Motivos Epiya en la proteína CagA en aislamientos colombianos de Helicobacter pylori provenientes de la ciudad de Bogotá

Helicobacter pylori es una bacteria asociada con el desarrollo de enfermedades gastroduodenales como gastritis crónica, ulceras pépticas, linfoma tipo MALT y cáncer gástrico. El desarrollo de cáncer gástrico asociado con la bacteria, se ha relacionado fuertemente con el factor de virulencia CagA, un...

Full description

Autores:
Tipo de recurso:
masterThesis
Fecha de publicación:
2015
Institución:
Pontificia Universidad Javeriana
Repositorio:
Repositorio Universidad Javeriana
Idioma:
spa
OAI Identifier:
oai:repository.javeriana.edu.co:10554/16676
Acceso en línea:
http://hdl.handle.net/10554/16676
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Palabra clave:
Helicobacter pylori
Proteína CagA
motivo EPIYA
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CagA protein
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Maestría en ciencias biológicas - Tesis y disertaciones académicas
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Rodríguez Gómez, Eliana Rocío
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description Helicobacter pylori es una bacteria asociada con el desarrollo de enfermedades gastroduodenales como gastritis crónica, ulceras pépticas, linfoma tipo MALT y cáncer gástrico. El desarrollo de cáncer gástrico asociado con la bacteria, se ha relacionado fuertemente con el factor de virulencia CagA, una proteína que presenta sitios de fosforilación EPIYA que están relacionados con la capacidad oncogénica de la proteína. El objetivo de este estudio fue determinar los motivos EPIYA presentes en la proteína CagA en aislamientos de Helicobacter pylori. Se analizaron 85 aislamientos de H.pylori cagA positivos y mediante PCR se amplifico la región 3 del gen cagA. Los productos de PCR fueron secuenciados y finalmente analizados con herramientas bioinformáticas. Adicionalmente para confirmar la predicción sobre el número de repeticiones EPIYA basados en el tamaño del producto de PCR se realizó re-amplificación y posterior análisis de secuenciación. Se observó que el tamaño de los productos de PCR osciló entre 400pb - 700pb. 58 de los 85 aislamientos (68,2%) presentaron únicas bandas y 27 aislamientos (31,8%) dos o más bandas. La cepa de referencia NCTC11637 presento única banda de 500pb. Los aislamientos presentaron la siguiente distribución EPIYA: 7/85 AB (8,2%), 34/85 ABC (40%), 26/85 ABCC (30,6%) y 18/85 ABCCC (21,2%), sin embargo en 27 aislamientos existió coinfección con diferentes genotipos de cagA entre los más predominantes: 7 ABC-ABCC (26%) y 6 ABCC-ABCCC (22,2%). Se identificó que todos los aislamientos poseen cagA de origen occidental siendo el motivo EPIYA ABC el más predominante (40%), sin embargo 51,8% de los aislamientos presentaron múltiples repeticiones EPIYA-C: 26/85 ABCC (30,6%) y 18/85 EPIYA-ABCCC (21,2%), indicando que la mitad de población de Bogotá- Colombia infectada con Helicobacter pylori cagA positivo tiene un alto riesgo de desarrollar cáncer gástrico.
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Los productos de PCR fueron secuenciados y finalmente analizados con herramientas bioinformáticas. Adicionalmente para confirmar la predicción sobre el número de repeticiones EPIYA basados en el tamaño del producto de PCR se realizó re-amplificación y posterior análisis de secuenciación. Se observó que el tamaño de los productos de PCR osciló entre 400pb - 700pb. 58 de los 85 aislamientos (68,2%) presentaron únicas bandas y 27 aislamientos (31,8%) dos o más bandas. La cepa de referencia NCTC11637 presento única banda de 500pb. Los aislamientos presentaron la siguiente distribución EPIYA: 7/85 AB (8,2%), 34/85 ABC (40%), 26/85 ABCC (30,6%) y 18/85 ABCCC (21,2%), sin embargo en 27 aislamientos existió coinfección con diferentes genotipos de cagA entre los más predominantes: 7 ABC-ABCC (26%) y 6 ABCC-ABCCC (22,2%). Se identificó que todos los aislamientos poseen cagA de origen occidental siendo el motivo EPIYA ABC el más predominante (40%), sin embargo 51,8% de los aislamientos presentaron múltiples repeticiones EPIYA-C: 26/85 ABCC (30,6%) y 18/85 EPIYA-ABCCC (21,2%), indicando que la mitad de población de Bogotá- Colombia infectada con Helicobacter pylori cagA positivo tiene un alto riesgo de desarrollar cáncer gástrico.Helicobacter pylori is a bacterium associated with the development of gastro duodenal diseases such as chronic gastritis, peptic ulcers, MALT lymphoma and gastric cancer. The development of gastric cancer associated with H.pylori has been strongly related with the virulence factor CagA, protein having EPIYA phosphorylation sites, which are related with the oncogenic capacity of the CagA protein. The objective in this study, was to determine EPIYA motif present in the CagA protein in Helicobacter pylori isolates 85 cagA-positive Helicobacter pylori strains were analyzed and to amplify the 3 'region of cagA gene by PCR. The PCR products obtained were sequenced and finally analyzed with bioinformatic tools, additionally to confirm this prediction about the number of EPIYA repeats, based upon size of the PCR amplicons, we perform re-amplification and subsequent sequencing analysis We observed PCR products ranging in size between 400 bp to 700 bp. 58 of 85 Helicobacter pylori isolates (58, 2%) were observed a single band PCR product and 27 isolates (31, 8%) showed two or more bands. The reference strain NCTC 11637 exhibited to single band with size of 500 bp. The Isolates showed the following distribution EPIYA: 7/85 AB(8,2%), 34/85 ABC(40%), 26/85 ABCC(30,6%) y 18/85 ABCCC (21,2%), however observed coinfection with different cagA genotypes in 27 isolates among the most predominant: 7 ABC-ABCC(26%) y 6 ABCC-ABCCC(22,2%). We identified that all isolates were the Western cagA type being the most predominant EPIYA-ABC motif (40%), however 51, 8 % of isolates shown multiples EPIYA-C repetitions: 26/85 ABCC (30,6%) y 18/85 EPIYA-ABCCC(21,2%) indicating that half of the population of Bogota- Colombia infected with cagA positive Helicobacter pylori have higher risk of cancer gastric..Magíster en Ciencias BiológicasMaestríaPontificia Universidad JaverianaMaestría en Ciencias BiológicasFacultad de CienciasTrespalacios Rangel, Alba Alicia2015-11-16T01:36:45Z2016-01-13T19:38:25Z2020-04-16T19:40:13Z2015-11-16T01:36:45Z2016-01-13T19:38:25Z2020-04-16T19:40:13Z2015http://purl.org/coar/version/c_ab4af688f83e57aaTesis/Trabajo de grado - Monografía - Maestríahttp://purl.org/coar/resource_type/c_bdccinfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionPDFapplication/pdfapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10554/16676https://doi.org/10.11144/Javeriana.10554.16676instname:Pontificia Universidad Javerianareponame:Repositorio Institucional - Pontificia Universidad Javerianarepourl:https://repository.javeriana.edu.cospaAtribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacionalhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/info:eu-repo/semantics/openAccessDe acuerdo con la naturaleza del uso concedido, la presente licencia parcial se otorga a título gratuito por el máximo tiempo legal colombiano, con el propósito de que en dicho lapso mi (nuestra) obra sea explotada en las condiciones aquí estipuladas y para los fines indicados, respetando siempre la titularidad de los derechos patrimoniales y morales correspondientes, de acuerdo con los usos honrados, de manera proporcional y justificada a la finalidad perseguida, sin ánimo de lucro ni de comercialización. De manera complementaria, garantizo (garantizamos) en mi (nuestra) calidad de estudiante (s) y por ende autor (es) exclusivo (s), que la Tesis o Trabajo de Grado en cuestión, es producto de mi (nuestra) plena autoría, de mi (nuestro) esfuerzo personal intelectual, como consecuencia de mi (nuestra) creación original particular y, por tanto, soy (somos) el (los) único (s) titular (es) de la misma. Además, aseguro (aseguramos) que no contiene citas, ni transcripciones de otras obras protegidas, por fuera de los límites autorizados por la ley, según los usos honrados, y en proporción a los fines previstos; ni tampoco contempla declaraciones difamatorias contra terceros; respetando el derecho a la imagen, intimidad, buen nombre y demás derechos constitucionales. Adicionalmente, manifiesto (manifestamos) que no se incluyeron expresiones contrarias al orden público ni a las buenas costumbres. En consecuencia, la responsabilidad directa en la elaboración, presentación, investigación y, en general, contenidos de la Tesis o Trabajo de Grado es de mí (nuestro) competencia exclusiva, eximiendo de toda responsabilidad a la Pontifica Universidad Javeriana por tales aspectos. Sin perjuicio de los usos y atribuciones otorgadas en virtud de este documento, continuaré (continuaremos) conservando los correspondientes derechos patrimoniales sin modificación o restricción alguna, puesto que, de acuerdo con la legislación colombiana aplicable, el presente es un acuerdo jurídico que en ningún caso conlleva la enajenación de los derechos patrimoniales derivados del régimen del Derecho de Autor. De conformidad con lo establecido en el artículo 30 de la Ley 23 de 1982 y el artículo 11 de la Decisión Andina 351 de 1993, “Los derechos morales sobre el trabajo son propiedad de los autores”, los cuales son irrenunciables, imprescriptibles, inembargables e inalienables. En consecuencia, la Pontificia Universidad Javeriana está en la obligación de RESPETARLOS Y HACERLOS RESPETAR, para lo cual tomará las medidas correspondientes para garantizar su observancia.http://purl.org/coar/access_right/c_abf2reponame:Repositorio Universidad Javerianainstname:Pontificia Universidad Javerianainstacron:Pontificia Universidad Javeriana2022-04-29T19:22:20Z