Evaluación de genes candidatos a biomarcadores de metástasis del cáncer de próstata. (2012)
El gran impacto que tiene el cáncer de próstata en la población se debe en parte a la falta de métodos satisfactorios para su diagnóstico y pronóstico temprano, trayendo como consecuencia un manejo clínico tardío de la enfermedad. Por ello es prioritario que se desarrollen nuevos y mejores marcadores moleculares que permitan un diagnóstico oportuno, una adecuada predicción del comportamiento clínico, y/o un mejor tratamiento, lo cual justifica las investigaciones en este campo. El desarrollo exitoso de biomarcadores para una determinada enfermedad es un largo proceso, que inicia con la identificación de genes candidatos a los cuales se les define su utilidad potencial en estudios funcionales en los que se determina su rol biológico en la enfermedad, para luego validarlos en ensayos clínicos en los que se confirma su verdadera utilidad en el manejo de la enfermedad. Siguiendo este orden de ideas, nuestro grupo de investigación recientemente identificó en un modelo animal un conjunto de 107 genes (48 sobre-expresados y 59 sub-expresados) asociados al fenotipo metastásico del cáncer de próstata, datos que han sido publicados [1] . Como siguiente paso lógico en la búsqueda de biomarcadores, en este segundo estudio proponemos evaluar, en líneas celulares y muestras clínicas humanas, 20 de estos genes los cuales hemos seleccionado basándonos en una detallada revisión bibliográfica, con la cual determinamos que ellos en particular han sido asociados con anterioridad a procesos relacionados con metástasis en general, tales como adhesión celular, motilidad, degradación de la matriz extracelular, etc, pero no han sido reportados en el cáncer de próstata metastásico humano, por lo cual representan nuevos candidatos a biomarcadores de metástasis de este cáncer. Estos genes son: Endocan, Serpine2, Tetraspanin 8, Kelch repeat-1 (krp1), Sialophorin (CD43), Antígeno CD24, Fibromodulin, Thrombin-receptor-like 1, Preproenkephalin, Thymosin beta-4, Synuclein gamma, Caveolin 1, Cxxc5, HNF-3/forkhead homolog-1, Alpha-2-macroglobulin, Podoplanin, Clusterin, antígeno CD81, Biglycan, y Decorin. Para comprobar nuestra hipótesis que estos genes están de hecho asociados a metástasis del CaP humano, proponemos el presente proyecto, el cual involucra tres etapas fundamentales: en la primera, validaremos la expresión a nivel de mRNA y de proteína de cada uno de estos genes mediante PCR cuantitativo en tiempo real (qRT-PCR) y Western blot, respectivamente, en líneas celulares humanas de cáncer de próstata metastático, usando como control líneas celulares no metastáticas. En la segunda etapa, para cada gen validado (al que se le confirme una expresión diferencial) en las diferentes líneas celulares, confirmaremos si se expresa diferencialmente a nivel de mRNA y proteína en muestras clínicas humanas caracterizadas de cáncer de próstata y de tejido no canceroso. En la tercera etapa, para cada gen validado y confirmado en las etapas uno y dos, se le evaluará su rol biológico en el fenotipo metastático mediante el bloqueo de su expresión en las líneas celulares usando siRNA (RNA de interferencia pequeños) y la posterior realización de ensayos de invasión, de adhesión, y de proliferación in vitro de dichas células. Consideramos que los resultados que se obtengan a través de la metodología propuesta, nos ayudarán a identificar aquellos genes con potencial para ser usados subsecuentemente en ensayos clínicos retrospectivos/prospectivos como biomarcadores de metástasis del cáncer de próstata, a fin de evaluar su verdadera utilidad ya sea en el diagnóstico, pronóstico, o respuesta al tratamiento de la enfermedad, o incluso, como blancos terapéuticos.