Evaluación de la respuesta del TGF-beta y los linfocitos t residentes de memoria intestinales y esplénicos durante la infección por rotavirus en un modelo múrido
El rotavirus (RV) es uno de los principales agentes causales de gastroenteritis aguda infantil. Para el año 2015 la infección por rotavirus generó el 29.3% de todas las muertes por diarrea en niños menores de 5 años. Las características de la respuesta inmune protectora inducida contra el rotavirus...
- Autores:
- Tipo de recurso:
- masterThesis
- Fecha de publicación:
- 2022
- Institución:
- Pontificia Universidad Javeriana
- Repositorio:
- Repositorio Universidad Javeriana
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- oai:repository.javeriana.edu.co:10554/62098
- Palabra clave:
- Rotavirus
Linfocitos T residentes de memoria
Múrido
Factor de crecimiento transformante β
Rotavirus
Murid
Resident memory T cells
Transforming growth factor β
Maestría en ciencias biológicas - Tesis y disertaciones académicas
Rotavirus
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Infecciones
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Evaluación de la respuesta del TGF-beta y los linfocitos t residentes de memoria intestinales y esplénicos durante la infección por rotavirus en un modelo múrido Montenegro Chávez, Catherine Rotavirus Linfocitos T residentes de memoria Múrido Factor de crecimiento transformante β Rotavirus Murid Resident memory T cells Transforming growth factor β Maestría en ciencias biológicas - Tesis y disertaciones académicas Rotavirus Células T Infecciones |
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El rotavirus (RV) es uno de los principales agentes causales de gastroenteritis aguda infantil. Para el año 2015 la infección por rotavirus generó el 29.3% de todas las muertes por diarrea en niños menores de 5 años. Las características de la respuesta inmune protectora inducida contra el rotavirus no se conocen en detalle. Existe desconocimiento de dos componentes inmunológicos importantes: el papel del Factor de crecimiento transformante β (TGFβ) y el de los linfocitos T residentes de memoria (LTrm). En el presente trabajo se evaluaron estos dos componentes durante la infección por rotavirus en ratones. Para cumplir nuestro primer objetivo, ratones C57BL/6 neonatos fueron inoculados con mock (control negativo) o con rotavirus homólogo (RV-EC) o heterólogo (RRV). A los días 2, 4, 6, 8 y 12 post-infección (PI) se evaluaron los niveles de mRNA del gen TGFβ en bazo e intestino delgado y los niveles de proteína de TGFβ1 en el contenido intestinal y el suero. Los resultados sugieren que los ratones neonatos infectados con RRV y RV-EC presentan cambios en la expresión del mRNA de tgfb1 y/o de la proteína TGFβ1 a nivel sistémico e intestinal a diferentes días PI. Nuestro segundo objetivo buscó evaluar la frecuencia y el fenotipo de los linfocitos T residentes de memoria intestinales (LTrmi) y esplénicos, totales y específicos de RV, en ratones infectados con el RRV. Inicialmente, se usaron ratones C57BL/6 adultos para estandarizar el aislamiento y tinción de LTrm de bazo e intestino delgado. Posteriormente, ratones C57BL/6 adultos fueron inoculados con 10_7 UFF de RRV o mock. A los 7 días post-infección (DPI) se realizó una tinción intravascular (IV) usando un anticuerpo anti-CD45.2 (marcador presente en todos los leucocitos), se practicó eutanasia y se extrajo una muestra de sangre, el bazo y el intestino delgado. Las células extraídas de estos órganos se tiñeron con marcadores de superficie y tetrámeros específicos de rotavirus y se analizaron por citometría espectral. Así, se describió el fenotipo y la frecuencia de los LTrm (totales y específicos de RRV) y se analizaron los marcadores de importancia para el desarrollo, regulación y mantenimiento de este subconjunto de linfocitos T (LT) en ratones adultos control (bazo, linfocitos de lámina propia (LPL) y linfocitos intraepiteliales (IEL) de intestino delgado) e infectados con RRV (bazo).Se identificó que al día 7 PI los LT IV (CD45.2+) circulantes aislados de bazo CD8+ específicos de RV fueron probablemente activados en intestino y presentan principalmente un fenotipo de LT efectores de corta vida (SLEC), a diferencia de los LT no IV (CD45.2-) residentes con una mayor diferenciación hacía LT precursores de memoria (MPEC). Nuestro siguiente objetivo, contemplado en un nuevo proyecto en curso, es evaluar el papel del TGF-Beta en la generación de los LTrmi. |
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Evaluación de la respuesta del TGF-beta y los linfocitos t residentes de memoria intestinales y esplénicos durante la infección por rotavirus en un modelo múridoEvaluation of the response of TGF-beta and intestinal and splenic memory resident t lymphocytes during rotavirus infection in a murid modelMontenegro Chávez, CatherineRotavirusLinfocitos T residentes de memoriaMúridoFactor de crecimiento transformante βRotavirusMuridResident memory T cellsTransforming growth factor βMaestría en ciencias biológicas - Tesis y disertaciones académicasRotavirusCélulas TInfeccionesEl rotavirus (RV) es uno de los principales agentes causales de gastroenteritis aguda infantil. Para el año 2015 la infección por rotavirus generó el 29.3% de todas las muertes por diarrea en niños menores de 5 años. Las características de la respuesta inmune protectora inducida contra el rotavirus no se conocen en detalle. Existe desconocimiento de dos componentes inmunológicos importantes: el papel del Factor de crecimiento transformante β (TGFβ) y el de los linfocitos T residentes de memoria (LTrm). En el presente trabajo se evaluaron estos dos componentes durante la infección por rotavirus en ratones. Para cumplir nuestro primer objetivo, ratones C57BL/6 neonatos fueron inoculados con mock (control negativo) o con rotavirus homólogo (RV-EC) o heterólogo (RRV). A los días 2, 4, 6, 8 y 12 post-infección (PI) se evaluaron los niveles de mRNA del gen TGFβ en bazo e intestino delgado y los niveles de proteína de TGFβ1 en el contenido intestinal y el suero. Los resultados sugieren que los ratones neonatos infectados con RRV y RV-EC presentan cambios en la expresión del mRNA de tgfb1 y/o de la proteína TGFβ1 a nivel sistémico e intestinal a diferentes días PI. Nuestro segundo objetivo buscó evaluar la frecuencia y el fenotipo de los linfocitos T residentes de memoria intestinales (LTrmi) y esplénicos, totales y específicos de RV, en ratones infectados con el RRV. Inicialmente, se usaron ratones C57BL/6 adultos para estandarizar el aislamiento y tinción de LTrm de bazo e intestino delgado. Posteriormente, ratones C57BL/6 adultos fueron inoculados con 10_7 UFF de RRV o mock. A los 7 días post-infección (DPI) se realizó una tinción intravascular (IV) usando un anticuerpo anti-CD45.2 (marcador presente en todos los leucocitos), se practicó eutanasia y se extrajo una muestra de sangre, el bazo y el intestino delgado. Las células extraídas de estos órganos se tiñeron con marcadores de superficie y tetrámeros específicos de rotavirus y se analizaron por citometría espectral. Así, se describió el fenotipo y la frecuencia de los LTrm (totales y específicos de RRV) y se analizaron los marcadores de importancia para el desarrollo, regulación y mantenimiento de este subconjunto de linfocitos T (LT) en ratones adultos control (bazo, linfocitos de lámina propia (LPL) y linfocitos intraepiteliales (IEL) de intestino delgado) e infectados con RRV (bazo).Se identificó que al día 7 PI los LT IV (CD45.2+) circulantes aislados de bazo CD8+ específicos de RV fueron probablemente activados en intestino y presentan principalmente un fenotipo de LT efectores de corta vida (SLEC), a diferencia de los LT no IV (CD45.2-) residentes con una mayor diferenciación hacía LT precursores de memoria (MPEC). Nuestro siguiente objetivo, contemplado en un nuevo proyecto en curso, es evaluar el papel del TGF-Beta en la generación de los LTrmi.Rotavirus (RV) is one of the main causal agents of childhood acute gastroenteritis. In 2015, rotavirus infection generated 29.3% of all deaths from diarrhea in children under 5 years of age. The characteristics of the protective immune response induced against rotavirus are not known in detail. Two important immunological components are unknown: the role of transforming growth factor β (TGFβ) and resident memory T lymphocytes (LTrm). In the present work, these components were evaluated during rotavirus infection in mice. To meet our first objective, neonatal C57BL/6 mice were inoculated with mock (negative control) or with homologous (RV-EC) or heterologous (RRV) rotavirus. At days 2, 4, 6, 8, and 12 post-infection (PI) the mRNA levels of the TGFβ gene in the spleen and small intestine, and the protein levels of TGFβ1 in the intestinal content and serum were evaluated. The results suggest that neonatal mice infected with RRV and RV-EC show changes in the expression of tgfb1 mRNA and/or TGFβ1 protein at the systemic and intestinal level at different PI days. Our second objective sought to evaluate the frequency and phenotype of total and RV-specific intestinal memory resident T cells (LTrmi) and splenic T cells in RRV-infected mice. Initially, adult C57BL/6 mice were used to standardize the isolation and staining of LTrm from the spleen and small intestine. Subsequently, adult C57BL/6 mice were inoculated with 10_7 FFU of RRV or mock. At 7 days post-infection (DPI), intravascular (IV) staining was performed using an anti-CD45.2 antibody (marker present in all leukocytes), euthanasia was performed, and a blood sample, spleen, and small intestine were extracted. Cells extracted from these organs were stained with rotavirus-specific tetramer and surface markers and were analyzed by spectral cytometry. Thus, the phenotype and frequency of LTrms (total and RRV-specific) were described, and markers important for the development, regulation, and maintenance of this subset of T cells in adult control and infected with RRV mice were analyzed (spleen, lymphocytes lamina propria (LPL) and intraepithelial lymphocytes (IEL) from the small intestine). It was identified that at day 7 PI the IV (CD45.2+) CD8+ specific for RV T cells isolated from the spleen were probably activated in the intestine and showed a short-lived effector T cells (SLEC) phenotype, unlike non-IV (CD45.2-) resident T cells with a greater differentiation towards memory precursor T cells (MPEC). Our next objective, contemplated in a new ongoing project, is to evaluate the role of TGF-beta in the generation of LTrmi.Magíster en Ciencias BiológicasMaestríaPontificia Universidad JaverianaMaestría en Ciencias BiológicasFacultad de CienciasFranco Cortes, Manuel AntonioRoa Molina, Nelly StellaVelilla Hernandez, Paula AndreaLasso Apráez, Paola Verónica2022-10-14T13:04:48Z2022-10-14T13:04:48Z2022http://purl.org/coar/version/c_ab4af688f83e57aaTesis/Trabajo de grado - Monografía - Maestríahttp://purl.org/coar/resource_type/c_bdccinfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionPDFapplication/pdfapplication/pdfapplication/pdfapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10554/62098https://doi.org/10.11144/Javeriana.10554.62098instname:Pontificia Universidad Javerianareponame:Repositorio Institucional - Pontificia Universidad Javerianarepourl:https://repository.javeriana.edu.cospaAtribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacionalhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/info:eu-repo/semantics/openAccessDe acuerdo con la naturaleza del uso concedido, la presente licencia parcial se otorga a título gratuito por el máximo tiempo legal colombiano, con el propósito de que en dicho lapso mi (nuestra) obra sea explotada en las condiciones aquí estipuladas y para los fines indicados, respetando siempre la titularidad de los derechos patrimoniales y morales correspondientes, de acuerdo con los usos honrados, de manera proporcional y justificada a la finalidad perseguida, sin ánimo de lucro ni de comercialización. De manera complementaria, garantizo (garantizamos) en mi (nuestra) calidad de estudiante (s) y por ende autor (es) exclusivo (s), que la Tesis o Trabajo de Grado en cuestión, es producto de mi (nuestra) plena autoría, de mi (nuestro) esfuerzo personal intelectual, como consecuencia de mi (nuestra) creación original particular y, por tanto, soy (somos) el (los) único (s) titular (es) de la misma. Además, aseguro (aseguramos) que no contiene citas, ni transcripciones de otras obras protegidas, por fuera de los límites autorizados por la ley, según los usos honrados, y en proporción a los fines previstos; ni tampoco contempla declaraciones difamatorias contra terceros; respetando el derecho a la imagen, intimidad, buen nombre y demás derechos constitucionales. Adicionalmente, manifiesto (manifestamos) que no se incluyeron expresiones contrarias al orden público ni a las buenas costumbres. En consecuencia, la responsabilidad directa en la elaboración, presentación, investigación y, en general, contenidos de la Tesis o Trabajo de Grado es de mí (nuestro) competencia exclusiva, eximiendo de toda responsabilidad a la Pontifica Universidad Javeriana por tales aspectos. Sin perjuicio de los usos y atribuciones otorgadas en virtud de este documento, continuaré (continuaremos) conservando los correspondientes derechos patrimoniales sin modificación o restricción alguna, puesto que, de acuerdo con la legislación colombiana aplicable, el presente es un acuerdo jurídico que en ningún caso conlleva la enajenación de los derechos patrimoniales derivados del régimen del Derecho de Autor. De conformidad con lo establecido en el artículo 30 de la Ley 23 de 1982 y el artículo 11 de la Decisión Andina 351 de 1993, "Los derechos morales sobre el trabajo son propiedad de los autores", los cuales son irrenunciables, imprescriptibles, inembargables e inalienables. En consecuencia, la Pontificia Universidad Javeriana está en la obligación de RESPETARLOS Y HACERLOS RESPETAR, para lo cual tomará las medidas correspondientes para garantizar su observancia.http://purl.org/coar/access_right/c_abf2reponame:Repositorio Universidad Javerianainstname:Pontificia Universidad Javerianainstacron:Pontificia Universidad Javeriana2023-05-30T21:15:05Z |