Producción y purificación de anticuerpos IgY policlonales anti-péptidos alergénicos del grupo 1 de Ácaros Intradomiciliarios inducidos por secuencias peptídicas sintéticas. (2010)
Los anticuerpos son un instrumento valioso en investigación, con una amplia aplicación como reactivo diagnóstico y como herramienta terapéutica para el tratamiento de diversas enfermedades. Los anticuerpos actualmente disponibles para investigación, diagnóstico y terapias son anticuerpos que comúnmente se producen en mamíferos. La utilización de estos animales presentan dificultades como la obtención de cantidades reducidas de suero, dificultad de hospedaje por su talla, alto costo de dieta y difícil manipulación. Una alternativa actual es la producción de anticuerpos policlonales obtenidos en yema de huevo de gallina (IgY). (Schade R, et al. 1997) Esta tecnología se ha empleado ampliamente en inmunología, bioquímica, biotecnología, salud humana y animal. En Alergología Experimental se ha demostrado que los anticuerpos IgY son capaces de identificar y cuantificar alérgenos de nuez de Brasil, maní, péptidos alergénicos nativos de Fel d 1 y Amb a 1 recombinante. ( Blais B, et al. 2000.) Los alérgenos de los ácaros de polvo intradomiciliario han sido clasificados en grupos. El grupo I (Der p 1, Der f 1 y Blo t 1), son cistein-proteasas que actúan como enzimas digestivas del ácaro. Estos alérgenos están involucrados como agentes desencadenantes de eventos inflamatorios en la fisiopatología de las enfermedades alérgicas. La evidencia epidemiológica muestra que la exposición a alérgenos de ácaros intradomiciliarios contribuye al desarrollo del asma bronquial. El asma bronquial es un problema de salud pública que tiene una alta prevalencia a nivel mundial, con una carga de enfermedad significativa en el grupo de Enfermedades Respiratorias Crónicas. En Colombia, un estudio reciente mostró una prevalencia acumulada del 10.4% para el asma y del 22.6% para la rinitis alérgica. Hoy en día se acepta que el 85% de los pacientes asmáticos alérgicos están sensibilizados a los antígenos de los ácaros. (Dennis R, et al. 2004) El presente proyecto de investigación tiene como propósito producir y purificar anticuerpos policlonales IgY anti-alérgenos del grupo I de ácaros intradomiciliarios, inducidos con un péptido sintético de secuencia no conservada en alérgenos del grupo I, con el fin de ser empleados en el futuro desarrollo de un estuche diagnóstico y como herramienta de Innovación y Desarrollo en el campo de la inmuno-alergología. Para el desarrollo de este proyecto se utilizarán gallinas Hi Line Brown, las cuales serán inmunizadas con un péptido sintético, para el desarrollo de este péptido se estudiaran y analizaran las secuencias proteicas originales de los tres alérgenos que serán tomadas del National Center for Biotechnology Information (NCBI). El péptido obtenido será incorporado a adyuvante completo de Freund en la primera inmunización y ha adyuvante incompleto de Freund para los refuerzos. Como controles se inmunizarán gallinas a las cuales se inyectaran con adyuvante correspondiente sin el péptido sintético. Este será sintetizado con el apoyo de la Fundación Instituto de Inmunología de Colombia. Los anticuerpos serán extraídos de la yema del huevo por cloroformo y se purificaran por cromatografía tiofílica. Se desarrollaran pruebas ELISA para medir el titulo de anticuerpos, y se determinara su especificidad por ELISA e Immunobloting.