obtención del plasma seminal Método de Swim - up 1 Dextrano Metodologías para la determinación de factores bioquímicos del plasma seminal y membrana plasmática del espermatozoide. A. Cuantificación de fructosa en plasma seminal, reacción de Seliwanoff. B. Cuantificación de ácido cítrico en plasma seminal. Reacción de Furth Hermann. C. Cuantificación de proteínas totales en plasma seminal. Reacción de Folin Lowry ... D. Cuantificación de proteínas totales en plasma seminal. Método de Bradford ... E. Determinación de la actividad enzimática de la aspartato aminotransferasa. Técnica de Reitman Frankel. F. Determinación de fosfolípidos de membrana en espermatozoides. 4.2.1 .5 Métodos para obtener y precipitar proteínas de membrana. Extracción proteínas de membrana con SOS. Precipitación de proteínas de membrana (Acido tricloroacético- acetona). 4.2.1.6 Solubilización de las muestras de proteína. Solubilización de las proteínas del plasma seminal (Preparación para la electroforesis bidimensional). Solubilización de las proteínas de membrana del espermatozoide (Preparación para la electroforesis bidimensional. 4.2.1 .7 Métodos de separación de proteínas en geles de poliacrilamida en condiciones desnaturalizantes. Electroforesis desnaturalizante (SDS-PAGE) Preparación de la muestra Electroforesis Análisis de los geles Electroforesis desnaturalizante en dos dimensiones. 20-PAGE (Bidimensional) A. Primera dimensión (lsoelectroenfoque). lsoelectroenfoque (IEF) B. Equilibrio de las Tiras (IPGs) C. Segunda dimensión (Eiectroforesis en SDS-Poliacrilamida) o SDS-PAGE. Elaboración de los geles de poliacrilamida - Electroforesis en SDS-poliacrilamida (SDS-PAGE) D. Métodos de tinción del gel Tinción con Sypro Ruby 1 1 1 :1 1 1 1 1 1 1 !l 11 1 :1 1 1 1 1 1 ¡• ~-- - Tinción con azul de Coomassie E. · Captación y análisis de la imagen del gel 4.2.2 Segunda fase (Resultados de la investigación) 4.2.2.1 Concentraciones de fructosa en plasma seminal de toros de las razas criollas. 4.2.2.2 Concentraciones de ácido cítrico en plasma seminal de toros de las razas criollas. 4.2.2.3 Concentración de proteína total en plasma seminal de toros de las razas criollas. 4.2.2.4 Relación entre las concentraciones de fructosa, ácido cítrico y proteína total en plasma seminal de toros de las razas criollas. 4.2.2.5 Efecto de las épocas climáticas en las concentraciones de fructosa, ácido cítrico y proteína. - Efectos en la concentración de fructosa. - Efectos en la concentración de ácido cítrico - Efectos en la concentración de proteínas. 4.2.2.6 Actividad enzimática intracelular y extracelular de la Aspartato Aminotransferasa (AST). Relación entre valores de actividad enzimática y parámetros de calidad seminal. - Actividad General lntra y Extracelular. - Actividad enzimática intra y extracelular de la AST en toros de razas criollas. - Relación entre cali<;lad seminal y la actividad de la AST en toros de razas criollas. 4.2.2. 7 Concentraciones de fosfolípidos en la membrana (fosfatidilcolina y fosfatidilinositol) de espermatozoides de las razas Blanco Orejinegro y Cebú Fosfatidilinositol. · Fosfatidilcolina 4.2.3 Tercera fase. Cuantificación por electroforesis de las proteínas del plasma seminal y de la membrana del espermatozoide. 4.2.3.1 Separación de proteínas del plasma seminal por electroforesis SOS-PAGE - Proteínas del plasma seminal de la raza Sanmartinero. Efecto de la época en la concentración de las bandas de proteína. Proteínas del plasma seminal de la raza Cebú. Comparación entre el patrón electroforético de las proteínas del plasma seminal de Toros Sanmartinero y toros Cebú en la época de lluvia. Proteínas del plasma seminal de la raza Romosinuano. Efecto de la época en la concentración de las bandas de proteína Proteínas del plasma seminal de la raza Blanco Orejinegro. 4.2.3.2 Separación de proteínas de la membrana del espermatozoide por electroforesis SOS-PAGE - Proteínas de la membrana del espermatozoide de la raza Sanmartinero. 4.2.3.3 Separación de proteínas del Plasma seminal por electroforesis 20 SOS-PAGE - Proteínas del plasma seminal de la raza Sanmartinero Mapa referenciai20-PAGE de proteínas de plasma seminal. Cambios en el perfil electroforético de las proteínas en función del periodo climático. -Proteínas del plasma seminal de la raza Cebú Mapa referencial 20-PAGE de proteínas de plasma seminal. Estudio comparativo de los perfiles electroforéticos de las proteínas del plasma seminal de las razas Sanmartinero y51 p.application/pdfspaCorpoicaColcienciasMosquera (Cundinamarca)https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/info:eu-repo/semantics/openAccessAtribución 4.0 Internacional (CC BY 4.0)http://purl.org/coar/access_right/c_abf2Factores bioquímicos del semen y fertilidad in vitro de toros nativos e introducidos en el trópico colombianoInforme de investigaciónhttp://purl.org/coar/resource_type/c_18wshttp://purl.org/coar/resource_type/c_18ghhttp://purl.org/coar/resource_type/c_93fcTextinfo:eu-repo/semantics/reporthttp://purl.org/redcol/resource_type/INFinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionhttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85Proyectos de investigaciónToros -- InvestigacionesFertilidadReproducciónEstudiantes, Profesores, Comunidad científica colombiana, etc.Alza, L., Jiménez, A. 2000. Evaluación de la fertilidad del semen congelado de la raza Cebú, Blanco Orejinegro y Costeño con Cuernos mediante las pruebas de penetración espermática de oocitos bovinos in vitro y reacción acrosómica in vitro. Bogotá. Universidad Nacional de Colombia . 138 p .Bedoya, D.E. 1999. Inducción de la reacción acrosómica in vitro para la evaluación de la capacidad fertilizante de espermatozoides criopreservados en toros de la razas San Martinéro y Cebú Brahman . Bogotá. Universidad de la Salle. 98 p.Bellin, M.E., Hawkins, H.E., AX, R.L. 1994. Fertility of range beef bulls grouped acGording to presence or absence of heparin-binding proteins insperm membranas and seminal fluid . En: Journal of animal science, vol 72; p 2441-2448Bellin, M. E., J. N. Oyarzo, et al. 1998. "Fertility-associated antigen on bull sperm indicates fertility potential." J Anim Sci 76(8) : 2032-2039.Borque, l. M., Vásquez, G. 1., Simarro, C. M. 1989. Determinación espectrofotométrica de fructosa, ácido cítrico y proteínas totales en eyaculados de pequeños rumiantes . Foro Internacional sobre Reproducción Animal, Departamento de Producción Animal, INIA, Madrid . Pag 17- 23.Cardozo, JA. 2006. Identificación mediante electroforesis bidimensional de proteínas del plasma seminal ovino capaces de proteger de los daños del frío. Tesis doctoral. Universidad de Zaragoza. Pag 177.Cardozo JA, Fernandez-Juan M, Forcada F, Abecia A, Muiño-Bianco T, Cebrián-Pérez JA. 2006 . Monthly variations in ovine seminal plasma proteins analyzed by two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis. Theriogeno/ogy, 66 : 841-850.Cancel, A . M., D. A. Chapman, et al. 1997. "Osteopontin is the 55 kDa fertility- associated protein in Holstein bull seminal plasma." Biol Reprod 57: 1293-1301 .Desnoyers, L., Manjunath, P ., 1992. Major proteins of bovine seminal plasma exhibit novel interactions with phospholipid . J. Biol. 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Bogotá. 150 p. trabajo de grado, Licenciatura en Biología, Universidad Distrital Francisco José de Caldas, Facultad de Ciencias y Educación.Mann T, 1978: Experimental approach to the study of semen and male reproductiva function. lnt J Fertil23, 133-137Miller DJ, Winer MA, Ax RL. 1990. Heparin-binding proteins from seminal plasma bind to bovine spermatozoa and modulate capacitation by heparin . Biol Reprod. 42 :899- 915Maura , A. , Chapman, D., Koc, H. and Killian, G. 2007. A comprehensive proteomic analysis of the accessory sex gland fluid from mature Holstein bulls. Animal Reproduction Science. 98: 169-188.OFarrell, P. H. 1975 . "High resolution two-dimensional electrophoresis of proteins." J Biol Chem 250(10): 4007-21.Russell, L. D. , R. N. Peterson, et al. 1984a. "Posttesticular Surface Modifications and Contributions of Reproductive Tract Fluids to the Surface Polypeptide Composition of Boar Spermatozoa." Biol. Reprod . 30 : 959-978.Shivaji, S., K. Scheit, et al. 1990. 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Los documentos mencionados se anexan en otro archivo para mejora manejo de la información.7106071495171060714951Departamento Administrativo de Ciencia, Tecnología e Innovación [CO] ColcienciasPublicationORIGINAL7106-07-14951.pdf7106-07-14951.pdfapplication/pdf46200999https://repositorio.minciencias.gov.co/bitstreams/505f5c2f-dc6b-451e-a27d-8e632347b7c9/download0e3655fb7b14fb5540ef7105c3763a2fMD51LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-815543https://repositorio.minciencias.gov.co/bitstreams/be685716-8a7f-4080-8f26-82dad1fea01d/download73a5432e0b76442b22b026844140d683MD5220.500.14143/50201oai:repositorio.minciencias.gov.co:20.500.14143/502012024-01-09 13:52:25.622https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/restrictedhttps://repositorio.minciencias.gov.coRepositorio Institucional de Mincienciascendoc@minciencias.gov.co

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