Estudio de proteínas asociadas al telómero en el parásito Plasmodium falciparum.

La malaria es una de las enfermedades más importantes en el tercer mundo. Es una amenaza para más de dos millones de humanos que viven en zonas endémicas. Causa entre 1'500.000 y 2'700.000 muertes y entre 300 y 500 millones de nuevos casos por año (WHO, 1997). El control de la enfermedad s...

Full description

Autores:
Wasserman, Moisés
Tipo de recurso:
Investigation report
Fecha de publicación:
2005
Institución:
Ministerio de Ciencia, Tecnología e Innovación
Repositorio:
Repositorio Minciencias
Idioma:
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OAI Identifier:
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Acceso en línea:
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Palabra clave:
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description La malaria es una de las enfermedades más importantes en el tercer mundo. Es una amenaza para más de dos millones de humanos que viven en zonas endémicas. Causa entre 1'500.000 y 2'700.000 muertes y entre 300 y 500 millones de nuevos casos por año (WHO, 1997). El control de la enfermedad se ha visto limitado por múltiples circunstancias biológicas y sociales. Es sorprendente que a pesar de la importancia del problema, durante los últimos años no haya habido sustanciales desarrollos en la generación de alternativas farmacológicas que reemplacen a la batería de antimaláricos en uso desde los años 1950s y 1960s. Las enzimas que facilitan la replicación del DNA y su mantenimiento representan interesantes blancos para el desarrollo de nuevas estrategias quimioterapéuticas. En este proyecto pretendemos estudiar las enzimas y proteínas involucradas en la síntesis y mantenimiento de los telómeros de los cromosomas del parásito. Estas estructuras son esenciales para proteger al cromosoma de daños tales como degradación por exonucleasas, recombinaciones y reconocimiento como DNA dañado por parte de la maquinaria celular de reparación del DNA. Su mantenimiento es fundamental para que el genoma pueda ser preservado luego de varias rondas de replicación (Collins 1999). La mayoría de los eucariotes usan para este efecto una enzima telomerasa, que es una transcriptasa reversa específica, que sintetiza las repeticiones de DNA usando una plantilla endógena de RNA. Es muy poco lo que se sabe de la telomerasa del Plasmodium y nada se conoce sobre otras proteínas asociadas al telómero. El conocimiento de esta enzima y de las proteínas que se asocian para modular la función telomérica producirá luces sobre la replicación y funcionamiento del cromosoma y podrá generar alternativas para la inhibición del proceso y por tanto para el control de la enfermedad.
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Las enzimas que facilitan la replicación del DNA y su mantenimiento representan interesantes blancos para el desarrollo de nuevas estrategias quimioterapéuticas. En este proyecto pretendemos estudiar las enzimas y proteínas involucradas en la síntesis y mantenimiento de los telómeros de los cromosomas del parásito. Estas estructuras son esenciales para proteger al cromosoma de daños tales como degradación por exonucleasas, recombinaciones y reconocimiento como DNA dañado por parte de la maquinaria celular de reparación del DNA. Su mantenimiento es fundamental para que el genoma pueda ser preservado luego de varias rondas de replicación (Collins 1999). La mayoría de los eucariotes usan para este efecto una enzima telomerasa, que es una transcriptasa reversa específica, que sintetiza las repeticiones de DNA usando una plantilla endógena de RNA. Es muy poco lo que se sabe de la telomerasa del Plasmodium y nada se conoce sobre otras proteínas asociadas al telómero. 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Específicos: a) Establecimiento en el laboratorio de algunos métodos fundamentales para el estudio de telómeros y sus proteínas asociadas, como ensayo enzimático de la telomerasa y ensayos de unión Proteína-DNA. b) Obtención de fracciones protéicas enriquecidas con proteínas de unión a secuencias teloméricas. Ensayos de purificación. c) Marcación exogénica de los complejos proteína-DNA purificados para identificación sensible de proteínas de unión al telómero. d) Uso del ensayo de actividad de telomerasa para su cuantificación en diversos estadíos del ciclo celular del parásito. e) Obtención de una proteína recombinante de telomerasa de Plasmodium falciparum y producción de anticuerpos contra la misma. f) Estudio de expresión del gen de la telomerasa, usando un ensayo RT-PCR para detectar el mRNA, los anticuerpos producidos en e) para detectar la proteína y el ensayo establecido en a) para determinar la actividad de la proteína. g) Ensayos de inhibición de la actividad de la telomerasa usando inhibidores químicos y oligonucleótidos antisentido.PublicationORIGINAL1101-05-11422.pdf1101-05-11422.pdfInforme finalapplication/pdf29872640https://repositorio.minciencias.gov.co/bitstreams/0f609368-6bc3-4b4e-9116-6d69dc494c83/download3334e753dcb6a9c564771ee13b3a5beaMD51LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-814800https://repositorio.minciencias.gov.co/bitstreams/b5ecedf0-0b4b-431d-b721-704fee390973/download8ffe28672ea88fddc177fe365a489039MD52license.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-80https://repositorio.minciencias.gov.co/bitstreams/b8f95f12-a2b0-4a88-b71d-39290804b806/downloadd41d8cd98f00b204e9800998ecf8427eMD55TEXT1101-05-11422.pdf.txt1101-05-11422.pdf.txtExtracted texttext/plain174494https://repositorio.minciencias.gov.co/bitstreams/b90df492-47a3-4561-9b76-85d1635546e0/download1c9838f89086fc0bdc767e2edc034b17MD53THUMBNAIL1101-05-11422.pdf.jpg1101-05-11422.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg13978https://repositorio.minciencias.gov.co/bitstreams/4fbc7ad2-494a-43ca-8b80-c4c6b828d4c0/downloadf2f139a45d61b154219dba78be93a8b7MD5420.500.14143/39965oai:repositorio.minciencias.gov.co:20.500.14143/399652023-11-29 17:44:20.994restrictedhttps://repositorio.minciencias.gov.coRepositorio Institucional de Mincienciascendoc@minciencias.gov.co

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