Estandarización de primers para evaluar genes housekeeping de la línea 3T3-L1
La obesidad es una enfermedad multifactorial, altamente compleja y su prevalencia ha venido en aumento en los últimos años. Una manera de contribuir al conocimiento en esta área es por medio de la evaluación de la expresión génica, y las técnicas de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR), PCR con...
- Autores:
-
Cuesta Amaya, Ana María
- Tipo de recurso:
- Trabajo de grado de pregrado
- Fecha de publicación:
- 2021
- Institución:
- Pontificia Universidad Javeriana
- Repositorio:
- Repositorio Universidad Javeriana
- Idioma:
- spa
- OAI Identifier:
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- Acceso en línea:
- http://hdl.handle.net/10554/58208
- Palabra clave:
- Primers
3T3-L1
ACTB
GAPDH
RNA 18s
PCR
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La obesidad es una enfermedad multifactorial, altamente compleja y su prevalencia ha venido en aumento en los últimos años. Una manera de contribuir al conocimiento en esta área es por medio de la evaluación de la expresión génica, y las técnicas de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR), PCR con Transcriptasa Inversa (RT-PCR) y PCR en tiempo real (qPCR), son los métodos más confiables y utilizados. A pesar de que existen múltiples reportes de genes housekeeping para la línea 3T3-L1, aún se encuentran deficiencias en los diseños de los primers, y esto puede generar resultados poco confiables. Es así como, en este estudio se evaluó la eficacia de una pareja de primers (uno reportado en la literatura y otro diseñado por el autor) para Beta Actina (ACTB), Gliceraldehído 3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH) y ARN ribosomal 18s (RNA 18s) en la línea 3T3-L1, con el fin de estandarizar su uso para posteriores montajes experimentales en estas células. Para futuros ensayos se recomienda usar una concentración de 1500ng de ADNc para ACTB-1, ACTB-2, GAPDH-1 y 1000 ng de ADNc RNA18s-1 para obtener resultados confiables y verificables. |
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Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacionalhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/info:eu-repo/semantics/openAccessDe acuerdo con la naturaleza del uso concedido, la presente licencia parcial se otorga a título gratuito por el máximo tiempo legal colombiano, con el propósito de que en dicho lapso mi (nuestra) obra sea explotada en las condiciones aquí estipuladas y para los fines indicados, respetando siempre la titularidad de los derechos patrimoniales y morales correspondientes, de acuerdo con los usos honrados, de manera proporcional y justificada a la finalidad perseguida, sin ánimo de lucro ni de comercialización. De manera complementaria, garantizo (garantizamos) en mi (nuestra) calidad de estudiante (s) y por ende autor (es) exclusivo (s), que la Tesis o Trabajo de Grado en cuestión, es producto de mi (nuestra) plena autoría, de mi (nuestro) esfuerzo personal intelectual, como consecuencia de mi (nuestra) creación original particular y, por tanto, soy (somos) el (los) único (s) titular (es) de la misma. Además, aseguro (aseguramos) que no contiene citas, ni transcripciones de otras obras protegidas, por fuera de los límites autorizados por la ley, según los usos honrados, y en proporción a los fines previstos; ni tampoco contempla declaraciones difamatorias contra terceros; respetando el derecho a la imagen, intimidad, buen nombre y demás derechos constitucionales. Adicionalmente, manifiesto (manifestamos) que no se incluyeron expresiones contrarias al orden público ni a las buenas costumbres. En consecuencia, la responsabilidad directa en la elaboración, presentación, investigación y, en general, contenidos de la Tesis o Trabajo de Grado es de mí (nuestro) competencia exclusiva, eximiendo de toda responsabilidad a la Pontifica Universidad Javeriana por tales aspectos. Sin perjuicio de los usos y atribuciones otorgadas en virtud de este documento, continuaré (continuaremos) conservando los correspondientes derechos patrimoniales sin modificación o restricción alguna, puesto que, de acuerdo con la legislación colombiana aplicable, el presente es un acuerdo jurídico que en ningún caso conlleva la enajenación de los derechos patrimoniales derivados del régimen del Derecho de Autor. De conformidad con lo establecido en el artículo 30 de la Ley 23 de 1982 y el artículo 11 de la Decisión Andina 351 de 1993, "Los derechos morales sobre el trabajo son propiedad de los autores", los cuales son irrenunciables, imprescriptibles, inembargables e inalienables. En consecuencia, la Pontificia Universidad Javeriana está en la obligación de RESPETARLOS Y HACERLOS RESPETAR, para lo cual tomará las medidas correspondientes para garantizar su observancia.http://purl.org/coar/access_right/c_abf2Morales Álvarez, Ludis del RosarioIglesias Jiménez, José AlfredoCuesta Amaya, Ana MaríaAristizábal Pachón, Andrés Felipe2021-12-14T18:19:02Z2021-12-14T18:19:02Z2021-12-09http://hdl.handle.net/10554/58208instname:Pontificia Universidad Javerianareponame:Repositorio Institucional - Pontificia Universidad Javerianarepourl:https://repository.javeriana.edu.coLa obesidad es una enfermedad multifactorial, altamente compleja y su prevalencia ha venido en aumento en los últimos años. Una manera de contribuir al conocimiento en esta área es por medio de la evaluación de la expresión génica, y las técnicas de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR), PCR con Transcriptasa Inversa (RT-PCR) y PCR en tiempo real (qPCR), son los métodos más confiables y utilizados. A pesar de que existen múltiples reportes de genes housekeeping para la línea 3T3-L1, aún se encuentran deficiencias en los diseños de los primers, y esto puede generar resultados poco confiables. Es así como, en este estudio se evaluó la eficacia de una pareja de primers (uno reportado en la literatura y otro diseñado por el autor) para Beta Actina (ACTB), Gliceraldehído 3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH) y ARN ribosomal 18s (RNA 18s) en la línea 3T3-L1, con el fin de estandarizar su uso para posteriores montajes experimentales en estas células. Para futuros ensayos se recomienda usar una concentración de 1500ng de ADNc para ACTB-1, ACTB-2, GAPDH-1 y 1000 ng de ADNc RNA18s-1 para obtener resultados confiables y verificables.Obesity is a highly complex multifactorial disease and its prevalence has been increasing in recent years. One way to contribute to knowledge in this area is through the evaluation of gene expression, and the techniques of Polymerase Chain Reaction (PCR), Reverse Transcriptase PCR (RT-PCR) and real-time PCR (qPCR), are the most reliable and widely used methods. Although there are multiple reports of housekeeping genes for the 3T3-L1 line, there are still deficiencies in the primer designs, and this can generate unreliable results. Thus, in this study, the efficacy of a pair of primers was evaluated (one reported in the literature and another designed by the author) for Beta Actin (ACTB), Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) and ribosomal RNA 18s (RNA 18s) in the 3T3-L1 line, in order to standardize its use for subsequent experimental setups in these cells. For future assays it is recommended to use a concentration of 1500ng of cDNA for ACTB-1, ACTB-2, GAPDH-1 and 1000ng of RNA18s-1 cDNA to obtain reliable and verifiable results.Biólogo (a)PregradoPDFapplication/pdfspaPontificia Universidad JaverianaBiologíaFacultad de CienciasPrimers3T3-L1ACTBGAPDHRNA 18sPCRqPCRPrimers3T3-L1ACTBGAPDHRNA 18sPCRqPCRBiología - Tesis y disertaciones académicasTapaporosObesidadExpresión génicaEstandarización de primers para evaluar genes housekeeping de la línea 3T3-L1Standardization of primers to evaluate housekeeping genes of the 3T3-L1 lineTesis/Trabajo de grado - Monografía - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1finfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisORIGINALTesis Final a Dic 02 -2021 Rev. AA.pdfTesis Final a Dic 02 -2021 Rev. 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