Purificación y caracterización de lipopolisacáridos de Eikenella corrodens 23834 y Porphyromonas gingivalis W83

La purificación de lipopolisacáridos (LPS) o endotoxinas y su caracterización es un aspecto esencial para estudios que buscan aclarar el papel de estas biomoléculas de bacterias Gram negativas presentes en la cavidad oral y su relación con enfermedades locales periodontales y sistémicas. Este estudi...

Full description

Autores:
Tipo de recurso:
Fecha de publicación:
2015
Institución:
Ministerio de Ciencia, Tecnología e Innovación
Repositorio:
Repositorio Minciencias
Idioma:
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OAI Identifier:
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Acceso en línea:
https://repositorio.minciencias.gov.co/handle/20.500.14143/22041
Palabra clave:
Cavidades periodontales
Encías -- Enfermedades
Enfermedades periodontales -- Prevención
Dientes -- Cuidado -- Higiene
Endotoxin
Keto
Chromatography
Limulus test (LAL)
Periodontitis
Deoxyoctonate (KDO)
Enfermedades de la boca
Bacteriología
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description La purificación de lipopolisacáridos (LPS) o endotoxinas y su caracterización es un aspecto esencial para estudios que buscan aclarar el papel de estas biomoléculas de bacterias Gram negativas presentes en la cavidad oral y su relación con enfermedades locales periodontales y sistémicas. Este estudio implementa una metodología para la extracción, purificación y caracterización de LPS a partir de bacteria completa de Eikenella corrodens 23834 y Porphyromonas gingivalis W83, utilizando técnicas previamente descritas. La extracción cruda de LPS se realizó con fenol-agua caliente; la purificación se realizó con tratamiento enzimático con nucleasas y proteasa, seguido de cromatografía de exclusión por tamaño (Sephacryl S-200 HR) con deoxicolato de sodio como fase móvil. La caracterización de los extractos purificados se realizó por barrido espectrofotométrico, pruebas bioquímicas de electroforesis SDS-PAGE, ensayo Purpald y la prueba cromogénica de LAL. Como control para la identificación y caracterización de los extractos purificados se utilizaron LPS comerciales de Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Rodobacter sphaeroides y Porphyromonas gingivalis. La metodología implementada permitió la obtención de LPS de elevada pureza con la identificación de KDO o heptosas, un quimiotipo de LPS-S (liso) para E. corrodens y LPS-SR (semi-rugoso) para P. gingivalis W83. Ambos LPS purificados mostraron capacidad endotóxica a bajas concentraciones. La metodología implementada en este estudio para la purificación y caracterización de LPS a partir de bacteria completa fue eficiente al compararla con los LPS comerciales.
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dc.relation.ispartof.none.fl_str_mv Inducción de disfunción endotelial in vitro por lipopolisacarido de bacterias periodontopaticas e inhibición de la inflamación por resolvina (rvd1) y estatina (rosuvastatina). La publicación completa está disponible en : <a href="http://repositorio.colciencias.gov.co:80/handle/11146/22037" target="blank">http://repositorio.colciencias.gov.co:80/handle/11146/22037</a>
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La caracterización de los extractos purificados se realizó por barrido espectrofotométrico, pruebas bioquímicas de electroforesis SDS-PAGE, ensayo Purpald y la prueba cromogénica de LAL. Como control para la identificación y caracterización de los extractos purificados se utilizaron LPS comerciales de Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Rodobacter sphaeroides y Porphyromonas gingivalis. La metodología implementada permitió la obtención de LPS de elevada pureza con la identificación de KDO o heptosas, un quimiotipo de LPS-S (liso) para E. corrodens y LPS-SR (semi-rugoso) para P. gingivalis W83. Ambos LPS purificados mostraron capacidad endotóxica a bajas concentraciones. La metodología implementada en este estudio para la purificación y caracterización de LPS a partir de bacteria completa fue eficiente al compararla con los LPS comerciales.Purification of lipopolysaccharide (LPS) or endotoxins and its characterization is an important aspect for studies aimed at clarify the role of these biomolecules from Gram negative bacteria present in the oral cavity and its relationship with periodontal and systemic diseases. This study describes an extraction, purification and characterization method of LPS from Eikenella corrodens 23834 and Porphyromonas gingivalis W83. LPS extraction was performed by using hot phenol-water; the purification was done with nuclease and protease enzymatic treatment, followed by size-exclusion chromatography (Sephacryl S-200 HR) with sodium deoxycholate as mobile phase. The characterization of the purified extracts was performed by spectrophotometric scanning, SDS-PAGE biochemical tests, Purpald assay and chromogenic LAL test. As control, commercial LPS from Escherichia coli, Salmonella typhimurium, P. gingivalis, and Rodobacter sphaeroides were used. The methodology mentioned above had allowed obtaining high purity LPS by identifying KDO or heptoses, a chemotype S-LPS (smooth) to E. corrodens; SR-LPS (semi-rough) for P. gingivalis W83. Both purified LPS showed endotoxic capacity at low valoraconcentrations. The methodology used in this study for purification and characterization of LPS from the whole bacteria was efficient when it was compared with commercial LPS.Departamento Administrativo de Ciencia, Tecnología e Innovación [CO] Colciencias1308-519-28960Inducción de disfunción endotelial in vitro por lipopolisacarido de bacterias periodontopaticas e inhibición de la inflamación por resolvina (rvd1) y estatina (rosuvastatina)nopdf11 páginasspaInducción de disfunción endotelial in vitro por lipopolisacarido de bacterias periodontopaticas e inhibición de la inflamación por resolvina (rvd1) y estatina (rosuvastatina). La publicación completa está disponible en : <a href="http://repositorio.colciencias.gov.co:80/handle/11146/22037" target="blank">http://repositorio.colciencias.gov.co:80/handle/11146/22037</a>Revista Colombiana de Biotecnología. Vol. XVI No. 1 Julio 2014 34-44Contiene 47 referencias bibliográficas. Véase el documento adjuntoPurificación y caracterización de lipopolisacáridos de Eikenella corrodens 23834 y Porphyromonas gingivalis W83Purification and characterization of lipopolysaccharide from Eikenella corrodens 23834 and Porphyromonas gingivalis W83Artículo científicoinfo:eu-repo/semantics/articlehttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85http://purl.org/coar/resource_type/c_2df8fbb1ProfesoresInvestigadoresCavidades periodontalesEncías -- EnfermedadesEnfermedades periodontales -- PrevenciónDientes -- Cuidado -- HigieneEndotoxinKetoChromatographyLimulus test (LAL)PeriodontitisDeoxyoctonate (KDO)Enfermedades de la bocaBacteriologíahttp://purl.org/coar/access_right/c_f1cfGualtero Escobar, Diego FernandoPorras Gaviria, Jeimy PaolaBernau Gutiérrez, SebastiánBuitrago Ramírez, Diana MarcelaCastillo Perdomo, Diana MarcelaLafaurie Villamil, Gloria InésUniversidad de Kentucky, UKUniversidad El BosqueUniversidad Nacional de Colombia, UNALinstitutouibo@gmail.com2015-04Programa nacional de ciencias y tecnologías de la saludComunidad de odontólogos colombianos0261-2010Artículos de investigaciónPublicationORIGINALGualtero articulo purificación LPS E. c y P.g.pdfGualtero articulo purificación LPS E. c y P.g.pdfArticulo asociado al proyectoapplication/pdf1053306https://repositorio.minciencias.gov.co/bitstreams/70906f4e-1385-4810-bf39-65b34bbce1ab/download1cd0767750b1e169552690bad3eed6f0MD51LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-81748https://repositorio.minciencias.gov.co/bitstreams/2fdbed07-5b35-467b-acef-db7454ab91fc/download8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33MD52TEXTGualtero articulo purificación LPS E. c y P.g.pdf.txtGualtero articulo purificación LPS E. c y P.g.pdf.txtExtracted texttext/plain52925https://repositorio.minciencias.gov.co/bitstreams/639983bc-05b5-4ff8-b60f-620ddb0f0a10/downloadf9833ee1a64ce1dced0eb550536449e0MD55THUMBNAILGualtero articulo purificación LPS E. c y P.g.pdf.jpgGualtero articulo purificación LPS E. c y P.g.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg14536https://repositorio.minciencias.gov.co/bitstreams/ef0dd679-9c78-49cc-90ce-fe7d2fef1872/download7700addf7bdf49f7c12ca7ac8ae7ca9aMD5620.500.14143/22041oai:repositorio.minciencias.gov.co:20.500.14143/220412023-11-29 17:46:46.803restrictedhttps://repositorio.minciencias.gov.coRepositorio Institucional de Mincienciascendoc@minciencias.gov.co