Influencia de un sistema in vitro de nicho leucémico en la regulación de las propiedades de las células Stem Hematopoyéticas.

Las células stem hematopoyéticas (HSC) residen en la médula ósea (MO) en microambientes celulares especializados denominados nichos. Estos regulan la quiescencia, proliferación, autorrenovación y diferenciación de las HSC. Está conformado por diferentes tipos celulares y los factores de crecimiento...

Full description

Autores:
Vernot Hernandez, Jean Paul
Tipo de recurso:
Investigation report
Fecha de publicación:
2016
Institución:
Ministerio de Ciencia, Tecnología e Innovación
Repositorio:
Repositorio Minciencias
Idioma:
spa
OAI Identifier:
oai:repositorio.minciencias.gov.co:20.500.14143/37871
Acceso en línea:
https://colciencias.metadirectorio.org/handle/11146/37871
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Palabra clave:
Células madre (stem) leucémicas
Células madre (stem) hematopoyéticas
Células madre (stem) mesenquimales
Médula osea
Nicho leucémico
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description Las células stem hematopoyéticas (HSC) residen en la médula ósea (MO) en microambientes celulares especializados denominados nichos. Estos regulan la quiescencia, proliferación, autorrenovación y diferenciación de las HSC. Está conformado por diferentes tipos celulares y los factores de crecimiento que secretan, una red vascular conformada por los sinusoides, y por componentes de la matriz extracelular (EMC). En particular, las células stem mesenquimales (MSC) son un componente importante del nicho. Las MSC participan en la retención de las HSC en la MO conservando sus propiedades de autorrenovación y quiescencia (células pluripotentes). Se sabe que esto lo hacen por las interacciones intercelulares y por medio de factores solubles (chemoquinas y citoquinas) que inhiben la proliferación y diferenciación. Por otra parte, se ha sugerido que los mecanismos por los cuales el nicho regula las propiedades de las HSC pueden ser utilizados para su propio crecimiento por células leucémicas. En modelos de co-cultivos de MSC con células leucémicas, se demostró que las MSC protegen a las células stem leucémicas (CSL) de la apoptosis, promueven la supervivencia y el crecimiento tumoral. En este trabajo se quiere establecer un modelo in vitro de nicho leucémico que permita estudiar las relaciones entre éste y las HSC normales, en particular en lo que tiene que ver con su funcionalidad como células stem. También queremos determinar el efecto que tienen las células leucémicas sobre las células mesenquimales. Este trabajo complementa otro estudio del grupo donde evaluamos el efecto de células stem mesenquimales sobre la proliferación y diferenciación de células leucémicas de pacientes (DIB 2010). Para este trabajo, utilizaremos un sistema in vitro de co-cultivo de líneas celulares de células mesenquimales con una línea de leucemia linfoblástica aguda tipo B (LLA-B), disponibles en nuestro laboratorio. Las HSC se aislarán de sangre de cordón umbilical de mujeres embarazadas a término que hayan aceptado participar en el estudio y que hayan firmado el formato de consentimiento informado. Las mediciones de proliferación, diferenciación, adhesión, migración, autorrenovación y pluripotencia, se realizarán por citometría de flujo multiparamétrica, microscopía de contraste de fases y confocal y/o por PCR en tiempo real. Se utilizarán medio condicionados y definidos para determinar el efecto del microambiente, y el efecto de citoquinas se demostrará con la utilización de anticuerpos monoclonales neutralizantes. Se utilizarán pruebas estadísticas adecuadas para cada caso. Esta aproximación se desprende del interés renovado del concepto de nicho, y de su relevancia para la biología de las leucemias y la posibilidad de su manipulación como una nueva estrategia terapéutica.
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Las MSC participan en la retención de las HSC en la MO conservando sus propiedades de autorrenovación y quiescencia (células pluripotentes). Se sabe que esto lo hacen por las interacciones intercelulares y por medio de factores solubles (chemoquinas y citoquinas) que inhiben la proliferación y diferenciación. Por otra parte, se ha sugerido que los mecanismos por los cuales el nicho regula las propiedades de las HSC pueden ser utilizados para su propio crecimiento por células leucémicas. En modelos de co-cultivos de MSC con células leucémicas, se demostró que las MSC protegen a las células stem leucémicas (CSL) de la apoptosis, promueven la supervivencia y el crecimiento tumoral. En este trabajo se quiere establecer un modelo in vitro de nicho leucémico que permita estudiar las relaciones entre éste y las HSC normales, en particular en lo que tiene que ver con su funcionalidad como células stem. También queremos determinar el efecto que tienen las células leucémicas sobre las células mesenquimales. Este trabajo complementa otro estudio del grupo donde evaluamos el efecto de células stem mesenquimales sobre la proliferación y diferenciación de células leucémicas de pacientes (DIB 2010). Para este trabajo, utilizaremos un sistema in vitro de co-cultivo de líneas celulares de células mesenquimales con una línea de leucemia linfoblástica aguda tipo B (LLA-B), disponibles en nuestro laboratorio. Las HSC se aislarán de sangre de cordón umbilical de mujeres embarazadas a término que hayan aceptado participar en el estudio y que hayan firmado el formato de consentimiento informado. Las mediciones de proliferación, diferenciación, adhesión, migración, autorrenovación y pluripotencia, se realizarán por citometría de flujo multiparamétrica, microscopía de contraste de fases y confocal y/o por PCR en tiempo real. 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